Name: In vivo Imágenes de calcio de conjuntos neuronales en redes de neuronas sensoriales primarias en ganglios del trigémino intactos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T13:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: Aprende a realizar imagen de calcio GCaMP in vivo en ganglios del trigémino intactos de ratón para estudiar redes neuronales sensoriales. Este método permite visualizar más de 3.000 neuronas simultáneamente y analizar respuestas a estímulos mecánicos y térmicos en tiempo real.

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<table><tbody><tr><td>Inyección anasada (xilacina)</td><td>Covetrus, Akorn</td><td>33197</td><td></td></tr><tr><td>Objetivo Flurar 5x/0.25 M27</td><td>Cal Zeiss</td><td>420130-9900-000</td><td></td></tr><tr><td>Aplicadores con punta de algodón</td><td>Mckesson</td><td>24-106-1S</td><td></td></tr><tr><td>Hemostático curvo</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>13007-12</td><td></td></tr><tr><td>Controlador de temperatura de CC</td><td>FHC</td><td>40-90-8D</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla térmica del controlador de temperatura de CC</td><td>FHC</td><td>40-90-2-05</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas recubiertas de cerámica Dumont</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11252-50</td><td></td></tr><tr><td>Controlador de temperatura FHC DC</td><td>FHC</td><td>40-90-8D</td><td></td></tr><tr><td>Fluriso (Isoflurano)</td><td>MWI Salud Animal, Grupo Piramal</td><td>501017</td><td></td></tr><tr><td>Friedman-Pearson Rongeurs</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>16221-14</td><td></td></tr><tr><td>Espuma de gel</td><td>Pfizer</td><td>09-0353-01</td><td></td></tr><tr><td>ImagenJ</td><td>Institutos Nacionales de Salud</td><td>ij153</td><td></td></tr><tr><td>Ketaset (ketamina)</td><td>Zoetis</td><td>KET-00002R2</td><td></td></tr><tr><td>Modelo 923-B Soporte para cabeza de anestesia con gas para ratones (ratón adulto)</td><td>Instrumentos Kopf</td><td>923-B</td><td></td></tr><tr><td>Cinta de escenario verde luminiscente</td><td>JSITON/ Amazon</td><td>B803YW8ZWL</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de pieza de mano de laboratorio eléctrico compacto M35</td><td>Fabricación dental de Buffalo Co., Inc.</td><td>M35</td><td></td></tr><tr><td>Matrx VIP 3000 Vaporizador de isoflurano</td><td>Marca media</td><td>91305430</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de micro disección</td><td>Roboz</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte de microdisección</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>15023-10</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte de microdisección</td><td>Roboz</td><td>RS-5677</td><td></td></tr><tr><td>Mini sonda de termistor rectal</td><td>FHC</td><td>40-90-5D-02</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de operación</td><td>Roboz</td><td>RS-6812</td><td></td></tr><tr><td>Ratones Pirt-GCaMP3 C57/BL/6J</td><td>Universidad Johns Hopkins</td><td>N/A</td><td>Cualquiera de los sexos puede ser imaginado igualmente bien. Los ratones deben tener al menos 8 semanas de edad debido a la expresión débil o intermitente del promotor Pirt en ratones más jóvenes.</td></tr><tr><td>Cloruro de potasio</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP366-500</td><td></td></tr><tr><td>Marco estereotáxico</td><td>Kopf Modelo 923-B</td><td>923-B</td><td></td></tr><tr><td>Mascarilla esterotáctica (activa) para ratones < 30g con tubos</td><td>Ciencias de la vida RWD</td><td>68663</td><td></td></tr><tr><td>Fresa TNT de fisura cónica (31P)</td><td>Fabricación dental de Buffalo Co., Inc.</td><td>31P-ORO</td><td></td></tr><tr><td>ratones td-Tomato C57BL/6J</td><td>Laboratorio Jackson</td><td>7909</td><td></td></tr><tr><td>Placa superior, 6in x 10in</td><td>Newport</td><td>290-TP</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta de transferencia, 3 ml</td><td>Cole Parmer</td><td>UX-06226-23</td><td></td></tr><tr><td>Ratones TrpV1-Cre C57BL/6J</td><td>Laboratorio Jackson</td><td>17769</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocal Zeiss LSM 800</td><td>Cal Zeiss</td><td>LSM800</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Zen 2.6 Blue Edition Software</td><td>Cal Zeiss</td><td>Zen (Edición Azul) 2.6</td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo imágenes de calcio de conjuntos neuronales en redes de neuronas sensoriales primarias en ganglios del trigémino intactos

In Vivo Calcium Imaging of Neuronal Ensembles in Networks of Primary Sensory Neurons in Intact Trigeminal Ganglia

Obtención de imágenes de un gran número de neuronas y ramas específicas del trigémino mediante exploración confocal del ganglio del trigémino Pirt-GCaMP Después de la exposición quirúrgica a TG en ratones Pirt-GCaMP3, la microscopía confocal permite obtener imágenes de más de &gt;3.000 neuronas simultáneamente (Figura 4). Esto proporciona la poderosa ventaja de observar miles de neuronas TG simultáneamente en su contexto fisiológico normal. Los transitorios espontáneos de...

In vivo Imágenes de calcio de conjuntos neuronales en redes de neuronas sensoriales primarias en ganglios del trigémino intactos

Calcium imaging is an important tool for monitoring signaling mechanisms that either influx Ca2+ into the cytosol or release Ca2+ from intracellular Ca2+ ...

in-vivo-calcium-imaging-neuronal-ensembles-networks-primary-sensory

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Fuente: Shannonhouse, J., et al. Imágenes de calcio in vivo Imágenes de calcio de conjuntos neuronales en redes de neuronas sensoriales primarias en ganglios de raíz dorsal intactos. J. Vis. Exp. (2023). El video muestra una técnica de imagen de calcio in vivo para monitorear la actividad neuronal en los ganglios de la raíz dorsal (DRG) de un ratón transgénico. Las neuronas DRG expresan un indicador de calcio que aumenta la intensidad de la fluorescencia al unirse al calcio. Los estímulos...

Imágenes de calcio in vivo de conjuntos neuronales en los ganglios de la raíz dorsal intacta de un ratón

Se describe un procedimiento experimental para medir la actividad neuronal a través de dos ventanas ópticas arriba bilateral corticies somatosensorial primaria (S1) en Thy1-GCaMP6s de ratones transgénicos usando fotones 2 (2P) microscopia en vivo.

Imágenes de la actividad neuronal en la corteza somatosensorial primaria usando Thy1-ratones transgénicos GCaMP6s

Aquí presentamos cómo exponer el ganglio geniculado de un ratón de laboratorio vivo y anestesiado y cómo usar imágenes de calcio para medir las respuestas de conjuntos de estas neuronas a los estímulos del sabor, lo que permite múltiples ensayos con diferentes estimulantes. Esto permite comparaciones en profundidad de qué neuronas responden a qué saborantes.

Imágenes de calcio in vivo de las respuestas de las neuronas ganglionares geniculadas de ratón a los estímulos del gusto

Este protocolo describe la exposición quirúrgica del ganglio de la raíz dorsal (GRD) seguida de GCaMP3 (indicador de Ca2+ codificado genéticamente; Proteína fluorescente verde-Calmodulina-M13 Proteína 3) Imagen de Ca2+ de los conjuntos neuronales utilizando ratones Pirt-GCaMP3 mientras se aplica una variedad de estímulos a la pata trasera ipsilateral.

In vivo Imágenes de calcio de conjuntos neuronales en redes de neuronas sensoriales primarias en ganglios intactos de la raíz dorsal

El presente protocolo describe imágenes de calcio in vivo para medir las respuestas de conjuntos de neuronas lumbar-6 DRG a estímulos somáticos y viscerales. Se pueden hacer comparaciones exhaustivas entre las neuronas que responden a diferentes estímulos. Este protocolo es valioso para investigar los mecanismos del dolor visceral y la estimulación somática, como la acupuntura.

in vivo Imágenes de calcio de la respuesta de las neuronas de los ganglios de la raíz dorsal a estímulos somáticos y viscerales

Los indicadores de calcio codificados genéticamente (GECI, por sus siglas en inglés) permiten un análisis robusto a nivel poblacional de la señalización de las neuronas sensoriales. Aquí, hemos desarrollado un enfoque novedoso que permite la visualización in vivo de GECI de la actividad de las neuronas de los ganglios trigéminos de rata.

En vivo Imágenes de calcio de las neuronas sensoriales en el ganglio trigémino de la rata

La actividad espontánea de la creación de redes neuronales se puede medir con AM-éster formas de tintes indicadores sensibles de calcio. Cambios en el calcio intracelular, lo que indica la activación neuronal, se detectan los cambios transitorios de la fluorescencia con un indicador o imagen de dos fotones. Este protocolo puede ser adaptado para una serie de redes neuronales del desarrollo que dependen...

Imagen de calcio funcionales en el desarrollo de redes corticales

Transporte retrógrado de tinte fluorescente etiqueta a una subpoblación de neuronas en base a la proyección anatómica. Axones etiquetadas pueden orientarse...

Marcaje fluorescente retrógrada Permite dirigida extracelular sola unidad de grabación de neuronas identificadas<em&gt; En vivo</em

Con su pequeño cuerpo transparente y bien documentado neuroanatomía y una serie de técnicas genéticas susceptibles y...

Formación de imágenes in vivo de calcio neuronal en C. elegans

En este artículo presentamos micro-iontoforesis rápida de los neurotransmisores como técnica para investigar la integración de las señales postsináptica con alta precisión espacial y temporal.

Fast Micro-iontoforesis de glutamato y GABA: una herramienta útil para investigar la integración sináptica

Aprende a realizar imagen de calcio GCaMP in vivo en ganglios del trigémino intactos de ratón para estudiar redes neuronales sensoriales. Este método permite visualizar más de 3.000 neuronas simultáneamente y analizar respuestas a estímulos mecánicos y térmicos en tiempo real.

In vivo Imágenes de calcio de conjuntos neuronales en redes de neuronas sensoriales primarias en ganglios del trigémino intactos (Video) | JoVE Journal

In vivo Imágenes de calcio de conjuntos neuronales en redes de neuronas sensoriales primarias en ganglios del trigémino intactos

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