Name: Elección y no elección-Los ensayos para probar la resistencia de A. thaliana a insectos masticadores (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: Aprende a realizar ensayos de elección y no elección para evaluar la resistencia de Arabidopsis thaliana contra la plaga Pieris rapae. Este método permite estudiar el papel del ácido jasmonico y glucosinolatos en la defensa vegetal.

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No experimento de elección: <ol><li> Cuidadosamente adjuntar la planta Arabidopsis de interés en un vaso de plástico. En este caso: Col-0 (WT) y un mutante con discapacidad en la producción de JA. Asegúrese de limitar el daño a las hojas. Para que el uso final de este pincel. </li><li> Use un pincel fino para dar un larvas recién nacidas de la colonia en la col. </li><li> Coloque cuidadosamente la larva en las plantas de Arabidopsis. </li><li> Peso larva en el día 4, 7, 10. Sugerencia: crecer sus plantas en condiciones de día corto (8 horas de luz) para aumentar el crecimiento vegetativo (1 larva puede cumplir su ciclo de vida completo de una planta). </li></ol> Elección de experimentación: <ol><li> Dos plantas se seleccionan, uno de cada genotipo. Lo mejor es hacer crecer plantas en la misma olla, para limitar otros factores, tales como los efectos bandeja, etc </li><li> Colocar las plantas en una jaula de mariposas. </li><li> Seleccione una hembra fértil. Por lo general la captura de una mujer que está activamente poniendo los huevos en la colonia de cría. </li><li> Liberación de la mujer en la jaula con la elección de dos plantas de 24 hrs. </li></ol> CONSEJO 1: Para eliminar un efecto de aprendizaje, no vuelva a usar las mujeres para las pruebas de selección posterior. TIP 2: Sólo se puede comparar las plantas que tienen un fenotipo de crecimiento similar. Como alternativa, puede montar una hoja de cada genotipo en la parte superior de un erlenmeyer y comparar su atractivo para una mujer. Por favor, visite <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825">las revisiones anuales de Biología Vegetal</a> para obtener más información acerca de este protocolo y la inmunidad de plantas a la herbivoría de insectos.

elección y no elección-los ensayos para probar la resistencia de a. thaliana a insectos masticadores

Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects

Las larvas de la mariposa de la col blanca pequeña son una plaga en actividades agrícolas. Esta especie de oruga se alimenta de las plantas de la familia del repollo, que incluyen muchos cultivos como el repollo, brócoli, coles de Bruselas de cría, etc de los insectos se lleva a cabo en las plantas de repollo en el invernadero. Al menos dos jaulas son necesarias para la cría de Violación de Pieris. Una de las larvas y el otro para contener a los adultos, las mariposas. Con el fin de investigar el papel de las hormonas vegetales y sustancias químicas tóxicas de plantas en la resistencia a esta plaga de insectos, se demuestra dos experimentos. En primer lugar, la determinación del papel del ácido jasmónico (JA - una hormona vegetal a menudo se indica en la resistencia a insectos) en la resistencia a la masticación de insectos Violación de Pieris. El crecimiento de Caterpillar se puede comparar en las plantas de tipo salvaje y mutante con discapacidad en la producción de JA. Este experimento se considera &quot;otra opción&quot;, porque las larvas se ven obligados a subsistir con una sola planta que sintetiza o es deficiente en JA. En segundo lugar, se demuestra un experimento que investiga el papel de los glucosinolatos, que se utilizan como oviposición (puesta de huevos) señales. Aquí, nosotros usamos Arabidopsis WT y mutantes alteración en la producción de glucosinolatos en una &quot;elección&quot; experimento en el que las mariposas hembras se les permite elegir para poner sus huevos en las plantas de ambos genotipos. Este video muestra el montaje experimental para ambos ensayos, así como obtener resultados representativos.

Resistencia de las plantas a insectos herbívoros de mascar puede ser probado de varias maneras. En este sentido, se muestra cómo configurar una opción y no un experimento de elección con la planta modelo Arabidopsis thaliana para identificar la resistencia contra la plaga de especies Violación de Pieris.

Elección y no elección-Los ensayos para probar la resistencia de A. thaliana a insectos masticadores

Las larvas de la mariposa blanca pequeña de la col son una plaga en entornos agrícolas. Esta especie de oruga se alimenta de plantas de la familia de las coles, las cuales...

Las larvas de la mariposa blanca pequeña, plaga de la col, son un insecto perjudicial en entornos agrícolas. Esta especie de oruga se alimenta de plantas de la familia de la col, que incluyen muchos cultivos como la col, el brócoli y las coles de Bruselas, entre otros. Curiosamente, las plantas pueden desarrollar resistencia frente a los herbívoros, como el mencionado oruga, y en este video probaremos la resistencia de la especie vegetal modelo Arabidopsis thaliana frente a este insecto mediante dos métodos.Hola, soy Martin Navos, investigador posdoctoral en el laboratorio de George Jander en el Instituto Boyce Thompson para Investigación en Plantas. Hoy me gustaría mostrarles cómo establecer un experimento de elección y sin elección con Arabidopsis thaliana como planta modelo, investigando la resistencia frente a herbívoros plaga.El criadero de las orugas se lleva a cabo en plantas de col dentro del invernadero. Se necesitan al menos dos jaulas para el criadero de Peter. Una se utiliza para las larvas, y la otra contiene los adultos, las mariposas, con el fin de demostrar la participación de hormonas vegetales y productos químicos tóxicos de las plantas.En la resistencia a esta prueba con insectos, me gustaría demostrar dos experimentos. El primero implicará la determinación del papel del ácido jasmónico, una hormona vegetal que a menudo se asocia con la resistencia a insectos.En un experimento sin opción, se puede comparar el crecimiento de las orugas en plantas silvestres y en plantas mutantes con déficit en la producción de ácido mon. La hipótesis sería que las larvas ganan más peso en la planta mutante. Así que comencemos con el primer experimento.Así que vamos a realizar un experimento de elección única con las plantas, un Revit opsis elliana, para medir la ganancia de peso de las larvas de purest rapha. Lo primero que debemos hacer es encerrar cuidadosamente estas plantas. En uno de estos vasos, cortamos la base de este vaso de plástico.Entonces, para encerrar, utilizo el extremo posterior de este pincel fino. Sin dañar las hojas, vamos a encerrar estas plantas. Así, tenemos un experimento de elección nula aquí entre las plantas de conejillo de indias, el tipo silvestre y la planta mutante.El mutante es un mutante deficiente en ácido jasmónico y probablemente más susceptible al consumo. Este es un experimento sin opción porque una larva solo puede elegir entre un genotipo de plantas. Por lo tanto, vamos a añadir una larva a cada recipiente.Es importante comenzar con larvas que acaban de eclosionar. Estas se denominan larvas L1. Aquí hay una que acaba de eclosionar.Vale, voy a colocar cuidadosamente esta larva sobre la banda de prueba. El siguiente paso consiste en encerrar estas plantas junto con su larva, utilizando una malla fina y una banda oleosa para sellarlas y evitar que las larvas escapen. Luego esperamos varios días, generalmente siete días, antes de medir la ganancia de peso de la larva.Después de siete días de alimentación, sacamos las larvas y las pesamos en esta balanza; utilizando pinzas flexibles, las tomamos con cuidado y registramos su peso. Este ejemplar pesa casi 250 miligramos. Voy a comparar el peso de esta oruga que estuvo en la planta mutante con el peso de la oruga que estuvo en la planta de tipo silvestre.Como puede ver inmediatamente, queda mucho más tejido vegetal en la planta de tipo silvestre. Por lo tanto, asumimos que la larva ha ganado menos peso. La larva en la planta de tipo silvestre pesa solo alrededor de cien miligramos.Por lo tanto, existe una gran diferencia tanto en la cantidad de tejido que ha sido consumido como en la ganancia de peso de las larvas. Eso es todo en cuanto al experimento sin elección. Pasemos ahora al experimento con elección, ¿de acuerdo?Las plagas especializadas identifican y son atraídas por señales del huésped que son tóxicas para los organismos generalistas. En el caso de pi, los glucosinolatos rápidos se utilizan como una señal de olefinas sobrepuesta. Aquí utilizaré conejos de tipo silvestre y mutantes de opsis con la producción de glucosinolatos alterada.Para demostrar un experimento de elección, antes de comenzar este experimento, es necesario poder distinguir entre mariposas macho y hembra. Aquí hay un ejemplo: las hembras de la mariposa bureaus rapid tienen dos puntos en cada ala, mientras que los machos tienen solo uno; a veces, los machos pueden confundirse con hembras si presentan una segunda marca, a menudo tenue. Así que vamos a configurar el experimento de elección.En este caso, contamos con una planta de tipo silvestre y una planta mutante. La planta mutante presenta un defecto en la producción de glucosinolatos. Nuevamente, los glucosinolatos son tóxicos para herbívoros generalistas, pero atraen a especialistas como el *Pieris rapae*, con el que estamos trabajando.Entonces, estas son las cinco etapas larvarias de penis ape, comenzando con la L más pequeña, la primera etapa larvaria, que va ganando peso hasta llegar a la quinta etapa larvaria. Luego se transforma en una pupa y tiene lugar la transformación completa, dando como resultado mariposas adultas. Para este experimento de elección, estamos utilizando esta jaula en la que he colocado tanto la planta silvestre como la planta mutante, y ahora voy a añadir una mariposa hembra.Para evaluar el acai, suelo capturar hembras fértiles. Para asegurarme de que son fértiles, atrapo hembras que están poniendo huevos activamente, coloco cuidadosamente mi mano alrededor de ellas y las transfiero a la jaula de prueba. Dejamos a la mariposa durante 24 horas y luego contamos el número de huevos puestos en cada uno de estos genotipos.Algunos consejos útiles al realizar este tipo de experimentos son, en primer lugar, que al seleccionar una mariposa hembra, no se debe utilizar en experimentos posteriores porque podría haber un efecto del aprendizaje. En segundo lugar, solo se pueden comparar plantas que tengan fenotipos de crecimiento similares. Por lo tanto, si se tienen plantas que no presentan un fenotipo de crecimiento similar, se pueden tomar hojas de tamaño parecido y montarlas sobre un matraz LMI.Entonces, después de que hayan transcurrido 24 horas, podemos retirar primero las plantas. La planta del tipo salvaje, como pueden ver, tiene muchos huevos sobre ella, y la planta mutante, el mutante que carece de glucosinolatos. Por lo tanto, carece de un estímulo de posición o estímulo de acai.Como puede observarse, hay casi ningún huevo o muy pocos, al menos en el mutante. Mientras que hay muchos huevos en la planta silvestre. Así que acabo de mostrarle cómo configurar experimentos para determinar la resistencia contra insectos.El primer experimento fue una prueba sin opción. Experimentos en los que comparamos la ganancia de peso larval en plantas mutantes frente a plantas de tipo salvaje. El segundo experimento, un experimento de elección. Comparamos la aclación por una mariposa hembra también en una planta mutante frente a una planta de tipo salvaje. Muchas gracias. Eso es todo.Espero que sea útil para sus experimentos.

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