Name: Generación de cultivos monoclonales a partir de la línea celular Drosophila melanogaster JW18 infectada por Wolbachia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-27T13:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: Aprende a generar cultivos monoclonales de células JW18 de Drosophila melanogaster infectadas con Wolbachia. Este protocolo de bajo costo minimiza el estrés celular y mejora la reproducibilidad en estudios de interacciones microbianas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>0.22 &micro; M Filtro de jeringa&nbsp; &nbsp;</td><td>TPP</td><td>99722</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>10x solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>70011044</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Cubrecristales redondos de 12 o 18 mm&nbsp;</td><td>Cualquier marca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubos Falcon de 15 ml</td><td>Genoplast</td><td>601052</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Placa de 24 pocillos</td><td>CitoUno</td><td>CC7682-7524</td><td>Cultivo de tejidos tratado</td></tr><tr><td>5 &micro; Filtro de jeringa M</td><td>Whatman</td><td>10462000</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Placa de 6 pocillos</td><td>CitoUno</td><td>CC7682-7506</td><td>Cultivo de tejidos tratado</td></tr><tr><td>Placa de 96 pocillos</td><td>CitoUno</td><td>CC7682-7596</td><td>Cultivo de tejidos tratado</td></tr><tr><td>Agarosa</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>J66501.30</td><td></td></tr><tr><td>Matraz de cultivo celular, 25 cm2</td><td>Greiner Bio-one</td><td>391-3103</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Raspadores de células&nbsp;</td><td>Greiner Bio-one</td><td>391-3010</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Esmalte de uñas transparente&nbsp;</td><td>Cualquier marca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Viales CryoPure</td><td>Sarstedt</td><td>72.379</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>DMSO, grado de cultivo celular</td><td>Merck</td><td>D2650-100ML</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Mezcla maestra de PCR DreamTaq</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>K1081</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Merck</td><td>324503-100GM</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Fuente de alimentación de electroforesis</td><td>Merck</td><td>PS 251-2</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf&nbsp; Concentrador Plus</td><td>Merck</td><td>EP5305000509</td><td>En su lugar, se puede utilizar un concentrador de vacío de cualquier marca.</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Merck</td><td>1009861000</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de imágenes EVOS M5000</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AMF5000</td><td>Se puede utilizar un microscopio invertido de cualquier marca para controlar la progresión de los clones. Se requiere un microscopio fluorescente para visualizar FISH.</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Merck</td><td>F9665</td><td>Inactivado por calor</td></tr><tr><td>Formaldehído</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Modelo 047377.9L</td><td></td></tr><tr><td>Formamida&nbsp;</td><td>Merck</td><td>F7503-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Tanques de electroforesis en gel</td><td>Cleaver Scientific</td><td>MSMIDI</td><td></td></tr><tr><td>Generador de imágenes en gel</td><td>BioRad</td><td>12009077</td><td>Sistema de imágenes en gel GelDoc Go</td></tr><tr><td>Escalera de ADN GeneRuler de 100 pb</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>SM0243</td><td></td></tr><tr><td>Bloque calefactor</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>88870005</td><td></td></tr><tr><td>Herasafe 2025 Cabina de seguridad biológica Clase II</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>51033314</td><td>Se puede utilizar un gabinete de seguridad biológica de cualquier marca siempre que mantenga un ambiente estéril en el interior.</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 Solución (20 mM) 5 mL</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>62249</td><td>Almacenar en la oscuridad.</td></tr><tr><td>Ácido clorhídrico</td><td>Merck</td><td>258148-2.5L</td><td></td></tr><tr><td>Integra Biosciences Corp PIPETBOY acu 2 Pipet Aid</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC0085686</td><td>Se puede utilizar un controlador de pipetas serológico de cualquier marca.</td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Merck</td><td>I9516-1L</td><td></td></tr><tr><td>Congelador de laboratorio</td><td>&nbsp; Liebherr&nbsp;</td><td>LGUex 1500 MediLine</td><td>Cualquier congelador capaz de mantener una temperatura constante es adecuado.</td></tr><tr><td>Tanque de nitrógeno líquido</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>CY50985</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de microscopio</td><td>Merck</td><td>CLS294875X25-72EA</td><td></td></tr><tr><td>Agua de grado molecular</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipeta multicanal</td><td>Eppendorf</td><td>3125000036</td><td></td></tr><tr><td>Nanogota</td><td>Peqlab</td><td>ND-1000</td><td></td></tr><tr><td>Hemocitómetro Neubauer</td><td>Merck</td><td>BR717810-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm&nbsp; M Película de sellado</td><td>Merck</td><td>HS234526B-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora refrigerada por Peltier</td><td>Memmert</td><td>IPP55plus</td><td>¿Alguna incubadora capaz de mantener constantes 25? C es adecuado. No se requiere control 2 para la línea celular JW18 o sus clones.</td></tr><tr><td>Fenol / Cloroformo / Alcohol isoamílico (25:24:1)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>327115000</td><td></td></tr><tr><td>Juego de pipetas</td><td>Eppendorf</td><td>EP2231300008</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de potasio</td><td>Merck</td><td>P1190-500G</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Quasar&nbsp; Sonda FISH de ARNr 16s marcada con 670&nbsp; poner</td><td>Tecnologías de biobúsqueda</td><td></td><td>Las secuencias de las sondas hechas a medida se pueden encontrar en la Tabla 1.</td></tr><tr><td>Microcentrífuga refrigerada</td><td>Labnet</td><td>C2500-R</td><td></td></tr><tr><td>rpl32 cebador hacia adelante 5'-CCGCTTCAAGGGACAGTATC-3'</td><td>Genómica de Eurofins</td><td></td><td>Hecho a medida en base a la referencia citada en el documento</td></tr><tr><td>rpl32 cebador inverso 5'-CAATCTCCTTGCCTTCTTG-3'</td><td>Genómica de Eurofins</td><td></td><td>Hecho a medida en base a la referencia citada en el documento</td></tr><tr><td>SDS</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AM9823</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Pipetas serológicas</td><td>Corning</td><td>357771</td><td></td></tr><tr><td>Escudos y Sang M3 Insecto Medio</td><td>Merck</td><td>S8398</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Tampón de hibridación de ARN FISH de Stellaris &nbsp;</td><td>Tecnologías de biobúsqueda</td><td>SMF-HB1-10</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Tampón de lavado de ARN FISH de Stellaris &nbsp; &nbsp;</td><td>Tecnologías de biobúsqueda</td><td>SMF-WA1-60</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Tampón de lavado de ARN FISH Stellaris B&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Tecnologías de biobúsqueda</td><td>SMF-WB1-20</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Depósitos de reactivos estériles&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>8094</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Tampón TAE</td><td>Merck</td><td>1061741000</td><td>1x&nbsp;</td></tr><tr><td>Tampón TE</td><td>Merck</td><td>93283</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Termociclador</td><td>Syngen Biotech</td><td>Termobloque 96</td><td>En su lugar, se puede utilizar termociclador de cualquier marca.</td></tr><tr><td>Base Tris</td><td>Merck</td><td>10708976001</td><td>Estéril</td></tr><tr><td>Congelador de temperatura ultrabaja</td><td>Corporación PHC&nbsp;</td><td>MDF-DU502VH-PE</td><td>Cualquier congelador de laboratorio capaz de mantener -80 ? C.</td></tr><tr><td>Medio de montaje Vectashield &nbsp; &nbsp;</td><td>Laboratorios Vector</td><td>H-1000-10</td><td></td></tr><tr><td>cebador wsp hacia adelante 5'-TGGTCCAATAAGTGATGAAGAAAC-3'</td><td>Genómica de Eurofins</td><td></td><td>Hecho a medida en base a la referencia citada en el documento</td></tr><tr><td>cebador wsp reverso 5'-AAAAATTAAACGCTCCA-3'</td><td>Genómica de Eurofins</td><td></td><td>Hecho a medida en base a la referencia citada en el documento</td></tr></tbody></table>

generación de cultivos monoclonales a partir de la línea celular drosophila melanogaster jw18 infectada por wolbachia

Generation of Monoclonal Cultures from Wolbachia-infected Drosophila melanogaster JW18 Cell Line

Visualizamos el proceso de establecimiento de cultivos monoclonales con microscopía óptica desde el día de la preparación de la suspensión unicelular y la siembra (día 0) hasta el establecimiento de líneas celulares continuas (día 45 o 77, Figura 2). Los primeros signos de división celular se observaron el día 3 (4 días después de la siembra, ya que la siembra se realizó el día 0) cuando ya había cuatro células por pocillo (Figura 2). El día 14, los clones crecieron como una monocapa (JW18-B9, C7 y E5) o como una esfera (JW18-G4), que se interrumpió durante el paso. El día 28, las diferencias en el crecimiento entre líneas celulares fueron más obvias. El cultivo de JW18-C7 fue confluente en el día 45, mientras que los cultivos clonales restantes solo se establecieron en el día 77. También hemos visualizado los cuatro cultivos diferentes 30 veces después del establecimiento para capturar las diferencias en las morfologías celulares (Figura 3).
Para determinar el estado de infección por Wolbachia en los cultivos monoclonales, se realizó PCR (Figura 4) y FISH (Figura 5). Observamos que todos los clones excepto uno (JW18-C7) produjeron una banda para el gen wsp , indicativo de una infección por Wolbachia . FISH corroboró los resultados de la PCR: los clones JW18-B9, JW18-E5 y JW18-G4 conservaron la infección por Wolbachia , mientras que el clon JW18-C7 no tenía Wolbachia. En general, a partir de una población mixta de células JW18, pudimos establecer cuatro cultivos clonales, tres de los cuales conservaron la infección original por Wolbachia . Se puede acceder a los datos brutos en Figshare: https://figshare.com/s/15fde47ca7338f31dda9.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68207/68207fig1.jpg"> 
Figura 1: Flujo de trabajo para la generación de cultivos monoclonales. (A) Diluciones primarias y secundarias en la placa de 96 pocillos. (B) Células individuales después de la dilución en serie. (C-E) Progresión en la multiplicación de células y transferencia de placa de 96 pocillos a placa de 24 y 6 pocillos, respectivamente. (F) Cultivos continuos en matraces decultivo celular de 25 cm2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68207/68207fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68207/68207fig2.jpg"> 
Figura 2: Progresión de las líneas clonales JW18 desde una sola célula hasta un cultivo multicelular. Imágenes de campo claro de líneas clonales desde el día 0 (día de siembra) hasta el día 77, cuando todas las líneas se establecieron con éxito en un matraz de cultivo celular de 25cm2 . Barras de escala = 25 μm (día 0), 50 μm (día 3), 150 μm (día 14), 300 μm (días 28, 45, 77). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68207/68207fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68207/68207fig3.jpg"> 
Figura 3: Morfología de las líneas clonales individuales de JW18. Imágenes de campo claro de líneas clonales que muestran morfologías celulares en el paso 30 después del establecimiento. Barras de escala = 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68207/68207fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68207/68207fig4.jpg"> 
Figura 4: Estado de Wolbachia en cultivos clonales examinados por PCR. PCR para Wolbachia en la línea celular parental JW18 y las líneas clonales JW18-B9, JW18-C7, JW18-E5 y JW18-G4 en el paso 11 después del establecimiento. La banda Wolbachiawsp confirma la presencia de Wolbachia, mientras que la banda Drosophilarpl32 es una PCR de control de calidad del ADN. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68207/68207fig4large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68207/68207fig5.jpg"> 
Figura 5: Estado de Wolbachia en cultivos clonales examinados por FISH. Línea celular parental JW18 y clones JW18-B9, JW18-C7, JW18-E5, JW18-G4 visualizados por tinción FISH en el paso 13 después del establecimiento. Wolbachia se tiñe con la sonda Stellaris FISH de ARNr 16s marcada con Quasar 670 en magenta, y los ácidos nucleicos se tiñen con Hoechst 33342 en cian. Barras de escala = 25 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68207/68207fig5large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Tabla suplementaria S1: Sondas de oligonucleótidos diseñadas contra Wolbachia wMel 16S rDNA y su comparación con las sondas publicadas por Schneider et al.42. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68207/Table%20S1.%20Stellaris%20probe%20set%20_16052025.xlsx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta tabla.</a>

Generación de cultivos monoclonales a partir de la línea celular Drosophila melanogaster JW18 infectada por Wolbachia

Cell lines are widely used models in biological research. They are particularly useful in studies of intracellular bacteria that cannot be efficiently ...

generation-monoclonal-cultures-from-wolbachia-infected-drosophila

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Hemocitos Drosophila se dispersan sobre la totalidad del embrión en desarrollo. Este protocolo demuestra cómo montar y la imagen de estas migraciones el uso de embriones con hemocitos marcados con fluorescencia.

Imágenes en directo de Drosophila melanogaster Migraciones hemocitos embrionarias

Ofrecemos un protocolo detallado para la preparación de las células primarias disociada...

Cultivos de células primarias de Drosophila Gástrula embriones

Drosophila melanogaster es un organismo modelo excepcional para estudiar el sistema inmune innato y las consecuencias fisiológicas de la infección y la enfermedad. Este protocolo describe cómo administrar infecciones bacterianas robustas y cuantitativamente repetibles a D. melanogaster, y cómo medir posteriormente la gravedad de la infección y cuantificar la respuesta inmunitaria del huésped.

La infección bacteriana sistémica y Defensa Inmune fenotipos en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Se presenta un método para la cría de Drosophila melanogaster en condiciones axénicas y gnotobióticos. Volar embriones se dechorionated en hipoclorito de sodio, de manera aséptica a la dieta estéril, y se ha criado en contenedores cerrados. La inoculación de la dieta y los embriones con bacterias conduce a asociaciones gnotobióticos, y la presencia bacteriana se confirmó mediante siembra de todo el cuerpo homogeneizados de Drosophila.

La cría de la mosca de la fruta<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Bajo axénicos y Condiciones gnotobióticos

El análisis de la relación estructura-función mitocondrial es necesario para una comprensión profunda de los mecanismos reguladores de la funcionalidad mitocondrial. En este trabajo se describen y demuestran métodos específicos para estudiar la estructura y función mitocondrial en ovarios vivos y fijos de Drosophila.

Estudiar mitocondrial Estructura y función en Drosophila Los ovarios

Este método muestra cómo visualizar la invasión del patógeno en las células de los insectos con modelos tridimensionales (3D). Hemocitos de larvas de Drosophila estaban infectadas con patógenos virales o bacterianos, o ex vivo o en vivo. Hemocitos infectados luego fijados y teñidos para la proyección de imagen con un microscopio confocal y la posterior reconstrucción celular 3D.

Extracción de hemocitos de larvas de Drosophila melanogaster para infección microbiana y análisis

Este protocolo describe cómo establecer infección viral en vivo de Drosophila melanogaster utilizando el método de inyección de nano y técnicas básicas para analizar interacción virus-huésped.

Establecimiento de la infección Viral y análisis de la interacción huésped-Virus en Drosophila Melanogaster

Líneas de células de Drosophila son reactivos importantes para la investigación fundamental y biomedicina. Este artículo proporciona protocolos para descongelar, subcultivos y la criopreservación de líneas de células de Drosophila usadas para ayudar a los investigadores a incorporar el uso de estos reactivos en sus investigaciones.

Descongelación, cultivo y criopreservación de líneas de células de Drosophila

Las moscas adultas de Drosophila melanogaster se han utilizado ampliamente como organismos modelo para investigar los mecanismos moleculares subyacentes a las respuestas inmunes innatas antimicrobianas del huésped y las estrategias de infección microbiana. Para promover la etapa de larva de D. melanogaster como un sistema modelo adicional o alternativo, se describe una técnica de inyección larvaria.

Drosophila melanogaster Protocolo de inyección de larvas

Aquí, proporcionamos un protocolo detallado para realizar imágenes en vivo de la división asimétrica de las células madre de la línea germinal (GSC) en el nicho ovárico de Drosophila. Utilizamos una línea transgénica que expresa de forma ubicua una fusión de proteína verde fluorescente (GFP) de la proteína espectrosómica Par-1.

Imágenes en vivo extendidas de nichos de células madre germinales hembras de Drosophila melanogaster

Aprende a generar cultivos monoclonales de células JW18 de Drosophila melanogaster infectadas con Wolbachia. Este protocolo de bajo costo minimiza el estrés celular y mejora la reproducibilidad en estudios de interacciones microbianas.

Generación de cultivos monoclonales a partir de la línea celular Drosophila melanogaster JW18 infectada por Wolbachia

Explorar más videos