Name: Transducción generalizada de neuronas neocorticales de ratón mediante inyección subaracnoidea de AAV2 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: Aprende un método de inyección subaracnoidea de AAV2 para lograr transducción generalizada de neuronas neocorticales en ratones adultos. Esta técnica aumenta cuatro veces el área de infección y preserva el tejido cerebral para registros electrofisiológicos posteriores.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td><fuerte>Equipo</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 &micro; Jeringa hermética a gas L modelo 1701 RN (microjeringa Hamilton de 5 uL 75 RN)</td><td>Compañía Hamilton</td><td>Parte/REF # 7634-01, Hamilton o cat no. HAM7634-01, Merck</td><td></td></tr><tr><td>Aguja RN de 33 G, estilo de punta 3</td><td>Compañía Hamilton</td><td>Ref. # 7803-05, Hamilton</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio binocular</td><td>Nikon o Micromed</td><td>Modelo MC-4 ZOOM</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocal de barrido láser basado en Cerna</td><td>ThorLabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fuente de luz fría</td><td>RWD</td><td>Modelo 76312</td><td></td></tr><tr><td>Leica VT1000 S Micrótomo de cuchilla vibratoria</td><td>Leica Biosystems</td><td>76001-014</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de anestesia de bajo flujo con kit de inicio</td><td>Corporación Científica Kent</td><td>13-005-111 (Modelo SomnoSuite)</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta mecánica 0.1 &ndash; 2.5 &micro; L Eppendorf Research plus</td><td>Eppendorf</td><td>3123000012</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta mecánica 10 &ndash; 100 &micro; L Eppendorf Research plus</td><td>Eppendorf</td><td>3123000047</td><td></td></tr><tr><td>Afeitadora de ratones</td><td>RWD</td><td>Modelo CP-5200</td><td></td></tr><tr><td>Microtaladro con brocas (0,5 mm, redondo)</td><td>RWD</td><td>78001, 78040</td><td></td></tr><tr><td>o Desctop Instrumento estereotáxico digital, máscara de anestesia de ratón, barras de oreja de ratón (60 grados)</td><td>RWD</td><td>Modelos 68027, 68665, 68306</td><td></td></tr><tr><td>Compresor de aire</td><td>Bambi</td><td>BB8</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta manual monocanal 0,5-10 &micro; L</td><td>RAINN</td><td>17008649</td><td></td></tr><tr><td>Instrumento estereotáxico para animales pequeños</td><td>KOPF</td><td>Modelo 962</td><td></td></tr><tr><td>Inyector estereotáxico</td><td>Encorvado</td><td>10-000-004</td><td></td></tr><tr><td>Instrumentos quirúrgicos (herramientas)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aguja dental de 30 g (Ni-pro)</td><td>Biodent Co. Ltd.</td><td></td><td>Para cortar la duramadre</td></tr><tr><td>Raspador de huesos</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>10075-16</td><td></td></tr><tr><td>Alicates para huesos</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>16025-14</td><td>Para extirpar el hueso craneal</td></tr><tr><td>Espátulas curvas</td><td>Fábrica de suministros médicos de Mozhaisk</td><td></td><td>Para extraer el cerebro de la bóveda craneal</td></tr><tr><td>Fresa dental</td><td>DRENDEL + ZWEILING</td><td></td><td>Para craneotomía; Forma: cilindro de extremo redondo / en forma de pera / redondo; Diámetro de la punta: 0,55-0,8 mm de diámetro</td></tr><tr><td>Portaagujas (Halsey Micro Needle Holder)</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>Sutura quirúrgica de polipropileno o sutura quirúrgica Vicryl (5-0, absorbible)</td><td>Productos Walter (Ethicon)</td><td>S139044 (W9442)</td><td></td></tr><tr><td>Mango de bisturí (#3) con hojas de bisturí (#11)</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>10003-12, 10011-00</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras (tijeras extra estrechas)</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>14088-10</td><td>para cortar la piel</td></tr><tr><td>Tijeras (tijeras finas)</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>14094-11</td><td>para cortar la sutura</td></tr><tr><td>Sutura quirúrgica PROLENE (Poliproptleno)</td><td>Ethicon (Johnson & Johnson)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinzas (Fórceps #5)</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas (pinzas de acero inoxidable pulido)</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11210-20</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>desechables</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de insulina de 1 ml</td><td>SITEKMED</td><td></td><td>Para cargar aceite de vaselina en una microjeringa, para administrar medicamentos</td></tr><tr><td>Placa de cultivo celular</td><td>Ciencias de la vida SPL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bastoncillos de algodón</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cubrevasos</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545E</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de jeringa de insulina (27 G)</td><td>SITEKMED</td><td></td><td>Para extraer restos de un orificio (craneotomía)</td></tr><tr><td>Toallitas sin pelusa CLEANWIPER</td><td>NetLink</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de microscopio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Toallas de papel</td><td>Luscan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Laboratorio de estadísticas</td><td>STLPM996</td><td></td></tr><tr><td>Guantes quirúrgicos estériles</td><td>Dermagrip</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filtro de jeringa estéril (0.2 &mu; m)</td><td>Corning</td><td>431229</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Medicamentos/Productos químicos (reactivos)</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% de formalina tamponada o 4% de paraformaldehído</td><td>Productos químicos Thermo Scientific</td><td>J61899. AK</td><td></td></tr><tr><td>Solución alcohólica de yodo (5%))</td><td>Renovación</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ungüento antibiótico Baneocina (bacitracina + neomicina)</td><td>Sandoz</td><td></td><td>Agente antibacteriano para uso externo</td></tr><tr><td>Aqua Polymount</td><td>Policiencias</td><td>18606-20</td><td></td></tr><tr><td>Carbomer Eye Gel Vidisic (Gel oftálmico)</td><td>BAUSCH+LOMB (Santen)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microesferas FluoSphere modificadas con carboxilato (rojo)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>F-8801</td><td></td></tr><tr><td>Dexametasona (4 mg/ml)</td><td>Ellara (KRKA)</td><td></td><td>Glucocorticoide sintético</td></tr><tr><td>H2O destilado</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etanol (70%)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexoprofeno al 2,5% (Ketoprofeno)</td><td>VIC</td><td></td><td>Medicamentos antiinflamatorios no esteroideos (AINE)</td></tr><tr><td>Solución de glucosa al 5%</td><td>Solopharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cabra anti-conejo IgG (H+L) de adsorción cruzada, Alexa Fluor 546</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11010</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Karizoo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución de lidocaína (2 % / 4%)</td><td>Solopharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Suero de cabra normal (NGS)</td><td>Abcam</td><td>ab7481</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Eco-servis</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-parvalbúmina de conejo</td><td>Merck Millipore</td><td>AB15736</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo monoclonal anti-calbindina recombinante de conejo</td><td>Abcam</td><td>AB108404</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina (0,9% de NaCl en H2O)</td><td>Solopharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tritón X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>50-178-1844</td><td></td></tr><tr><td>Aceite de vaselina</td><td>Genel</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

transducción generalizada de neuronas neocorticales de ratón mediante inyección subaracnoidea de aav2

Widespread Transduction of Mouse Neocortical Neurons by Subarachnoid Injection of AAV2

En una serie piloto de experimentos, utilizamos el método tradicional de inyección intracortical para transducir neuronas piramidales de la capa cinco en el neocórtex del ratón por AAV2 que transporta el gen de la canalrodopsina rápida (oChIEF) fusionado con la proteína fluorescente EGFP bajo el promotor CaMKII. En consonancia con el rasgo característico de AAV212, obtuvimos un área de infección relativamente pequeña, que no superaba 1 mm de ancho (Figura 1A)...

Transducción generalizada de neuronas neocorticales de ratón mediante inyección subaracnoidea de AAV2

Recombinant adeno-associated viruses are a flexible and powerful tool for the delivery and expression of various genes of interest in many areas of ...

widespread-transduction-mouse-neocortical-neurons-subarachnoid

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Aquí presentamos la inyección intracraneal de vectores AAV de marcaje fluorescente de las neuronas y la glía en la corteza visual.

Inyección intracraneal de adeno-asociado vectores virales

Fuente: Li, D., et al. Inyección intratecal directa de virus adenoasociados recombinantes en ratones adultos. J. Vis. Exp. (2019)Este video muestra el procedimiento para la inyección intratecal de virus adenoasociados (AAV) en el líquido cefalorraquídeo (LCR) de un ratón despierto, que cubre la preparación de la jeringa, la alineación de la columna vertebral y la inserción precisa de la aguja. Este método valida la administración de genes dirigidos, lo que respalda su potencial para las...

Administración intratecal de virus en un modelo de ratón para el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central

Los vectores virales permiten la manipulación dirigida de genes. Se demuestra un método para la expresión génica condicional o ablación en la médula espinal de ratón, usando inyección estereotáxica de un vector viral en el asta dorsal, un sitio prominente de contacto sináptico entre las vías aferentes somatosensoriales y las neuronas del sistema nervioso central.

Inyección estereotáxica de un vector viral para la manipulación genética condicional en la médula espinal de ratón

En los últimos 15 años, los vectores derivados del adenovirus canino tipo 2 (CAV2) han demostrado su eficacia para transducir células in vitro e in vivo y son ampliamente utilizados para la vacunación y la terapia génica. En este trabajo describimos un procedimiento para construir, producir y purificar vectores CAV2, dando lugar a suspensiones virales de alto título.

Producción y purificación de no replicativa adenovirus canino tipo 2 vectores derivados

Aquí demostramos una técnica para la transducción neuronal generalizada mediante inyección intraventricular de virus adenoasociados en el cerebro de ratón neonatal.  Este método proporciona una manera rápida y fácil de lograr la expresión de por vida de los transgenes administrados viralmente.

Inyección Viral Intracerebroventricular de Neonatología del ratón Cerebro de transducción neuronal persistente y generalizada

Este video muestra el procedimiento de craneotomía que permite obtener imágenes crónicas de neuronas en la corteza retroesplenial de ratón utilizando microscopía in vivo de dos fotones en la línea transgénica Thy1-GFP. Este enfoque se combina con la inyección de virus adenoasociados que expresan mCherry en el hipocampo dorsal. Estas técnicas permiten el seguimiento a largo plazo de la plasticidad estructural dependiente de la experiencia en RSC.

Simultánea de dos fotones<em&gt; En Vivo</em&gt; Imágenes de entradas sinápticas y Objetivos postsinápticos en la corteza del ratón retroesplenial

El objetivo del presente estudio fue desarrollar y validar la potencia y la seguridad de la entrega del gen mediado por el virus adeno-asociado al virus espinal 9 (AAV9) mediante el uso de una nueva técnica de administración génica subpial en ratones adultos.

Adenovirus Subagonal Asociado 9 (AAV9) Vector Entrega en Ratones Adultos

Inyección intraspinal del recombinase dependiente recombinante virus adeno-asociado (rAAV) puede utilizarse para manipular cualquier tipo de célula genéticamente marcadas en la médula espinal. Aquí describimos cómo transduce las neuronas en el asta dorsal de la médula espinal lumbar. Esta técnica permite interrogatorio funcional del subtipo neurona manipulada.

Expresión de transgenes de mediada por Virus adeno-asociado en neuronas genéticamente definidas de la médula espinal

Aquí presentamos una técnica de inyección directa intratecal con clorhidrato de lidocaína 1% en una solución viral para asegurar la entrega eficiente de virus adeno-asociado a pequeños animales y establecer un sistema de puntuación para predecir la eficiencia de la transducción de señales en la central sistema nervioso según el grado de debilidad transitoria inducida por la lidocaína.

Directa de la inyección intratecal de virus Adeno-asociado recombinantes en ratones adultos

Este protocolo demuestra un método novedoso para aplicar terapias génicas a subpoblaciones de células en ratas neonatas a edades postnatales de 5 a 10 días mediante la inyección de un modificador quimiogenético anterógrado en la corteza somatomotora y una recombinasa Cre retrógradamente transportable en la médula espinal cervical.

Apuntando al tracto corticoespinal en ratas neonatas con un vector viral doble utilizando cirugía combinada de cerebro y columna vertebral

Este protocolo describe la expresión ectópica mediada por virus de Neurod1 después de un accidente cerebrovascular isquémico cortical. Neurod1 se administra (1) utilizando el sistema Cre-Flex AAV en ratones de tipo salvaje durante la fase subaguda posterior al accidente cerebrovascular (7 días) y (2) utilizando un solo vector AAV en ratones reporteros condicionales durante la fase crónica posterior al accidente cerebrovascular (21 días).

Sistemas AAV y modelos murinos para investigar la expresión ectópica de Neurod1 en células transducidas en momentos subagudos y crónicos posteriores al ictus isquémico

Aprende un método de inyección subaracnoidea de AAV2 para lograr transducción generalizada de neuronas neocorticales en ratones adultos. Esta técnica aumenta cuatro veces el área de infección y preserva el tejido cerebral para registros electrofisiológicos posteriores.

Transducción generalizada de neuronas neocorticales de ratón mediante inyección subaracnoidea de AAV2

Explorar más videos