Name: Desorción/ionización láser asistida por matriz guiada por fluorescencia con espectrometría de masas de posionización inducida por láser de células neuronales de rata individuales (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: Aprende espectrometría de masas MALDI-2 guiada por fluorescencia para análisis de células neuronales individuales de rata. Este protocolo computacional revela heterogeneidad lipídica y vincula perfiles moleculares con identidad celular en tejidos complejos.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Sunshine, H., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+lipids+and+cell+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Lipidol%22%5BJournal%5D)">Membrane lipids and cell signaling.</a> Curr Opin Lipidol. 28 (5), 408-413 (2017).</li>
<li>Van Meer, G., Voelker, D. R., Feigenson, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+lipids%3A+where+they+are+and+how+they+behave%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Membrane lipids: where they are and how they behave.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 9 (2), 112-124 (2008).</li>
<li>Cheng, K. W., Su, P. R., Feller, K. J. A., Chien, M. P., Hsu, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+Metabolic+Heterogeneity+of+Cancer+Cells+Using+Functional+Single-Cell+Selection+and+nLC+Combined+with+Multinozzle+Emitter+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Investigating the Metabolic Heterogeneity of Cancer Cells Using Functional Single-Cell Selection and nLC Combined with Multinozzle Emitter Mass Spectrometry.</a> Anal Chem. 96 (2), 624-629 (2024).</li>
<li>Neumann, E. K., Comi, T. J., Rubakhin, S. S., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+Heterogeneity+between+Astrocytes+and+Neurons+Revealed+by+Single-Cell+MALDI-MS+Combined+with+Immunocytochemical+Classification%5BTitle%5D)+AND+%22Ange+Chem%22%5BJournal%5D)">Lipid Heterogeneity between Astrocytes and Neurons Revealed by Single-Cell MALDI-MS Combined with Immunocytochemical Classification.</a> Ange Chem. 131 (18), 5971-5975 (2019).</li>
<li>Bhaduri, A., Neumann, E. K., Kriegstein, A. R., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Lipid+Heterogeneity+and+Diversity+in+the+Developing+Human+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22JACS+Au%22%5BJournal%5D)">Identification of Lipid Heterogeneity and Diversity in the Developing Human Brain.</a> JACS Au. 1 (12), 2261-2270 (2021).</li>
<li>Saliba, A. E., Westermann, A. J., Gorski, S. A., Vogel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA-seq%3A+advances+and+future+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA-seq: advances and future challenges.</a> Nuc Acid Res. 42 (14), 8845-8860 (2014).</li>
<li>Karas, M., Hillenkamp, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+desorption+ionization+of+proteins+with+molecular+masses+exceeding+10%2C000+daltons%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Laser desorption ionization of proteins with molecular masses exceeding 10,000 daltons.</a> Anal Chem. 60 (20), 2299-2301 (1988).</li>
<li>Croslow, S. W., Trinklein, T. J., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+multimodal+mass+spectrometry+for+single-cell+analysis+and+imaging+enhancement%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Advances in multimodal mass spectrometry for single-cell analysis and imaging enhancement.</a> FEBS Lett. 598 (6), 591-601 (2024).</li>
<li>Bien, T., Bessler, S., Dreisewerd, K., Soltwisch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission-Mode+MALDI+Mass+Spectrometry+Imaging+of+Single+Cells%3A+Optimizing+Sample+Preparation+Protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Transmission-Mode MALDI Mass Spectrometry Imaging of Single Cells: Optimizing Sample Preparation Protocols.</a> Anal Chem. 93 (10), 4513-4520 (2021).</li>
<li>Rappez, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SpaceM+reveals+metabolic+states+of+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">SpaceM reveals metabolic states of single cells.</a> Nat Methods. 18 (7), 799-805 (2021).</li>
<li>Comi, T. J., Neumann, E. K., Do, T. D., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((microMS%3A+A+Python+Platform+for+Image-Guided+Mass+Spectrometry+Profiling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spec%22%5BJournal%5D)">microMS: A Python Platform for Image-Guided Mass Spectrometry Profiling.</a> J Am Soc Mass Spec. 28 (9), 1919-1928 (2017).</li>
<li>Xie, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiscale+biochemical+mapping+of+the+brain+through+deep-learning-enhanced+high-throughput+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Multiscale biochemical mapping of the brain through deep-learning-enhanced high-throughput mass spectrometry.</a> Nat Methods. 21 (3), 521-530 (2024).</li>
<li>Neumann, E. K., Ellis, J. F., Triplett, A. E., Rubakhin, S. S., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+Analysis+of+30+000+Individual+Rodent+Cerebellar+Cells+Using+High-Resolution+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Lipid Analysis of 30 000 Individual Rodent Cerebellar Cells Using High-Resolution Mass Spectrometry.</a> Anal Chem. 91 (12), 7871-7878 (2019).</li>
<li>Soltwisch, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometry+imaging+with+laser-induced+postionization%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometry imaging with laser-induced postionization.</a> Science. 348 (6231), 211-215 (2015).</li>
<li>Barré, F. P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+Sensitivity+Using+MALDI+Imaging+Coupled+with+Laser+Postionization+%28MALDI-2%29+for+Pharmaceutical+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Enhanced Sensitivity Using MALDI Imaging Coupled with Laser Postionization (MALDI-2) for Pharmaceutical Research.</a> Anal Chem. 91 (16), 10840-10848 (2019).</li>
<li>McKinnon, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALDI-2-Enabled+Oversampling+for+the+Mass+Spectrometry+Imaging+of+Metabolites+at+Single-Cell+Resolution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spec%22%5BJournal%5D)">MALDI-2-Enabled Oversampling for the Mass Spectrometry Imaging of Metabolites at Single-Cell Resolution.</a> J Am Soc Mass Spec. 35 (11), 2729-2742 (2024).</li>
<li>Comi, T. J., Makurath, M. A., Philip, M. C., Rubakhin, S. S., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALDI+MS+Guided+Liquid+Microjunction+Extraction+for+Capillary+Electrophoresis-Electrospray+Ionization+MS+Analysis+of+Single+Pancreatic+Islet+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">MALDI MS Guided Liquid Microjunction Extraction for Capillary Electrophoresis-Electrospray Ionization MS Analysis of Single Pancreatic Islet Cells.</a> Anal Chem. 89 (14), 7765-7772 (2017).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcardiac+Perfusion+of+the+Mouse+for+Brain+Tissue+Dissection+and+Fixation%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Transcardiac Perfusion of the Mouse for Brain Tissue Dissection and Fixation.</a> Bio Protoc. 11 (5), e3988(2021).</li>
<li>Aboghazleh, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+brain+extraction+and+dissection%3A+A+comprehensive+approach%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Rodent brain extraction and dissection: A comprehensive approach.</a> MethodsX. 12, 102516(2024).</li>
<li>Jager, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+enzymatic+and+mechanical+methods+of+dissociation+on+neural+progenitor+cells+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of enzymatic and mechanical methods of dissociation on neural progenitor cells derived from induced pluripotent stem cells.</a> Adv Med Sci. 61 (1), 78-84 (2016).</li>
<li>Chan-Andersen, P. C., Romanova, E. V., Rubakhin, S. S., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+26%2C000+Aplysia+californica+neurons+by+single+cell+mass+spectrometry+reveals+neuronal+populations+with+distinct+neuropeptide+profiles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Profiling 26,000 Aplysia californica neurons by single cell mass spectrometry reveals neuronal populations with distinct neuropeptide profiles.</a> J Biol Chem. 298 (8), 102254(2022).</li>
<li>Castro, D. C., Xie, Y. R., Rubakhin, S. S., Romanova, E. V., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-guided+MALDI+mass+spectrometry+for+high-throughput+single-organelle+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Image-guided MALDI mass spectrometry for high-throughput single-organelle characterization.</a> Nat Methods. 18 (10), 1233-1238 (2021).</li>
<li>Castro, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-Cell+and+Subcellular+Analysis+Using+Ultrahigh+Resolution+21+T+MALDI+FTICR+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Single-Cell and Subcellular Analysis Using Ultrahigh Resolution 21 T MALDI FTICR Mass Spectrometry.</a> Anal Chem. 95 (17), 6980-6988 (2023).</li>
<li>Ibáñez, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometry-based+metabolomics+of+single+yeast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometry-based metabolomics of single yeast cells.</a> Proc Natl Acad Sci. 110 (22), 8790-8794 (2013).</li>
<li>Krestensen, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Profiling+of+Glioblastoma+Patient-Derived+Single+Cells+Using+Combined+MALDI-MSI+and+MALDI-IHC%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Molecular Profiling of Glioblastoma Patient-Derived Single Cells Using Combined MALDI-MSI and MALDI-IHC.</a> Anal Chem. 97 (7), 3846-3854 (2025).</li>
<li>Niehaus, M., Soltwisch, J., Belov, M. E., Dreisewerd, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission-mode+MALDI-2+mass+spectrometry+imaging+of+cells+and+tissues+at+subcellular+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Transmission-mode MALDI-2 mass spectrometry imaging of cells and tissues at subcellular resolution.</a> Nat Methods. 16 (9), 925-931 (2019).</li>
<li>Xie, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Data-Driven+and+Machine+Learning-Based+Framework+for+Image-Guided+Single-Cell+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Data-Driven and Machine Learning-Based Framework for Image-Guided Single-Cell Mass Spectrometry.</a> J Proteome Res. 22 (2), 491-500 (2023).</li>
<li>Luu, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TIMSCONVERT%3A+a+workflow+to+convert+trapped+ion+mobility+data+to+open+data+formats%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">TIMSCONVERT: a workflow to convert trapped ion mobility data to open data formats.</a> Bioinformatics. 38 (16), 4046-4047 (2022).</li>
<li>Vandergrift, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+and+Computational+Evaluation+of+Lipidomic+In-Source+Fragmentation+as+a+Result+of+Postionization+with+Matrix-Assisted+Laser+Desorption%2FIonization%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Experimental and Computational Evaluation of Lipidomic In-Source Fragmentation as a Result of Postionization with Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization.</a> Anal Chem. 96 (41), 16127-16133 (2024).</li>
<li>Zhang, Y., Parmigiani, G., Johnson, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ComBat-seq%3A+batch+effect+adjustment+for+RNA-seq+count+data%5BTitle%5D)+AND+%22NAR+Genom+Bioinfo%22%5BJournal%5D)">ComBat-seq: batch effect adjustment for RNA-seq count data.</a> NAR Genom Bioinfo. 2 (3), lqaa078(2020).</li>
<li>Nemes, P., Knolhoff, A. M., Rubakhin, S. S., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-Cell+Metabolomics%3A+Changes+in+the+Metabolome+of+Freshly+Isolated+and+Cultured+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Single-Cell Metabolomics: Changes in the Metabolome of Freshly Isolated and Cultured Neurons.</a> ACS Chem Neurosci. 3 (10), 782-792 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2',5'-dihidroxiacetofenona</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D107603</td><td>DHAP, 97% de pureza</td></tr><tr><td>Acetato de amonio</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td>238074 reactivo ACS, &ge; 97%</td></tr><tr><td>Axio M2 Imager</td><td>Zeiss</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Punzón de biopsia, 2 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-399</td><td>integra Miltex Standard Biopsy punch, 2mm</td></tr><tr><td>Cloruro de calcio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C4901</td><td>anhidro, polvo y ge; </td></tr><tr><td>Centrífuga Eppendorf</td> al 97% <td>Centrífuga Sigma Aldrich</td><td>EP5405000441</td><td>5425 con rotor FA-24x2</td></tr><tr><td>Gentamicina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G1272</td><td>líquido, BioReactivo</td></tr><tr><td>Lápiz de grabado de vidrio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z225568</td><td>tiempo de carburo, paquete de 1</td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G7893</td><td>ACS reactivo, &ge; Tampón HEPES al 99,5%</td></tr> <tr><td></td><td>Sigma Aldrich</td><td>H3375</td><td>&ge; 99,5% (titulación)</td></tr><tr><td>Hoechst 33258 Solución</td><td>Sigma Aldrich</td><td>94403</td><td>1 mg/ml en H2O, &ge; 98,0% (HPLC)</td></tr><tr><td>Filtro HEPA en línea</td><td>Sigma Aldrich</td><td>WHA67225001</td><td>VACU-GUARD Disco de 60 mm, carcasa de 0,45 PFTE</td></tr><tr><td>Portaobjetos de microscopía recubiertos de ITO</td> Delta <td>Technologies</td><td>CG-90IN-S115</td><td>70-100&Omega; resistencia</td></tr><tr><td>Cloruro de magnesio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M8266</td><td>anhidro, &ge; 98%</td></tr><tr><td>Sulfato de magnesio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>208094</td><td>anhidro, &ge; Tubos</td></tr> <tr>de <td>microcentrífuga</td> al 97% <td>Sigma Aldrich</td><td></td><td>Capacidad del tubo de HS4323K 1,5 ml, paquete de 500 Sistema de</td></tr><tr><td>disociación de papaína</td><td>Worthington Biochemical&nbsp;</td><td>LK003150</td><td>una caja, 5 viales de un solo uso</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4458</td><td>líquido, BioReactivo</td></tr><tr><td>Cloruro de potasio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>529552</td> Fosfato de potasio monobásico de <td>grado de biología molecular</td></tr><tr><td></td><td>Reactivo Sigma Aldrich</td><td>P5379</td><td>Más</td></tr><tr><td>biocarbonato de sodio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S6014</td><td>ACS reactivo, &ge; 99,7%</td></tr><tr><td>Cloruro de sodio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9888</td><td>ACS reactivo, &ge; Hidróxido</td></tr> <tr><td>de sodio</td> al 99% <td>Sigma Aldrich</td><td>221465</td><td>reactivo ACS, &ge; 97%, pellets</td></tr><tr><td>Fosfato de sodio dibásico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9763</td><td>ACS reactivo, &ge; 99%</td></tr><tr><td>Sublimar</td><td>HTX</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>timsTOF FleX MALDI-2</td><td>Bruker</td><td>N/A</td><td>microGRID habilitado</td></tr><tr><td>para tubos de vacío&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>8701-0080</td><td>Tubo de PVC sin ftalatos Nalgene&nbsp;</td></tr></tbody></table>

desorción/ionización láser asistida por matriz guiada por fluorescencia con espectrometría de masas de posionización inducida por láser de células neuronales de rata individuales

Fluorescence-Guided Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization with Laser-Induced Postionization Mass Spectrometry of Individual Rat Neural Cells

En la Figura 1 se muestra una descripción general del flujo de trabajo para la EM MALDI-2 de una sola célula guiada por fluorescencia. En primer lugar, el tejido diseccionado de las regiones cerebrales objetivo (Figura 1A) se disocia en células individuales y se deposita en portaobjetos de microscopía conductores recubiertos de ITO (Figura 1B). Las ubicaciones de las células se determinan mediante imágenes de fluorescencia de portao...

Desorción/ionización láser asistida por matriz guiada por fluorescencia con espectrometría de masas de posionización inducida por láser de células neuronales de rata individuales

Single-cell measurements are critical to understanding the rich spatiochemical heterogeneity of the brain. Matrix-assisted laser/desorption ionization ...

fluorescence-guided-matrix-assisted-laser-desorptionionization-with

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Farmacoterapia de reemplazo de dopamina mediante L-DOPA es el tratamiento más comúnmente utilizado sintomático de la enfermedad de Parkinson, pero se acompaña de efectos secundarios como movimientos involuntarios anormales, discinesia...

Imagen de Espectrometría de Masas MALDI de neuropéptidos en la enfermedad de Parkinson

Fuente: Hare, D. J., et.al.  Obtención de imágenes de metales en tejido cerebral mediante ablación láser - plasma acoplado inductivamente - espectrometría de masas (LA-ICP-MS). J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra el uso de la espectrometría de masas de plasma acoplado inductivamente por ablación láser (LA-ICP-MS) para visualizar y cuantificar las distribuciones de metales en el tejido cerebral de ratón. El protocolo implica la ablación láser para generar un aerosol de partículas de muestra,...

Ablación láser por espectrometría de masas de plasma acoplada inductivamente para visualizar metales en tejido cerebral de ratón

Se describe cómo utilizar la microdisección de captura por láser (LCM) para obtener poblaciones enriquecidas de las neuronas del hipocampo o neuronas individuales de las secciones congeladas del cerebro de rata lesionado para el posterior análisis de expresión génica usando PCR en tiempo real cuantitativa y / o microarrays de todo el genoma.

Captura de microdisección láser poblaciones enriquecidas de neuronas o neuronas individuales para análisis de expresión génica después de una lesión cerebral traumática

Células neuroprogenitoras Humanos (CPN) se ampliaron en condiciones proliferantes. NPC se diferenciaron en cultivos de neuronas-rica en la presencia de una combinación de neurotrofinas. Marcadores neuronales se detectaron por tinción de inmunofluorescencia. Para aislar una población pura de las neuronas, NPCs se diferenciaron en láminas de membrana PEN y se realizó con láser captura microdissection.

Microdisección de captura por láser de neuronas a partir de células diferenciadas neuroprogenitoras humanas en cultivo

Este protocolo describe el diseño y la implantación quirúrgica de un mecanismo de restricción de la cabeza para monitorear la actividad neuronal en las estructuras cerebrales subcorticales en ratas alerta.  Delinea procedimientos para aislar neuronas individuales en la configuración yuxtacelular e identificar eficientemente sus ubicaciones anatómicas.

Monitoreo Juxtacellular y localización de las neuronas individual dentro de las estructuras cerebrales subcorticales de Alerta, ratas Head-restringido

El aislamiento de las neuronas de dopamina individuales o el área tegmental ventral con inmunohistoquímica directa o indirecta se demuestra utilizando láser captura microdissection. Se discuten los parámetros para el aislamiento de tejido de un portaobjetos de vidrio usando un láser de infrarrojos y a partir de diapositivas membrana utilizando la combinación de un láser infrarrojo y ultravioleta.

Microdisección de captura por láser - Una demostración del aislamiento individual de dopamina neuronas y el Área ventral tegmental completo

La expresión de genes de un subconjunto de células en un tejido específico representa un reto importante. En este artículo se describe cómo aislar el ARN total de alta calidad a partir de una población de células específicas mediante la combinación de un método immunolabeling rápida con láser captura microdissection.

Aislamiento de ARN a partir de células subpoblaciones específicas utilizando láser captura Microdissection Combinado con Rapid Immunolabeling

El objetivo de este protocolo es utilizar la técnica de clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) para clasificar tipos específicos de células neuronales para su posterior análisis de la expresión génica específica del tipo de célula, marcadores epigenéticos y/o expresión de proteínas.

Utilizando fluorescencia clasificación de células activadas para examinar Cell-tipo-específica la expresión génica en el tejido de cerebro de rata

Describimos una técnica para etiquetar las neuronas y sus procesos a través de anterógrada o retrógrada trazadores inyecciones en núcleos cerebrales utilizando una preparación in vitro. Hemos modificado un método existente de i n vitro electroporación trazador mediante el aprovechamiento de la etiqueta fluorescente mutantes de ratón y equipo óptico básica con el fin de aumentar la precisión de etiquetado.

Neuronal Tracing en explantes cerebrales guiadas por láser

Se presenta un protocolo para la sublimación de la matriz DAN en tejido cerebral de rata para la detección de gangliósidos utilizando la espectrometría de masas de imágenes MALDI.

Sublimación de DAN Matriz para la detección y visualización de gangliósidos en el tejido cerebral de la rata por MALDI Imaging Espectrometría de Masas

Este protocolo explica cómo recoger neuronas individuales, microglia y astrocitos del núcleo central de la amígdala con alta precisión y especificidad anatómica utilizando microdisección de captura láser. Además, explicamos nuestro uso de RT-qPCR microfluídico para medir un subconjunto del transcriptoma de estas células.

Combinación de microdisección de captura láser y qPCR microfluídico para analizar perfiles transcripcionales de células únicas: un enfoque de biología de sistemas para la dependencia de opioides

Aprende espectrometría de masas MALDI-2 guiada por fluorescencia para análisis de células neuronales individuales de rata. Este protocolo computacional revela heterogeneidad lipídica y vincula perfiles moleculares con identidad celular en tejidos complejos.

Desorción/ionización láser asistida por matriz guiada por fluorescencia con espectrometría de masas de posionización inducida por láser de células neuronales de rata individuales (Video) | JoVE Journal

Desorción/ionización láser asistida por matriz guiada por fluorescencia con espectrometría de masas de posionización inducida por láser de células neuronales de rata individuales

Explorar más videos