Name: Uso del método de transferencia de gotas para preparar de forma fiable vesículas unilamelares gigantes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T12:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Aprende a preparar vesículas unilamelares gigantes mediante el método de transferencia de gotas para aplicaciones en biología sintética y microrobótica. Este protocolo ofrece alta eficiencia de encapsulación y ejecución sencilla.

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Implementando una técnica previamente descrita para producir liposomas1, Pautot et al. establecieron un protocolo para producir vesículas lipídicas con diámetros que van de 0,1 a 1 μm de diámetro2. El método de transferencia de gotas ha demostrado rápidamente su eficacia en la producción de vesículas aún más grandes (diámetros superiores a 1 μm)3, ganando cada vez más popularidad por la simplicidad de ejecución y la alta eficiencia de encapsulación. De hecho, en comparación con los métodos de hinchamiento (como el hinchamiento del gel o la electroformación), este protocolo reduce el volumen de solución de carga necesaria para formar un número comparable de vesículas y los residuos asociados4. Los GUV se pueden ensamblar a partir de interfaces de fluidos a través de métodos alternativos con una eficiencia de encapsulación comparable. Sin embargo, en comparación con los basados en chips microfluídicos 5,6 o encapsulación continua de cruce de interfaz de gotas (cDICE)7, la transferencia de gotas ofrece la configuración más simple asequible en cualquier laboratorio con equipo básico. Además, los métodos microfluídicos pueden conducir a GUV con inclusiones de aceite no deseadas en la membrana. Por estas razones, la transferencia de gotas ha sido el método elegido para cargar GUV con cargas valiosas en los campos de las células artificiales 3,8,9,10 y, recientemente, la microrobótica 11,12.
El método se basa en la formación de valvas de membranas a través de la estabilización de interfaces agua/aceite mediadas por fosfolípidos. Primero, los fosfolípidos se disuelven en un aceite (solución lipídica, LS), luego se prepara una emulsión de agua en aceite con la solución acuosa que contiene la carga GUV deseada (solución interna, IS) en el LS. Luego, la emulsión se transfiere a un tubo donde otra solución acuosa (llamada solución externa, OS) se ha equilibrado previamente con LS para formar una interfaz agua-aceite. Los GUV se forman cuando las gotas de agua se ven obligadas a cruzar esta interfaz OS/LS por centrifugación: la valva interna de los GUV se forma en la superficie de las gotas de IS, mientras que la valva externa se forma entre OS y LS (Figura 1).
Se han descrito muchas variantes de protocolo con parámetros ajustados de acuerdo con las necesidades experimentales contingentes. Un primer intento extenso de optimizar el proceso fue descrito por Moga et al.13, mientras que Zhang et al. reunieron la mayoría de los ejemplos relevantes en una revisión reciente14. A pesar de los muchos parámetros descritos que influyen en el protocolo, no hay indicios de cómo se podría llevar a cabo un proceso de optimización para una nueva formulación de GUV, ni de las mejores prácticas para la recuperación y manipulación de GUV después de la producción. Basándonos en la literatura científica disponible y nuestra experiencia directa, proporcionamos aquí un protocolo general para producir GUV mientras discutimos los principios básicos. De este modo, proporcionamos indicaciones útiles para la optimización de nuevas formulaciones de GUV y dos precauciones siempre aplicables al protocolo: la preparación de LS en un entorno controlado y un método para eliminar fácilmente la fase superior del aceite para la recuperación de una muestra limpia de GUV. Elegimos dos ejemplos: uno con 240 mM de sacarosa como IS y 0,2 mM de DOPC en aceite de silicona AR20 como LS (condición E [vacío], ver Tabla 1) y el otro compuesto por 0,2% de micropartículas de poliestireno de 1,1 μm en sacarosa de 240 mM como IS y 3,18 mM de DOPC en aceite mineral como LS (condición P [con partículas], ver Tabla 1). Ambas muestras se produjeron con 240 mM de glucosa como OS. Elegimos esta osmolaridad para obtener GUV que, en condiciones fisiológicas, tienen una membrana lipídica relajada (baja tensión de la membrana).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig1v5.jpg"> 
Figura 1: Representación esquemática del método de transferencia de gotas. (A) Se preparan tres soluciones en viales separados: fosfolípidos en aceite (fase amarilla) para formar una solución lipídica, una solución que contiene sacarosa (en cian) como solución interna y una solución de glucosa equiosmolar (blanca) como solución externa. (B) LS se mezcla con el IS para formar una emulsión estable, luego (C) se permite que una interfaz entre OS y LS se equilibre antes de que (D) la emulsión se vierta encima. (E) Las gotas de agua se ven obligadas a cruzar la interfaz LS / OS por la fuerza centrífuga para (F) permitir la formación de GUV. La figura no está a escala y está destinada a proporcionar solo un esquema del método. Abreviaturas: LS = solución lipídica; IS = solución interna; OS = solución externa; GUV = vesícula unilamelar gigante. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

<table><tbody><tr><td>0.22 &micro; M Membrana de ésteres de celulosa mixta filtros de jeringa</td><td>Merck</td><td>SLGSVR255F</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de 1,5 ml</td><td>Bioclase</td><td>06.0279.00</td><td></td></tr><tr><td>100 &mu; Jeringa de vidrio L</td><td>Merck</td><td>20737</td><td></td></tr><tr><td>Vaso de precipitados de 150 ml</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>213-1123</td><td>Al menos 3</td></tr><tr><td>Viales de vidrio oscuro ND24 de 20 ml</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>548-9001A</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de 2 ml</td><td>Bioclase</td><td>07.3534.99</td><td></td></tr><tr><td>Cilindro de 50 ml</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>612-3843</td><td></td></tr><tr><td>500 &mu; Jeringa de vidrio L</td><td>Hamilton</td><td>549-1166</td><td></td></tr><tr><td>Tubo Falcon de 50 ml</td><td>Merck</td><td>CLS352070</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de 50 ml&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>8SS50L1</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de 5 ml</td><td>Greiner bio-one</td><td>622201</td><td></td></tr><tr><td>Vaso de precipitados de 600 ml</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>213-1126</td><td></td></tr><tr><td>B&uuml; Matraz Chner</td><td>Merck</td><td>Z740682</td><td></td></tr><tr><td>Anillos de corcho para matraces de fondo redondo</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>217-1000</td><td></td></tr><tr><td>Cristalizador</td><td>Dutscher</td><td>Modelo 080474A</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glucosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Sacarosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9378</td><td></td></tr><tr><td>Termohigrómetro digital</td><td>Bohlender</td><td>V1863-07</td><td></td></tr><tr><td>DOPC</td><td>Investigación Avanti</td><td>850375C</td><td></td></tr><tr><td>Perforar</td><td>Dremel</td><td>4000</td><td></td></tr><tr><td>Sal disódica de erioglaucina (Azul Brillante FCF)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>861146</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de jeringa G18</td><td>Terumo</td><td>AN1838R1</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de jeringa G21</td><td>Terumo</td><td>AN2138R1</td><td></td></tr><tr><td>Cámara de guantes</td><td>Bel-Arte</td><td>F50030-0000</td><td>Si está disponible, se puede usar una guantera, pero en laboratorios con bajos niveles de humedad puede que no sea necesario</td></tr><tr><td>Agitador magnético de placa caliente</td><td>Material de laboratorio LLG</td><td>6.263 448</td><td></td></tr><tr><td>Aceite mineral ligero</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>330779</td><td></td></tr><tr><td>Nueva coccina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>199737</td><td></td></tr><tr><td>Junta tórica de caucho de nitrilo, diámetro exterior de 8 mm, diámetro exterior de 12 mm</td><td>RS</td><td>196-4863</td><td></td></tr><tr><td>Tapones de rosca abiertos con tabique ND24</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>548-0031A</td><td></td></tr><tr><td>Micropipeta P1000</td><td>Fisher Scientific</td><td>12346132</td><td></td></tr><tr><td>Micropipeta P10000</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>89079-978</td><td></td></tr><tr><td>Micropipeta P200</td><td>Fisher Scientific</td><td>12326132</td><td></td></tr><tr><td>Toallas de papel</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>KIMB6657</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>291-1214</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de pipeta (1000)</td><td>Eppendorf</td><td>0030000919</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de pipeta (10000)</td><td>Eppendorf</td><td>0030000765</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de pipeta (200)</td><td>Eppendorf</td><td>0030000870</td><td></td></tr><tr><td>Partículas de poliestireno, 1.1 &micro; m</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>LB11-1ML</td><td></td></tr><tr><td>Tapa de goma</td><td>Bioclass S.r.l.</td><td>12.2300.05</td><td></td></tr><tr><td>Junta cónica de goma</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>217-0211</td><td></td></tr><tr><td>Tapones de rosca&nbsp; ND24</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>548-0161A</td><td></td></tr><tr><td>Aceite de silicona AR20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10836</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de silicona (diámetro interno 1,6 mm, diámetro externo 3 mm)</td><td>RS</td><td>667-8441</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de silicona (diámetro interno 6 mm, diámetro externo 12 mm)</td><td>RS</td><td>273-2541</td><td>Al menos 6 m</td></tr><tr><td>Cruce de tres vías</td><td>RS</td><td>795-405</td><td></td></tr><tr><td>Cruce de dos vías</td><td>RS</td><td>419-7287</td><td></td></tr><tr><td>Válvula de dos vías</td><td>Claber</td><td>91280</td><td></td></tr><tr><td>Agua ultrapura</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>22934</td><td>Cuando esté disponible, este producto se puede reemplazar con agua purificada a través de los sistemas Milli-Q</td></tr><tr><td>Tijeras universales</td><td>Bochem</td><td>4154</td><td></td></tr></tbody></table>

uso del método de transferencia de gotas para preparar de forma fiable vesículas unilamelares gigantes

Using the Droplet Transfer Method to Reliably Prepare Giant Unilamellar Vesicles

Una preparación óptima de GUV se caracteriza por la formación de una fase oleosa clara y un gránulo distinto (Figura 4A). En los casos en que las gotas de agua no se convierten en GUV, generalmente colapsan y dejan restos de fosfolípidos en la interfaz OS/LS (Figura 4C). Este efecto es probablemente causado por la agregación de fosfolípidos y otras moléculas de la fase oleosa, como resultado de un equilibrio insuficiente de fosfolípidos en la interfaz agua/aceite. No obstante, a pesar de la ausencia de un gránulo visible o la presencia de desechos en la interfaz, aún se pueden formar GUV, lo que permite que el proceso continúe. Si bien los pasos de lavado no son del todo efectivos para eliminar todos los desechos de fosfolípidos, ayudan significativamente a eliminar las gotas de aceite, mejorando la calidad general de la muestra (compare la Figura 6A y la Figura 6B).
El uso de LS viejos o LS preparados en condiciones de alta humedad a menudo da como resultado dispersiones GUV reducidas con menor rendimiento y mayor contenido de agregados desordenados que probablemente estén formados por fosfolípidos y otras moléculas de la fase oleosa (Figura 6C). Para LS preparados en condiciones de alta humedad, observamos coeficientes de variación superiores a 0,8 en la producción de GUV (con muestras que contenían muy pocos GUV), mientras que para LS preparados en la cámara de guantes modificada, el coeficiente de variación fue inferior a 0,5.
Las diferentes condiciones de centrifugación pueden afectar el rendimiento y la calidad del GUV. A partir de un análisis cualitativo, 20 min a 3.300 × g se identificó como una buena condición para los GUV cargados de sacarosa (muestra E). La disminución de la velocidad (45 min a 500 × g) resultó en una reducción del rendimiento, mientras que un aumento (5 min a 16,600 × g) condujo a una mayor formación de agregados de fosfolípidos desordenados. Una fuerza centrífuga débil puede evitar que muchas gotas crucen la interfaz OS/LS, de ahí el rendimiento reducido, mientras que una fuerza fuerte puede no proporcionar tiempo suficiente para la organización de fosfolípidos en la valva externa durante el cruce de la interfaz (Figura 7). La encapsulación de micropartículas también se puede optimizar con ajustes en los parámetros de centrifugación, siempre que la densidad de masa de las micropartículas coincida aproximadamente con la del IS. Para ello, la disminución de la aceleración de la centrifugación (y a su vez el aumento del tiempo de centrifugación) permite una encapsulación más homogénea de las partículas, evitando la rotura de la membrana fosfolípida debido a la fuerza ejercida por las partículas sólidas (un ejemplo de buena encapsulación se muestra en la Figura 6D mientras la investigación de los parámetros óptimos de centrifugación aún está en curso17).
Debido a que la difusión de fosfolípidos puede verse afectada por la fase oleosa, se puede realizar una prueba cualitativa simple para evaluar la estabilidad de la emulsión (Figura 5). Con la ayuda de un colorante colorante (Brilliant Blue FCF) disuelto en el IS para mejorar la visualización, se pueden preparar emulsiones con diferentes proporciones agua/aceite y observarlas a lo largo del tiempo. La pérdida de estabilidad se puede visualizar por la agregación de gotas de agua y la consiguiente separación de la fase oleosa. Debido a que es menos probable que las gotas grandes (visibles a simple vista) se conviertan en GUV, recomendamos utilizar la condición de emulsión que proporciona la menor separación de fases.
El efecto de las variaciones en el protocolo se puede verificar a través de un análisis de distribución de tamaño como se describe en la sección 4 del protocolo: los diámetros de los GUV se pueden medir usando ImageJ a partir de imágenes de microscopio de contraste de fase, y la distribución de tamaño se puede analizar con un script disponible en GitHub16. Siguiendo este protocolo, fue posible, por ejemplo, observar un aumento de los GUV con diámetros más grandes cuando se elige aceite mineral en lugar de aceite de silicona AR20 (Figura 8).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig2v5.jpg"> 
Figura 2: Configuración de la cámara de guantes. Esta figura muestra las principales modificaciones de la cámara del guante para la preparación de la solución lipídica. (A) Conexión de entrada con nitrógeno y vacío; (B) conexión de entrada con la cámara del guante; (C) válvula de salida; (D) tapa con agujas para evaporación de solventes; (E) tubos delgados para evaporación de solventes; (F) partículas de sílice para absorber la humedad; G) elementos que deben colocarse en la cámara de los guantes: termohigrómetro digital (1), solución lipídica en disolvente orgánico (2), soporte para anillos de corcho (3), jeringa de vidrio (4), tapón abierto con tabique y agujas (5), solución de aceite (6), vial oscuro abierto con tapón (7), puntas de 10 ml (8), pipeta P10000 (9); (H) extremo de la tubería de salida sumergido en agua; (I) vial cerrado con tapa con agujas conectada a la entrada y salida; (J) esquemas de la cámara del guante modificada. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig3v5.jpg"> 
Figura 3: Recipiente para facilitar la eliminación del aceite. Pasos principales en la preparación de GUV en un recipiente para facilitar la extracción del aceite según la sección 2.1 del protocolo. (A) Se perfora un orificio en una tapa de tubo de 5 ml para permitir que encaje una punta P1000; luego (B) la tapa se coloca en un tubo vacío de 5 ml con la punta insertada en el orificio a través de una junta tórica. (C) Las soluciones se colocan en el tubo según las secciones 2.2 y 2.3 del protocolo, la punta se tapa y el tubo se coloca dentro de un tubo de 50 ml. Los GUV preparados a partir de 0,2 mM de DOPC en aceite de silicona se cargaron con 230,7 mM de sacarosa y 3,1 mM de azul brillante FCF para mejorar la visualización. (D) Después de la centrifugación, la fase oleosa superior queda atrapada dentro de la punta junto con una parte del tampón GUV (que parece cian debido a que parte de las gotas no se convierten en GUV y liberan el tinte en el OS). Gracias a la tapa de goma, la punta se puede quitar fácilmente del tubo de 5 ml junto con el contenido líquido, lo que permite una extracción rápida y fácil de toda la fase oleosa. (E) El gránulo GUV se puede recolectar fácilmente del fondo de un tubo en una dispersión clara, sin contaminación aparente por aceite, como se verificó (F) por microscopía de contraste de fase. Barra de escala = 20 μm. Abreviaturas: LS = solución lipídica; IS = solución interna; OS = solución externa; GUV = vesícula unilamelar gigante; DOPC = 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfocolina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig4v5.jpg"> 
Figura 4: Formación de GUV. Ejemplos de (A) interfaz OS/LS, (B) un gránulo GUV limpio con una fase oleosa clara y (C) un gránulo GUV con desechos en la interfaz OS/LS (los desechos y el gránulo aparecen rojizos porque el IS de esta población GUV se complementó con 1,65 mM de colorante de nueva coccina para mejorar la visualización). Abreviaturas: LS = solución lipídica; IS = solución interna; OS = solución externa; GUV = vesícula unilamelar gigante. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig4large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig6v5.jpg"> 
Figura 5: Estabilidad de la emulsión con diferentes proporciones de aceite y agua en aceite. La figura muestra la estabilidad de las emulsiones a lo largo del tiempo, dependiendo del tipo de aceite y de la relación agua/aceite (w/o) utilizada. El IS estaba compuesto por 230,7 mM de sacarosa y 3,1 mM de Azul Brillante FCF para mejorar la visualización de las emulsiones. Las emulsiones preparadas con aceite mineral son menos estables que sus contrapartes hechas con aceite de silicona AR20. Este efecto se amplifica aún más con el aumento de las relaciones sin motor. Aunque las emulsiones en el aceite de silicona AR20 son significativamente más estables, su estabilidad también disminuye a medida que aumenta la relación w/o, con una separación de fases visible inmediatamente después de la emulsificación (aceite de silicona AR20 al 10%). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig6large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig5v5.jpg"> 
Figura 6: Observación de GUV con un microscopio de contraste de fases. Un aumento de 20x de GUV cargados de sacarosa preparados a partir de un LS compuesto de 3,18 mM de DOPC en aceite mineral. (A) Muestra recuperada después de la eliminación de aceite; (B) muestra recuperada después de los pasos de lavado; (C) bajo rendimiento de GUV obtenido de un LS preparado en ambientes con oxígeno y humedad no regulados; (D) GUV cargados de micropartículas. Barra de escala = 10 μm; Las gotas de aceite están rodeadas con un círculo y los ejemplos de agregados desordenados de fosfolípidos y moléculas de aceite se indican con una flecha. Abreviaturas: LS = solución lipídica; GUV = vesículas unilamelares gigantes. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig5large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig7v5.jpg"> 
Figura 7: Efecto de diferentes condiciones de centrifugación en la formación de GUV. Imágenes de contraste de fase de GUV cargados de sacarosa preparados con un LS compuesto de 0,2 mM de DOPC en aceite de silicona AR20. La figura muestra una comparación cualitativa de GUV en (A) 16,600 × g durante 5 min, (B) 3,300 × g durante 20 min y (C) 500 × g durante 45 min. Mientras que la alta velocidad de centrifugación da como resultado una mayor presencia de agregados de fosfolípidos, la baja velocidad de centrifugación conduce a un rendimiento reducido. Barra de escala = 50 μm. Abreviaturas: LS = solución lipídica; GUV = vesícula unilamelar gigante; DOPC = 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfocolina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig7large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig8v5.jpg"> 
Figura 8: Análisis de distribución de tamaños. Comparación de dos muestras de GUV cargadas de sacarosa obtenidas de (A) 0,2 mM de DOPC en aceite mineral y (B) 0,2 mM de DOPC en aceite de silicona AR20 (*la muestra se diluyó 10x para permitir una clara distinción de GUV bajo un microscopio de contraste de fases). El análisis realizado siguiendo la sección 4 del protocolo muestra una distribución de tamaño desplazada hacia diámetros más altos para la muestra de aceite mineral con respecto a las muestras de aceite de silicona AR20. Sin embargo, el rendimiento de la muestra de silicona es casi 20 veces mayor. Abreviaturas: GUV = vesícula unilamelar gigante; DOPC = 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfocolina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig8large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Paso</td>
			<td>Condición E</td>
			<td>Condición P</td>
			<td>Descripción</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.1.1</td>
			<td>4,11 gramos</td>
			<td>17,11 gramos</td>
			<td>Masa de sacarosa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.1.1</td>
			<td>2,16 gramos</td>
			<td>2,16 gramos</td>
			<td>Masa de glucosa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.1.2</td>
			<td>240 mM</td>
			<td>1000 mM</td>
			<td>Concentración de sacarosa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.1.2</td>
			<td>240 mM</td>
			<td>240 mM</td>
			<td>Concentración de glucosa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.3.2</td>
			<td>Aceite de silicona</td>
			<td>Aceite mineral</td>
			<td>Fase oleosa para LS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.3.2</td>
			<td>Jeringa de vidrio de 0,1 ml</td>
			<td>Jeringa de vidrio de 0,5 ml</td>
			<td>Jeringa de vidrio para transferir DOPC en soluciones de cloroformo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.3.10</td>
			<td>63 μL</td>
			<td>500 μL</td>
			<td>Volumen de DOPC en solución de cloroformo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.3.16</td>
			<td>10 ml</td>
			<td>5 ml</td>
			<td>Volumen de aceite</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.4.1</td>
			<td>3300 g 20 minutos</td>
			<td>500 g 45 minutos</td>
			<td>Condiciones de centrifugación</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 1: Variaciones en el protocolo. La tabla informa variaciones para varios pasos del protocolo (indicados en la primera columna) para preparar dos poblaciones diferentes de GUV: GUV cargados de sacarosa (condición E) y GUV cargados de micropartículas (condición P).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>IDENTIFICACIÓN</td>
			<td>Pasos involucrados</td>
			<td>Diámetro interior (mm)</td>
			<td>Diámetro exterior (mm)</td>
			<td>Longitud (mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>1.2.1; 1.2.3</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2</td>
			<td>1.2.1; 1.2.4; 1.3.5</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3</td>
			<td>1.2.1; 1.2.4; 1.3.5</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4</td>
			<td>1.2.1; 1.2.4; 1.2.5</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>1.2.1; 1.2.6; 1.3.13</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6</td>
			<td>1.2.2; 1.2.7; 1.3.11</td>
			<td>3</td>
			<td>7</td>
			<td>50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7</td>
			<td>1.2.2; 1.2.7; 1.3.11</td>
			<td>3</td>
			<td>7</td>
			<td>50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8</td>
			<td>1.2.2; 1.2.9; 1.3.11; 1.3.15</td>
			<td>3</td>
			<td>7</td>
			<td>200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9</td>
			<td>1.2.2; 1.2.9; 1.3.11; 1.3.15</td>
			<td>3</td>
			<td>7</td>
			<td>200</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 2: Tuberías para conexiones de gas y vacío en la cámara del guante. La tabla enumera las dimensiones de los tubos de silicona utilizados para conectar la cámara del guante a las líneas de nitrógeno y vacío. Se proporcionan identificadores de referencia para facilitar el proceso de ensamblaje.

Uso del método de transferencia de gotas para preparar de forma fiable vesículas unilamelares gigantes

Over the past two decades, the droplet transfer method, also known as inverted emulsion, double emulsion, phase transfer, or emulsion transfer, has proven ...

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