Name: Espátula Montevideo Dispositivo para la vitrificación de embriones de mamíferos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T15:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Aprenda el protocolo Espátula Montevideo para vitrificar embriones de ratón y oveja preimplantación. Este método eficiente utiliza herramientas caseras y soluciones crioprotectoras para lograr altas tasas de supervivencia post-descongelación.

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Los animales utilizados para la obtención de embriones de ratón fueron alojados y manipulados de acuerdo con la ley nacional 18.611 y las directrices internacionales de cuidado animal11. El protocolo experimental (permiso número #007-18) fue aprobado oportunamente por el Comité de Cuidado y Uso de Animales del Institut Pasteur de Montevideo (se dio consentimiento por escrito). Los protocolos experimentales para ovocitos/embriones de oveja fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado Animal Fundación IRAUy (protocolo #001-2017), cumpliendo con las directrices ARRIVE12 y se llevaron a cabo de acuerdo con las guías internacionales de cuidado animal11.
1. Vitrificación (Figura 2)
<ol>
	<li>Preparación de la espátula MVD<ol>
		<li>Acorte la punta del cargador de gel (ver Tabla de Materiales) cortando los primeros 10 mm y el cono de la punta. NOTA: Esto crea una punta más corta y recta, lo que facilita el sellado final con la pajita de 0,5 mL (ver Tabla de Materiales).</li>
		<li>Sujete el extremo de la punta del cargador de gel con pinzas de relojero #5 (ver Tabla de Materiales) aproximadamente a 1,0 cm de la punta. Coloque suavemente la punta en la llama de un mechero Bunsen (consulte la Tabla de materiales) y manténgala durante 8-10 s para formar una plataforma en forma de pétalo de aproximadamente 1 mm2.</li>
		<li>Retirar de la llama y sujetar firmemente con las pinzas durante 5 s.</li>
		<li>Con un microscopio estereoscópico (ver Tabla de Materiales), verifique que la plataforma en forma de pétalo (~ 1 mm2) esté formada y que el borde distal esté sellado. NOTA: La plataforma debe estar cerrada en el extremo distal para evitar la infiltración de LN2 durante la vitrificación. Asegúrese de que la plataforma esté limpia y libre de hilos de plástico. Si es demasiado pequeño o tiene hilos, recorte la punta y repita el procedimiento.</li>
		<li>Repita los pasos 1.1.1-1.1.4 para preparar el número necesario de espátulas (1 espátula = hasta 40 embriones de ratón).</li>
		<li>Esterilice las espátulas con rayos ultravioleta (UV) u óxido de etileno y guárdelas en un tubo o caja estéril.</li>
		<li>El día de la vitrificación, recupere las espátulas, manipulándolas desde el extremo opuesto de la plataforma. Inserte una varilla de identificación (ver Tabla de Materiales) en cada espátula y colóquelas en la base del microscopio estereoscópico. Etiquete la varilla con un marcador permanente o una etiqueta adhesiva resistente al nitrógeno líquido. NOTA: Evite siempre tocar la plataforma al manipular las espátulas. La longitud total del dispositivo completo (espátula + pajita de 0,5 mL + varilla de identificación) no debe exceder más de 1 cm de la longitud de la copa.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Preparación de soluciones de vitrificación<ol>
		<li>Preparar la solución FS: Disuelva 1,5 g de medio de gradiente de densidad (ver Tabla de Materiales) y 0,85 g de sacarosa (ver Tabla de Materiales) en 5 mL de solución salina tamponada con fosfato (PBS; ver Tabla de Materiales). Calentar en un baño de agua hirviendo hasta que se disuelva por completo, luego esterilizar con un filtro de 0,22 μm (ver Tabla de Materiales). NOTA: Esta solución puede almacenarse a 4 °C durante un máximo de 6 meses.</li>
		<li>Preparar la solución de previtrificación (PV): El día de la vitrificación, mezcle un 10% de etilenglicol (ver Tabla de Materiales), un 10% de dimetilsulfóxido (ver Tabla de Materiales) y un 80% de medio M2 (ver Tabla de Materiales). Se necesita un volumen total de 100 μL para 5 espátulas.</li>
		<li>Prepare la solución de vitrificación (V): El día de la vitrificación, combine un 15 % de etilenglicol, un 15 % de dimetilsulfóxido, un 10 % de medio M2 y una solución de FS al 60 %. Se requiere un volumen total de 100 μL para 5 espátulas.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Proceso de deshidratación y vitrificación embrionaria<ol>
		<li>Prepare LN2: Vierta LN2 en un recipiente adecuado (por ejemplo, un recipiente de poliestireno aislado de 10 cm x 30 cm x 20 cm) y coloque tantas pajitas de 0,5 ml como espátulas para usar. NOTA: Para facilitar la visualización de la plataforma de la espátula durante la manipulación bajo LN2, se sugiere que se utilice un contenedor de poliestireno con aislamiento inferior de color para crear un efecto de contraste. PRECAUCIÓN: Use gafas y guantes apropiados (consulte la Tabla de materiales) cuando manipule LN2.</li>
		<li>Preparar soluciones: En una placa de Petri de plástico de 100 mm (ver Tabla de Materiales), coloque las siguientes gotas: 100 μL de M2, 20 μL de solución PV y 20 μL de solución V para cada espátula.</li>
		<li>Vitrificar embriones: Colocar los embriones a vitrificar en la gota M2. Manipule de 30 a 40 embriones a la vez, incubándolos en la gota de solución PV durante 30 s y luego en la gota de solución V durante otros 30 s a temperatura ambiente (RT).</li>
		<li>Utilice un capilar de vidrio estirado (consulte la Tabla de Materiales) con un conjunto de tubo aspirador (consulte la Tabla de Materiales). Precargue el capilar con al menos 1 μL de la solución respectiva antes de colocar los embriones. NOTA: Los embriones estarán a diferentes alturas en las gotas, así que ajuste el micrómetro del microscopio estereoscópico para localizarlos. Recupere los embriones de cada gota cuando queden 10 s. Todas las manipulaciones embrionarias deben realizarse bajo el microscopio estereoscópico.</li>
		<li>Cargar embriones: Aspire los embriones utilizando una solución V mínima (por ejemplo, ~ 0,1 μL) y colóquelos rápidamente en la plataforma de la espátula.</li>
		<li>Inmersión en LN2: Después de cargar los embriones, sumergir inmediatamente la plataforma de la espátula en LN2 durante 5 s (sujetando la espátula con la mano, por su varilla). Luego, mientras mantiene la espátula en vapores LN2 , séllela con una pajita de 0,5 ml con pinzas largas de acero inoxidable (consulte la tabla de materiales). NOTA: Retire el LN2 de la pajita antes de sellar para evitar la expansión durante el calentamiento. Asegúrese de que la espátula y la pajita estén alineadas correctamente para evitar el contacto entre la gota del embrión y la pared de la pajita. Para mayor comodidad, las espátulas selladas pueden permanecer en el contenedor LN2 hasta que todas las espátulas estén cargadas con embriones, rellenando con LN2 según sea necesario.</li>
		<li>Repita el procedimiento: Repita los pasos 1.3.3 a 1.3.7 para cada grupo de embriones, utilizando un par de gotas frescas de PV y V.</li>
		<li>Almacenamiento: Transfiera las espátulas a las copas (ver Tabla de Materiales) y luego a un depósito de LN2 (ver Tabla de Materiales).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68176/68176fig02.jpg"> 
Figura 2: Esquema del proceso de vitrificación con Espátula MVD. Consulte el texto para obtener más detalles. Creado en BioRender. Meikle, M. (2025) https://BioRender.com/x96y902. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68176/68176fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
2. Calentamiento (Figura 3)
<ol>
	<li>Preparación de la solución<ol>
		<li>Preparar una solución de sacarosa 1 M disolviendo 0,85 g de sacarosa en 2,5 mL de medio M2. Esterilice la solución con un filtro de 0,22 μm. NOTA: Esta solución puede prepararse y almacenarse a 4 °C durante un máximo de 1 semana.</li>
		<li>Prepare soluciones de sacarosa de 0,5 M y 0,25 M diluyendo la solución de sacarosa de 1 M con el volumen adecuado de medio M2.</li>
		<li>Mantenga las soluciones de sacarosa a 37 °C en una placa caliente (ver Tablas de Materiales) hasta que comience el calentamiento.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Preparación de la placa de calentamiento<ol>
		<li>En una placa de Petri de plástico de 100 mm, coloque las siguientes gotas de solución: una gota de 500 μL de sacarosa de 0,5 M, una gota de 50 μL de sacarosa de 0,5 M y una gota de 50 μL de sacarosa de 0,25 M por cada espátula a calentar. Coloque tres gotas de medio M2 (100 μL cada una) para lavar.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Proceso de calentamiento NOTA: El proceso de calentamiento tiene lugar a RT, por ejemplo, 20-22 °C sobre la base de un microscopio estereoscópico.<ol>
		<li>Recupera las espátulas selladas del dewar. Colóquelos en un recipiente apropiado con LN2. Véase la figura 3.</li>
		<li>Coloque la placa calefactora en el microscopio estereoscópico. Una a la vez, sostenga la base de la espátula con pinzas de acero inoxidable y, con una mano enguantada, saque la varilla de identificación y luego la pajita. Sumerja rápidamente la plataforma que contiene los embriones en la gota de sacarosa de 0,5 M de 500 μL.</li>
		<li>Asegurarse de que todos los embriones hayan caído en la gota; Si es necesario, mueva suavemente la espátula para ayudar a su liberación. Cargue los embriones en un capilar de vidrio extraído, colóquelos en la gota de 50 μL de solución de sacarosa de 0,5 M e incube durante 2 minutos.</li>
		<li>Colocar los embriones en la gota de 50 μL de solución de sacarosa 0,25 M e incubar durante otros 2 min. NOTA: Antes de colocar los embriones en cada solución, precargue el capilar con la solución a utilizar.</li>
		<li>Por último, lavar los embriones tres veces en diferentes gotas de medio M2 para eliminar la sacarosa.</li>
		<li>Incubar los embriones en condiciones apropiadas para cada especie durante al menos 1 h antes de su uso.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68176/68176fig03.jpg"> 
Figura 3: Esquema del proceso de calentamiento de la espátula MVD. Consulte el texto para obtener más detalles. Creado en BioRender. Meikle, M. (2025) https://BioRender.com/k91k191. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68176/68176fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

<ol><li>Crispo, M., Meikle, M. N., Rülicke, T. Cryopreservation of Valuable Mouse and Rat Lines. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrispo%2C+M+%22Rodent+Quality+Control%3A+Genes+and+Bugs.+Laboratory+Animal+Science+and+Medicine%22">Rodent Quality Control: Genes and Bugs. Laboratory Animal Science and Medicine</a>. , Springer. Cham. (2024).</li>
<li>Lloyd, K., Franklin, C., Lutz, C., Magnuson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproducibility%3A+use+mouse+biobanks+or+lose+them%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Reproducibility: use mouse biobanks or lose them.</a> Nature. 522 (7555), 151-153 (2015).</li>
<li>Hart-Johnson, S., Mankelow, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Archiving+genetically+altered+animals%3A+a+review+of+cryopreservation+and+recovery+methods+for+genome-edited+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Archiving genetically altered animals: a review of cryopreservation and recovery methods for genome-edited animals.</a> Lab Anim. 56 (1), 26-34 (2022).</li>
<li>Shaw, J. M., Jones, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Terminology+associated+with+vitrification+and+other+cryopreservation+procedures+for+oocytes+and+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod+Update%22%5BJournal%5D)">Terminology associated with vitrification and other cryopreservation procedures for oocytes and embryos.</a> Hum Reprod Update. 9 (6), 583-605 (2003).</li>
<li>Arav, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+of+oocytes+and+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation of oocytes and embryos.</a> Theriogenology. 81 (1), 96-102 (2014).</li>
<li>dos Santos Neto, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryotolerance+of+Day+2+or+Day+6+in+vitro+produced+ovine+embryos+after+vitrification+by+Cryotop+or+Spatula+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Cryotolerance of Day 2 or Day 6 in vitro produced ovine embryos after vitrification by Cryotop or Spatula methods.</a> Cryobiology. 70 (1), 17-22 (2015).</li>
<li>Renard, J. P., Babinet, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+survival+of+mouse+embryos+after+rapid+freezing+and+thawing+inside+plastic+straws+with+1-2+propanediol+as+cryoprotectant%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Zool%22%5BJournal%5D)">High survival of mouse embryos after rapid freezing and thawing inside plastic straws with 1-2 propanediol as cryoprotectant.</a> J Exp Zool. 230 (3), 443-448 (1984).</li>
<li>Tsang, W. H., Chow, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+embryo+cryopreservation+utilizing+a+novel+high-capacity+vitrification+spatula%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Mouse embryo cryopreservation utilizing a novel high-capacity vitrification spatula.</a> Biotechniques. 46 (7), 550-552 (2009).</li>
<li>Kuwayama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+vitrification+for+cryopreservation+of+human+oocytes+and+embryos%3A+the+Cryotop+method%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Highly efficient vitrification for cryopreservation of human oocytes and embryos: the Cryotop method.</a> Theriogenology. 67 (1), 73-80 (2007).</li>
<li>Nakao, K., Nakagata, N., Katsuki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+efficient+vitrification+procedure+for+cryopreservation+of+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Anim%22%5BJournal%5D)">Simple and efficient vitrification procedure for cryopreservation of mouse embryos.</a> Exp Anim. 46 (3), 231-234 (1997).</li>
<li>National Research Council. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+Care+and+Use+of+Laboratory+Animals%22">Guide for the Care and Use of Laboratory Animals</a>. , National Academies Press. Washington, DC. (1996).</li>
<li>du Sert, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ARRIVE+guidelines+2.0%3A+Updated+guidelines+for+reporting+animal+research%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">The ARRIVE guidelines 2.0: Updated guidelines for reporting animal research.</a> PLoS Biol. 18 (7), e3000410(2020).</li>
<li>Meikle, M. N., Schlapp, G., Menchaca, A., Crispo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimum+volume+Spatula+MVD+vitrification+method+improves+embryo+survival+compared+to+traditional+slow+freezing%2C+both+for+in+vivo+and+in+vitro+produced+mice+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Minimum volume Spatula MVD vitrification method improves embryo survival compared to traditional slow freezing, both for in vivo and in vitro produced mice embryos.</a> Cryobiology. 84, 77-81 (2018).</li>
<li>Momozawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+vitrification+of+mouse+embryos+using+the+Kitasato+Vitrification+System+as+a+novel+vitrification+device%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Efficient vitrification of mouse embryos using the Kitasato Vitrification System as a novel vitrification device.</a> Reprod Biol Endocrinol. 15 (1), 29(2017).</li>
<li>Stringfellow, D. A., Givens, M. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStringfellow%2C+DA+%22Manual+of+the+International+Embryo+Transfer+Society%3A+A+Procedural+Guide+and+General+Information+for+the+use+of+Embryo+Transfer+Technology+Emphasizing+Sanitary+Procedures%22">Manual of the International Embryo Transfer Society: A Procedural Guide and General Information for the use of Embryo Transfer Technology Emphasizing Sanitary Procedures</a>. , International Embryo Transfer Society. (2010).</li>
<li>Dos Santos-Neto, P. C., Cuadro, F., Barrera, N., Crispo, M., Menchaca, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryo+survival+and+birth+rate+after+minimum+volume+vitrification+or+slow+freezing+of+in+vivo+and+in+vitro+produced+ovine+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Embryo survival and birth rate after minimum volume vitrification or slow freezing of in vivo and in vitro produced ovine embryos.</a> Cryobiology. 78, 8-14 (2017).</li>
<li>Schlapp, G., Meikle, M. N., Pórfido, J. L., Menchaca, A., Crispo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zygote+cryobanking+applied+to+CRISPR%2FCas9+microinjection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Zygote cryobanking applied to CRISPR/Cas9 microinjection in mice.</a> PLoS One. 19 (7), e0306617(2024).</li>
<li>Kamoshita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+of+oocyte%2Fembryo+vitrification+in+mammals+from+rodents+and+large+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Sci+J%22%5BJournal%5D)">Recent advances of oocyte/embryo vitrification in mammals from rodents and large animals.</a> Anim Sci J. 95 (1), e13931(2024).</li>
<li>Qiu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equilibrium+vitrification+of+mouse+embryos+using+low+concentrations+of+cryoprotectants%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Equilibrium vitrification of mouse embryos using low concentrations of cryoprotectants.</a> Cryobiology. 98, 127-133 (2021).</li>
<li>Tsang, W. H., Chow, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+of+mammalian+embryos%3A+Advancement+of+putting+life+on+hold%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res+C+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation of mammalian embryos: Advancement of putting life on hold.</a> Birth Defects Res C Embryo Today. 90 (3), 163-175 (2010).</li>
</ol>

La eficiencia de la generación de animales genéticamente modificados (GM) ha aumentado significativamente debido al desarrollo de métodos basados en endonucleasas, en particular CRISPR/Cas9. Muchos laboratorios en todo el mundo producen varias líneas de ratones y ratas transgénicos que deben ser criopreservadas para evitar la deriva genética y mantener la integridad delfenotipo original. Además, el archivo elimina la necesidad de una cría constante, que a menudo resulta en un número excesivo de animales. Algunos laboratorios envían líneas de ratones transgénicos como embriones criopreservados o esperma a repositorios internacionales, lo que facilita el intercambio de estos modelos y evita el transporte de animales vivos. Esto garantiza la accesibilidad a las líneas sin la generación repetitiva de modelos animales modificados genéticamente idénticos2. Por estas razones, la criopreservación de embriones y espermatozoides es primordial en cualquier instalación de animales modificados genéticamente. Por lo general, se prefiere la criopreservación de embriones para almacenar líneas transgénicas porque los embriones contienen el genoma diploide completo con modificaciones y se pueden recuperar fácilmente mediante la transferencia de embriones.
La vitrificación es un proceso de no equilibrio caracterizado por un desequilibrio entre el agua que entra en la célula y el agua que forma cristales extracelulares a su alrededor. Este método evita la formación de cristales de hielo intracelular, distinguiéndolo del método de congelación lenta (SLF)3 (ver Figura 1). La alta concentración de crioprotectores y el contacto directo con el nitrógeno líquido (LN2) permiten un enfriamiento ultrarrápido (~40 °C/s), logrando un estado vítreo de las muestras en cuestión de segundos. Además, la vitrificación es más rápida, fácil y menos costosa que la congelación lenta4. Requiere un LN2 mínimo y, por lo general, emplea equipos simples que se pueden comprar comercialmente o hacer en casa5 (consulte la Figura 1).
Además, el proceso de calentamiento es generalmente rápido y replicable. Debe realizarse rápidamente para evitar la toxicidad del crioprotector y mantener el estado vítreo3. A la hora de congelar embriones, muchos laboratorios tienen en cuenta la conveniencia del dispositivo portador, su fiabilidad, robustez, capacidad de retención y costes.
Preferimos el método de vitrificación con espátula de volumen mínimo para la criopreservación rutinaria de embriones de ovejas y ratones, utilizando el dispositivo Spatula Montevideo (MVD)6. Inicialmente, empleamos el método de congelación lenta7 , pero rápidamente pasamos a la vitrificación. Para crear un dispositivo más simple y más eficiente en el espacio para el LN2 dewar, modificamos la espátula casera de Tsang y Chow (2009)8, que se conecta a un tubo criogénico, para desarrollar la espátula MVD que se sella con una pajita de 0,5 mL (ver Tabla de Materiales). La espátula cuenta con una punta de gel (ver Tabla de Materiales), donde se forma una plataforma de aproximadamente 1 mm² derritiendo suavemente la punta con pinzas finas, creando una placa en forma de pétalo para cargar los embriones. Esta plataforma puede alojar hasta 40 embriones de ratón en una pequeña gota de vitrificación. Se inserta una varilla de tapón de identificación (ver Tabla de Materiales) en el extremo abierto de la punta del cargador de gel.
El objetivo de este método es vitrificar embriones de una forma sencilla, rápida y económica que, además, ahorra espacio en el dewar de nitrógeno. Este sistema se ha utilizado con éxito durante muchos años, proporcionando excelentes tasas de supervivencia embrionaria (~ 97%) y resultados reproductivos, particularmente en embriones de ratón. Dado que la espátula MVD se prepara en el laboratorio, es un método de bajo costo en comparación con los dispositivos comerciales9. Además, ahorra espacio en la dewar de nitrógeno en comparación con el uso de criotubos 8,10.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68176/68176fig01.jpg"> 
Figura 1: Comparación de las dos principales técnicas utilizadas para la criopreservación de embriones. Esta figura ha sido modificada con permiso de Crispo et al.1. Creado en BioRender.com. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68176/68176fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

<table><tbody><tr><td>0.22 &micro; M Filtro&nbsp;</td><td>Sartorio</td><td>16534</td><td>Filtro de jeringa Minisart 0.2 &micro; L</td></tr><tr><td>Paja de 0,5 ml</td><td>Minitubo</td><td>13408/0044</td><td>Paillette mediano tipo francés</td></tr><tr><td>Conjunto de tubo aspirador</td><td>Sigma</td><td>A5177</td><td></td></tr><tr><td>Mechero Bunsen&nbsp;</td><td>Indulab</td><td>7000134</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Etilenglicol&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>102466</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll PM70&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>F2878</td><td>Medio de gradiente de densidad</td></tr><tr><td>Punta de carga de gel</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>10411193</td><td></td></tr><tr><td>Capilar de vidrio&nbsp;</td><td>Marienfeld</td><td>2900000</td><td>Tubo capilar microhematocrito</td></tr><tr><td>Guantes para manipulación de LN2&nbsp;</td><td>Escudo de temperatura</td><td>CE0338</td><td>Cryogloves</td></tr><tr><td>Copas</td><td>Minitubo</td><td>16913/1133</td><td></td></tr><tr><td>Gafas para manejo LN2&nbsp; &nbsp;</td><td>3M</td><td>&nbsp; 40661-00000-10</td><td>Revestimiento antivaho y antiarañazos</td></tr><tr><td>Placa calefactora</td><td>Labec</td><td>LA-SH-II-5B</td><td>Modelo digital</td></tr><tr><td>Varilla de identificación</td><td>Tecnologías IMV</td><td>6326</td><td>No estéril LG48 mm</td></tr><tr><td>Contenedor aislado de espuma de poliestireno</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dewar de almacenamiento LN2</td><td>Taylor-Wharton</td><td>XT21-AI</td><td>Criociencia</td></tr><tr><td>Pinzas largas de acero inoxidable</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11000-25</td><td></td></tr><tr><td>M2&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>M7167</td><td></td></tr><tr><td>PBS&nbsp;</td><td>Casero</td><td></td><td>Fosfato Solución salina tamponada. Por lo general, se prepara 1 L de tampón concentrado 5x y luego se diluye a 1x. Receta: 40 g de cloruro de sodio, 1 g de cloruro de potasio, 7,2 g de fosfato disódico anhidro, 1,2 g de fosfato monopotásico. Añadir agua destilada y esterilizar en autoclave.</td></tr><tr><td>Placa de Petri de plástico&nbsp;</td><td>Halcón</td><td>&nbsp; &nbsp; 351029</td><td>Placa de Petri bacteriológica no tratada con TC</td></tr><tr><td>Estereomicroscopio&nbsp;</td><td>Olimpo</td><td>SZ2-LGB</td><td></td></tr><tr><td>Sacarosa&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S1888</td><td></td></tr><tr><td>Relojero' s #5 fórceps&nbsp;</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11254-20</td><td></td></tr></tbody></table>

espátula montevideo dispositivo para la vitrificación de embriones de mamíferos

Spatula Montevideo Device for the Vitrification of Mammalian Embryos

Espátula Montevideo Dispositivo para la vitrificación de embriones de mamíferos

This study describes an efficient and cost-effective vitrification method for mouse and sheep embryo cryopreservation known as the Spatula Montevideo ...

Generar modelos de ratón modificados genéticamente y luego criopreservar las líneas como respaldo. Para ello, necesitamos un método fácil, de bajo coste, eficiente y reproducible para vitrificar los embriones. La microinyección o electroporación de CRISPR-Cas9 podría realizarse en cigotos vitrificados, de ratón de calentamiento y de ganado, lo que resulta en un horario más flexible y reduce los animales en uso.La vitrificación de embriones utiliza un enfriamiento ultrarrápido para evitar la formación de cristales de hielo, preservando la integridad celular. Esta técnica avanza en la investigación criológica, permitiendo estudios sobre la viabilidad del embrión, la estabilidad genética y los resultados de almacenamiento a largo plazo. Tanto la espátula MVD como las soluciones son caseras. La espátula está sellada con una pajita de 0,5 mililitros, ocupando un espacio mínimo en el nitrógeno líquido Dewar.[Instructor] Para comenzar, corte los primeros 10 milímetros y el cono de punta de la punta de un cargador de gel. Con las pinzas número cinco del relojero, sostenga el extremo de la punta del cargador de gel aproximadamente a un centímetro de la punta y colóquelo suavemente en la lla

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La chica membrana corioalantoidea (CAM) es un entorno único, apoyo la cultura, naturalmente, inmunodeficientes para estudiar la angiogénesis y la tumorigénesis. Este artículo video demuestra las diferentes etapas de...

Pollo Ex ovo Cultura y Ex ovo CAM Ensayo: cómo funciona realmente

Este video describe la inyección pronuclear de vectores lentivirales en el espacio perivitelina de un embrión de ratón fertilizado. El lentivirus contiene el transgén, que se incorpora al genoma del embrión fecundado, dando lugar finalmente a ratones transgénicos.

Inyección de perivitelina basada en vectores lentivirales: un método para transducir el gen de interés en ovocitos de ratón unicelulares fertilizados

La transferencia de embriones útero-tubárica utiliza la unión útero-tubárica como una barrera para impedir la salida de embriones que puede ocurrir cuando se realiza la transferencia uterina. Se requieren machos vasectomizados obtener destinatarios pseudopreñadas para la transferencia de embriones. Ambas técnicas se discuten.

Transferencia de Embriones Utero-de trompas y vasectomía en el modelo de ratón

La mitosis progenitoras neurales es un parámetro crítico de la neurogénesis. Gran parte de nuestra comprensión de la mitosis progenitoras neurales se basa en el análisis de tejido fijado. Formación de imágenes en vivo en rodajas de cerebro de embriones es una técnica versátil para evaluar la mitosis con alta resolución temporal y espacial en un entorno controlado.

Imágenes en vivo de la mitosis en el desarrollo de la corteza de embriones de ratón

MicroSecure Vitrification se desarrolló como un sistema de dispositivo de vitrificación cerrado aséptico y no comercial que cumple con las buenas prácticas de fabricación y manipulación de tejidos de la FDA. Debido a la retirada de las pajuelas de embriones hidrofóbicas de la industria, el procedimiento de vitrificación se modificó para incluir un sello interior antes del tapón interno de algodón estándar.

La vitrificación modificada MicroSecure: Un procedimiento altamente seguro, simple y eficaces de crioconservación de blastocistos humanos

Las técnicas de reproducción asistida (ARTs) están en continua evaluación para mejorar los resultados y reducir los riesgos asociados. Este manuscrito describe un procedimiento de transferencia de embriones mínimamente invasivo con un eficiente protocolo de criopreservación que permite el uso de conejos como un modelo animal ideal de reproducción humana.

Transferencia de embriones mínimamente invasiva y vitrificación de embriones en la etapa óptima del embrión en el modelo Rabbit

Aquí presentamos un protocolo de Time-lapse morfométricos para seguir la intensidad de la contracción de blastocisto y re-expansión durante intervenciones previtrification y la recuperación post calentamiento. La aplicación del protocolo en vitro fecundación laboratorios con microscopios de lapso de tiempo es posible y se recomienda en el desarrollo de un método de vitrificación de blastocistos óptima.

Morfométricos de protocolo para la evaluación objetiva del comportamiento del blastocisto durante la vitrificación y el calentamiento pasos

La biopsia de blastocisto y la vitrificación son necesarias para realizar pruebas genéticas preimplantacionales de manera eficiente. Un enfoque que implica la apertura secuencial de la zona pellucida y la recuperación de 7-8 células de trophectoderm en el día 5-7 post-inseminación limita tanto el número de manipulaciones requeridas como la exposición del embrión a condiciones ambientales subóptimas.

Biopsia y vitrificación de blastocisto humano

Aquí, describimos un método para calentar blastocistos humanos vitrificados, cultivarlos a través del período de implantación in vitro, digerirlos en células individuales y recoger las células trofoblastas tempranas para su posterior investigación.

Colección de células únicas de células trofoblastas en embriones humanos en fase de implantación

Aquí, presentamos un método optimizado para eliminar rápidamente una porción de complejos cúmulo-ovocito después de la extracción de óvulos para acelerar el proceso de observación de FIV, reduciendo el tiempo requerido para la extracción de células de la granulosa, minimizando la exposición de ovocitos a elementos externos y no obstaculiza el desarrollo embrionario, mejorando en última instancia la eficiencia de los procedimientos de laboratorio de FIV.

La eliminación parcial inmediata de los complejos cúmulo-ovocito: un enfoque refinado para la observación rápida de la fertilización in vitro

Aprenda el protocolo Espátula Montevideo para vitrificar embriones de ratón y oveja preimplantación. Este método eficiente utiliza herramientas caseras y soluciones crioprotectoras para lograr altas tasas de supervivencia post-descongelación.

Espátula Montevideo Dispositivo para la vitrificación de embriones de mamíferos

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