Name: Bioimpresión de cortes tumorales de hidrogel como modelo 3D para el linfoma de células del manto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-12T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 31 s
Description: Aprende a bioimprimir cortes tumorales de hidrogel para estudiar el linfoma de células del manto. Este modelo 3D mejora la relevancia fisiológica y permite analizar la resistencia a fármacos.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Jain, P., Wang, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mantle+cell+lymphoma+in+2022-a+comprehensive+update+on+molecular+pathogenesis%2C+risk+stratification%2C+clinical+approach%2C+and+current+and+novel+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hematol%22%5BJournal%5D)">Mantle cell lymphoma in 2022-a comprehensive update on molecular pathogenesis, risk stratification, clinical approach, and current and novel treatments.</a> Am J Hematol. 97 (5), 638-656 (2022).</li>
<li>Lee, J., Cuddihy, M. J., Kotov, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+cell+culture+matrices%3A+State+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+B+Rev%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional cell culture matrices: State of the art.</a> Tissue Eng Part B Rev. 14 (1), 61-86 (2008).</li>
<li>Wen, T., Wang, J., Shi, Y., Qian, H., Liu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitors+targeting+Bruton%27s+tyrosine+kinase+in+cancers%3A+Drug+development+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Inhibitors targeting Bruton's tyrosine kinase in cancers: Drug development advances.</a> Leukemia. 35 (2), 312-332 (2021).</li>
<li>Lee, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+1%2F2+study+of+zilovertamab+and+ibrutinib+in+mantle+cell+lymphoma+%28mcl%29+or+chronic+lymphocytic+leukemia+%28cll%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Phase 1/2 study of zilovertamab and ibrutinib in mantle cell lymphoma (mcl) or chronic lymphocytic leukemia (cll).</a> J Clin Oncol. 40 (16_suppl), 7520(2022).</li>
<li>Roué, G., Sola, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+drug+resistance+in+mantle+cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Management of drug resistance in mantle cell lymphoma.</a> Cancers. 12 (6), 1565(2020).</li>
<li>Araujo-Ayala, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+patient-derived+3d+model+recapitulates+mantle+cell+lymphoma+lymph+node+signaling%2C+immune+profile%2C+and+in+vivo+ibrutinib+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">A novel patient-derived 3d model recapitulates mantle cell lymphoma lymph node signaling, immune profile, and in vivo ibrutinib responses.</a> Leukemia. 37 (6), 1311-1323 (2023).</li>
<li>Bryant, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+intermediate-grade+%28mantle+cell%29+and+low-grade+%28small+lymphocytic+and+marginal+zone%29+human+non-Hodgkin%27s+lymphomas+xenotransplanted+in+severe+combined+immunodeficiency+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Development of intermediate-grade (mantle cell) and low-grade (small lymphocytic and marginal zone) human non-Hodgkin's lymphomas xenotransplanted in severe combined immunodeficiency mouse models.</a> Lab Invest. 80 (4), 557-573 (2000).</li>
<li>Andersen, T., Auk-Emblem, P., Dornish, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3d+cell+culture+in+alginate+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Microarrays%22%5BJournal%5D)">3d cell culture in alginate hydrogels.</a> Microarrays. 4 (2), 133-161 (2015).</li>
<li>Frantz, C., Stewart, K. M., Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+extracellular+matrix+at+a+glance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The extracellular matrix at a glance.</a> J Cell Sci. 123 (24), 4195-4200 (2010).</li>
<li>Jubelin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+in+vitro+culture+models+in+oncology+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biosci%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional in vitro culture models in oncology research.</a> Cell Biosci. 12 (1), 155(2022).</li>
<li>Hickman, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+models+of+cancer+for+pharmacology+and+cancer+cell+biology%3A+Capturing+tumor+complexity+in+vitro%2Fex+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+J%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional models of cancer for pharmacology and cancer cell biology: Capturing tumor complexity in vitro/ex vivo.</a> Biotechnol J. 9 (9), 1115-1128 (2014).</li>
<li>Rossi, M., Alviano, F., Righi, S., Sabattini, E., Agostinelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+models%3A+A+novel+approach+for+lymphoma+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Res+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional models: A novel approach for lymphoma research.</a> J Cancer Res Clin Oncol. 148 (4), 753-765 (2022).</li>
<li>Saba, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenic+role+of+B-cell+receptor+signaling+and+canonical+nf-%CE%BAb+activation+in+mantle+cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Pathogenic role of B-cell receptor signaling and canonical nf-κb activation in mantle cell lymphoma.</a> Blood. 128 (1), 82-92 (2016).</li>
<li>Chiron, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rational+targeted+therapies+to+overcome+microenvironment-dependent+expansion+of+mantle+cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Rational targeted therapies to overcome microenvironment-dependent expansion of mantle cell lymphoma.</a> Blood. 128 (24), 2808-2818 (2016).</li>
<li>Nylund, P., Nikkarinen, A., Ek, S., Glimelius, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Empowering+macrophages%3A+The+cancer+fighters+within+the+tumour+microenvironment+in+mantle+cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Empowering macrophages: The cancer fighters within the tumour microenvironment in mantle cell lymphoma.</a> Front Immunol. 15, 1373269(2024).</li>
<li>Nygren, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+levels+are+prognostic+in+mantle+cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">T-cell levels are prognostic in mantle cell lymphoma.</a> Clin Cancer Res. 20 (23), 6096-6104 (2014).</li>
<li>Medina, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cells+protect+mantle+cell+lymphoma+cells+from+spontaneous+and+drug-induced+apoptosis+through+secretion+of+b-cell+activating+factor+and+activation+of+the+canonical+and+non-canonical+nuclear+factor+%CE%BAb+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cells protect mantle cell lymphoma cells from spontaneous and drug-induced apoptosis through secretion of b-cell activating factor and activation of the canonical and non-canonical nuclear factor κb pathways.</a> Haematologica. 97 (8), 1255-1263 (2012).</li>
<li>Jindal, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+cers6-as1%2Ffgfr1+axis+as+synthetic+vulnerability+to+constrain+stromal+cells+supported+proliferation+in+mantle+cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Targeting cers6-as1/fgfr1 axis as synthetic vulnerability to constrain stromal cells supported proliferation in mantle cell lymphoma.</a> Leukemia. 38 (10), 2196-2209 (2024).</li>
<li>Nie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+patient-derived+organoid+culture+platform+for+mantle+cell+lymphoma+drug+sensitivity+and+car+t+cell+anti-tumor+activity+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Establishment of a patient-derived organoid culture platform for mantle cell lymphoma drug sensitivity and car t cell anti-tumor activity assay.</a> Blood. 140 (Supplement 1), 9219-9220 (2022).</li>
<li>Hinton, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+printing+of+complex+biological+structures+by+freeform+reversible+embedding+of+suspended+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional printing of complex biological structures by freeform reversible embedding of suspended hydrogels.</a> Sci Adv. 1 (9), e1500758(2015).</li>
<li>Van Der Kuip, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-term+culture+of+breast+cancer+tissues+to+study+the+activity+of+the+anticancer+drug+Taxol+in+an+intact+tumor+environment%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Short-term culture of breast cancer tissues to study the activity of the anticancer drug Taxol in an intact tumor environment.</a> BMC Cancer. 6 (1), 86(2006).</li>
<li>Scaduto, R. C., Grotyohann, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+mitochondrial+membrane+potential+using+fluorescent+rhodamine+derivatives%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Measurement of mitochondrial membrane potential using fluorescent rhodamine derivatives.</a> Biophys J. 76 (1), 469-477 (1999).</li>
<li>Porter, A. G., Jänicke, R. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+roles+of+caspase-3+in+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differentiat%22%5BJournal%5D)">Emerging roles of caspase-3 in apoptosis.</a> Cell Death Differentiat. 6 (2), 99-104 (1999).</li>
<li>Huseynov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+mantle+cell+lymphoma+in+transplant+non-eligible+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Hematol+Transfus+Cell+Ther%22%5BJournal%5D)">Treatment of mantle cell lymphoma in transplant non-eligible patients.</a> Hematol Transfus Cell Ther. 44, S2-S3 (2022).</li>
<li>Augustine, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3d+bioprinted+cancer+models%3A+Revolutionizing+personalized+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Oncol%22%5BJournal%5D)">3d bioprinted cancer models: Revolutionizing personalized cancer therapy.</a> Transl Oncol. 14 (4), 101015(2021).</li>
<li>Budharaju, H., Sundaramurthi, D., Sethuraman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embedded+3d+bioprinting+%E2%80%93+an+emerging+strategy+to+fabricate+biomimetic+%26+large+vascularized+tissue+constructs%5BTitle%5D)+AND+%22Bioact+Mater%22%5BJournal%5D)">Embedded 3d bioprinting – an emerging strategy to fabricate biomimetic & large vascularized tissue constructs.</a> Bioact Mater. 32, 356-384 (2024).</li>
<li>Seaman, K., Sun, Y., You, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+cancer-on-a-chip+tissue+models+to+dissect+the+tumour+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Med-X%22%5BJournal%5D)">Recent advances in cancer-on-a-chip tissue models to dissect the tumour microenvironment.</a> Med-X. 1 (1), 11(2023).</li>
<li>Davies, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capturing+complex+tumour+biology+in+vitro%3A+Histological+and+molecular+characterisation+of+precision+cut+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Capturing complex tumour biology in vitro: Histological and molecular characterisation of precision cut slices.</a> Sci Rep. 5 (1), 17187(2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Millipore+PICM03050%3A+Millicell+Standing+Cell+Culture+Inserts+Data+Sheet%22">Millipore PICM03050: Millicell Standing Cell Culture Inserts Data Sheet</a>. , Merck KGaA. Darmstadt, Germany. (2025).</li>
<li>Lamaison, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+3d+culture+model+recapitulates+primary+fl+b-cell+features+and+promotes+their+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Adv%22%5BJournal%5D)">A novel 3d culture model recapitulates primary fl b-cell features and promotes their survival.</a> Blood Adv. 5 (23), 5372-5386 (2021).</li>
<li>Kramer, R. H., Rosen, S. D., McDonald, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basement-membrane+components+associated+with+the+extracellular+matrix+of+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Basement-membrane components associated with the extracellular matrix of the lymph node.</a> Cell Tissue Res. 252 (2), 367-375 (1988).</li>
<li>Kaldjian, E. P., Gretz, J. E., Anderson, A. O., Shi, Y., Shaw, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+molecular+organization+of+lymph+node+T+cell+cortex%3A+A+labyrinthine+cavity+bounded+by+an+epithelium-like+monolayer+of+fibroblastic+reticular+cells+anchored+to+basement+membrane-like+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunol%22%5BJournal%5D)">Spatial and molecular organization of lymph node T cell cortex: A labyrinthine cavity bounded by an epithelium-like monolayer of fibroblastic reticular cells anchored to basement membrane-like extracellular matrix.</a> Int Immunol. 13 (10), 1243-1253 (2001).</li>
<li>German, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plug-and-play+lymph+node-on-chip%3A+Secondary+tumor+modeling+by+the+combination+of+cell+spheroid%2C+collagen+sponge%2C+and+T-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Plug-and-play lymph node-on-chip: Secondary tumor modeling by the combination of cell spheroid, collagen sponge, and T-cells.</a> Int J Mol Sci. 24 (4), 3183(2023).</li>
<li>Benton, G., Arnaoutova, I., George, J., Kleinman, H. K., Koblinski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrigel%3A+From+discovery+and+ecm+mimicry+to+assays+and+models+for+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliver+Rev%22%5BJournal%5D)">Matrigel: From discovery and ecm mimicry to assays and models for cancer research.</a> Adv Drug Deliver Rev. 79-80, 3-18 (2014).</li>
<li>Ogassavara, B., Tucunduva Neto, R. R., De Souza, R. R., Tucunduva, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+evaluation+of+the+morphometric+patterns+of+lymph+nodes+of+the+head+and+neck+in+young+and+middle-aged+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22Radiol+Brasileira%22%5BJournal%5D)">Ultrasound evaluation of the morphometric patterns of lymph nodes of the head and neck in young and middle-aged individuals.</a> Radiol Brasileira. 49 (4), 225-228 (2016).</li>
<li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+and+its+therapeutic+potential+for+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix and its therapeutic potential for cancer treatment.</a> Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 1-24 (2021).</li>
<li>Subrahmanyam, N., Ghandehari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harnessing+extracellular+matrix+biology+for+tumor+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Personalized+Med%22%5BJournal%5D)">Harnessing extracellular matrix biology for tumor drug delivery.</a> J Personalized Med. 11 (2), 88(2021).</li>
<li>Ahmad, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+of+extracellular+matrix+and+drug+correlations+in+disease+management%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+J+Pharma+Sci%22%5BJournal%5D)">Prospective of extracellular matrix and drug correlations in disease management.</a> Asian J Pharma Sci. 16 (2), 147-160 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>&micro;-slide 8 Pocillos Fondo de Vidrio</td><td>ibidi GmbH</td><td>80827</td><td>Portaobjetos con fondo de vidrio utilizados para imágenes en vivo de cortes de hidrogel</td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Carl Roth GmbH + Co.KG</td><td>9150.1</td><td>Componente Bioink</td></tr><tr><td>10X RPMI-1640 Medio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R1145</td><td>Componente Bioink</td></tr><tr><td>Jeringa hermética a gas de 2,5 ml Modelo 1002 TLL</td><td>Hamilton</td><td>81420</td><td>Jeringa para bioimpresión</td></tr><tr><td>Impresora de extrusión 3D, PrintrBot Simple</td><td>Printrbot</td><td></td><td>Automodificado para permitir la impresión de biotintas</td></tr><tr><td>Placa de 6 pocillos</td><td>Th. Geyer GmbH & Co.KG</td><td>7696790</td><td>Cultivo de las rodajas de hidrogel</td></tr><tr><td>Sistemas de filtración al vacío para la parte superior de la botella, membrana PES, 500 ml, 0,22 &micro; tamaño de poro m, 70&nbsp; membrana de mm de diámetro</td><td>Corning Inc.</td><td>513-3355</td><td>Filtración estéril de tampones</td></tr><tr><td>Cloruro de calcio deshidratado</td><td>Carl Roth GmbH + Co.KG</td><td>T885.2</td><td>Componente del tampón de lavado y la suspensión de gelatina</td></tr><tr><td>Colágeno I de rata</td><td>Corning Inc.</td><td>CLS354249</td><td>Componente Bioink</td></tr><tr><td>Software Cura Versión 15.04.5 para impresión 3D</td><td>Creador de ultisurf</td><td></td><td>Software utilizado para la impresión 3D</td></tr><tr><td>DRAQ5</td><td>Biostatus Ltd.</td><td>DR50050</td><td>Tinción para imágenes en vivo de cortes de hidrogel</td></tr><tr><td>Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) sal disódica dihidratada</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E5134</td><td>Componente del tampón de disolución de alginato</td></tr><tr><td>Contador automático de células EVE</td><td>Nano EnTek Inc.</td><td>10027-452</td><td>Contador de células</td></tr><tr><td>Placas de Petri bacteriológicas Falcon con tapa, 35 mm de diámetro</td><td>Halcón</td><td>351008</td><td>Relleno de lechada de gelatina para formar el baño de soporte para la bioimpresión</td></tr><tr><td>Tubos Falcon, 50 mL</td><td>Sarstedt AG & Co.KG</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal de ternero</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0615</td><td>Suplemento de medio de cultivo celular</td></tr><tr><td>Gelatina de piel de cerdo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1890</td><td>Componente principal de la suspensión de gelatina</td></tr><tr><td>HEPES, ácido libre, grado de biología molecular</td><td>Merck KGaA</td><td>CAS 7365-45-9</td><td>Componente del tampón de lavado y la suspensión de gelatina</td></tr><tr><td>Línea celular Jeko-1 MCL</td><td>ATCC</td><td>CRL-3006</td><td>Línea celular MCL</td></tr><tr><td>Toallitas de precisión KIMTECH Science</td><td>Corporación Kimberly Clark</td><td>7551</td><td>Se utiliza para extraer el exceso de agua de la suspensión de gelatina y para eliminar las gotas de la boquilla de la impresora 3D</td></tr><tr><td>Software LAS X Versión 3.5.7.23225</td><td>Leica</td><td></td><td>Software utilizado para reconstrucciones 3D</td></tr><tr><td>Microscopio de barrido láser confocal Leica TCS SP8</td><td>Leica</td><td>TCS SP8</td><td>Microscopio confocal para imágenes en vivo</td></tr><tr><td>Mason Jar Pinta Regular 16 oz</td><td>Corporación de bolas</td><td>G001</td><td>Frasco en el que se prepara la lechada de gelatina</td></tr><tr><td>Matriz de membrana basal con factor de crecimiento reducido (GFR) de Matrigel</td><td>Corning Inc.</td><td>356231</td><td>Componente Bioink</td></tr><tr><td>Inserto de cultivo celular Millicell, 0.4 &micro; m tamaño de poro</td><td>Merck KGaA</td><td>PICMORG 50</td><td>Soporte de filtro para rodajas de hidrogel</td></tr><tr><td>Sustrato NucView 405 Caspase-3, 1 mM en 1x PBS</td><td>Biotio</td><td>10405</td><td>Tinción para imágenes en vivo de cortes de hidrogel</td></tr><tr><td>Licuadora de la serie profesional Oster</td><td>Oster</td><td>BPST02-B00</td><td>Licuadora para generar lechada de gelatina</td></tr><tr><td>Penicilina/Estreptamicina</td><td>Gibco</td><td>15140163</td><td>Suplemento para medio de cultivo celular MCL</td></tr><tr><td>Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay-Kits und dsDNA-Reagenzien</td><td>Invitrogen</td><td>P7589</td><td>Tinción para imágenes en vivo de cortes de hidrogel</td></tr><tr><td>Rotina 35 R</td><td>Hettich</td><td>24573</td><td>Centrifugación de células</td></tr><tr><td>Centrífuga ROTINA 38/38R</td><td>Hettich</td><td>Z720109</td><td>Centrifugación de lechada de gelatina</td></tr><tr><td>RPMI-1640 + GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>61870036</td><td>Base del medio de cultivo para células MCL</td></tr><tr><td>Alginato de sodio</td><td>Cooperación FMC</td><td>GQ9109901</td><td>Componente Bioink</td></tr><tr><td>Cloruro de sodio</td><td>Merck KGaA</td><td>1.06404</td><td>Componente del tampón de disolución de alginato</td></tr><tr><td>Citrato de sodio</td><td>Carl Roth GmbH + Co.KG</td><td>3580.1</td><td>Componente del tampón de disolución de alginato</td></tr><tr><td>Cánulas de aplicación roma Sterican 21G 0,8x22 mm</td><td>B. Braun</td><td>9180109</td><td>Boquilla para impresión 3D</td></tr><tr><td>Tetrametilrodamina-metiléster-perclorato (TMRM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5428</td><td>Tinción para imágenes en vivo de cortes de hidrogel</td></tr><tr><td>Azul de tripano, 0,4%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154</td><td>Tinción para análisis de viabilidad</td></tr><tr><td>Termómetro resistente al agua</td><td>VWR</td><td>620-2099</td><td>Termómetro para controlar la temperatura de la suspensión de gelatina</td></tr></tbody></table>

bioimpresión de cortes tumorales de hidrogel como modelo 3d para el linfoma de células del manto

Bioprinting of Hydrogel Tumor Slices as a 3D Model for Mantle Cell Lymphoma

Los cortes tumorales de hidrogel que contienen células MCL se generaron con el protocolo descrito anteriormente. Los pasos del flujo de trabajo para la impresión 3D y el cultivo de los cortes tumorales de hidrogel se muestran en la Figura 1A. La impresora 3D utilizada se modificó para la impresión FRESH mediante la adición de un extensor de bomba de jeringa como se describe en Hinton et al.20 (Figura 1B). Se imprimieron hasta cinco rodajas a la vez (Figura 1C) y se cultivaron en un soporte de filtro (Figura 1D). Se agregó medio debajo del soporte del filtro para proporcionar un suministro de nutrientes a las rodajas tumorales de hidrogel. Se agregó una gota de medio en la parte superior de cada rebanada tumoral de hidrogel para evitar que se sequen. En la Figura 1E se muestra una descripción general de cinco cortes de tumor de hidrogel cultivados en un soporte de filtro, junto con imágenes de primer plano de un corte de hidrogel. Durante un período de cultivo de 3 días, los cortes tumorales de hidrogel se mantuvieron estables y mantuvieron su estructura (Figura 2A). Inmediatamente después de la impresión, las burbujas de aire estaban presentes en las rodajas de tumor de hidrogel, pero desaparecieron durante el cultivo (Figura 2A).
La viabilidad de la línea celular MCL Jeko-1 cultivada en cortes tumorales de hidrogel (3D) en comparación con las células Jeko-1 cultivadas en cultivo en suspensión (2D) se evaluó mediante un ensayo de exclusión de azul de tripano (Figura 2B). Después de 3 días de cultivo, el 80% de las células eran viables, en comparación con una viabilidad inicial del 88% de las células Jeko-1 antes de la impresión. Las células Jeko-1 cultivadas en 2D mantuvieron la viabilidad inicial del 88%. No hubo diferencias significativas entre las células Jeko-1 cultivadas en 2D y 3D. Para evaluar si las células Jeko-1 proliferan en las rodajas de hidrogel, se determinó el número medio de células Jeko-1 por rebanada de hidrogel (Figura 2C). Mientras que 5x105 células Jeko-1 estaban contenidas en cada rebanada directamente después de la impresión (d0), este número casi se duplicó a 9,3x105 células después de 3 días de cultivo.
La distribución y el estado de las células Jeko-1 cultivadas en rodajas de hidrogel se evaluaron mediante imágenes de fluorescencia en vivo de cuatro colores (Figura 2D) directamente después de la impresión o después de 3 días de cultivo. Después de la impresión, las reconstrucciones 3D de las rodajas de hidrogel Jeko-1 mostraron una distribución homogénea de las células. La mayoría de las células fueron positivas para TMRM, un marcador de potencial de membrana mitocondrial22. Una minoría de células fue positiva para la actividad de Caspasa-3, un marcador para la inducción de la apoptosis23, así como para el marcador de células muertas PicoGreen21. Después de 3 días de cultivo, se observó un aumento en el número de células junto con la formación de grupos celulares. La mayoría de las células permanecieron positivas para TMRM, mientras que solo unas pocas células se tiñeron con positivo para la actividad de Caspasa-3 o PicoGreen (Figura 2C).
Para analizar si las células de MCL en cortes de hidrogel responden a la quimioterapia, las células de Jeko-1 cultivadas en cultivo en suspensión (2D) o en cortes de hidrogel (3D) fueron tratadas con el fármaco quimioterapéutico Doxorrubicina, que forma parte del tratamiento estándar para pacientes con MCL24. La estructura general de las rodajas de hidrogel se mantuvo durante el tratamiento con doxorrubicina (Figura 3A). La viabilidad de las células Jeko-1 cultivadas en rodajas de hidrogel disminuyó de forma dependiente de la dosis en respuesta al tratamiento con doxorrubicina. El IC50 de doxorrubicina en células Jeko-1 aumentó cuando las células se cultivaron en rodajas de hidrogel (IC50 = 5,8 μM) en comparación con las células Jeko-1 cultivadas en cultivo en suspensión 2D (IC50 = 2,0 μM; Figura 3B). Las imágenes de fluorescencia en vivo de cuatro colores mostraron una reducción de TMRM y un aumento de la señal PicoGreen en células Jeko-1 cultivadas en rodajas de hidrogel en respuesta al tratamiento con doxorrubicina, lo que confirma una reducción de la viabilidad inducida por el tratamiento. Las imágenes obtenidas de imágenes de fluorescencia en vivo de cuatro colores se reconstruyeron en 3D, se segmentaron en función de la señal de los núcleos DRAQ5 y se analizaron utilizando el Python Script descrito en el Archivo complementario 1. En la Figura complementaria 1 se muestra una máscara de segmentación ejemplar. El número de celda identificado a partir de la señal DRAQ5 se utilizó para determinar el número total de celdas. El número de células positivas para la actividad de TMRM, PicoGreen y Caspasa-3 se utilizó para identificar el porcentaje de células viables, muertas o apoptóticas, respectivamente. Las cuantificaciones de la tinción de fluorescencia viva de cuatro colores de células Jeko-1 cultivadas en rodajas de hidrogel durante 3 días con o sin doxorrubicina 9 μM mostraron una viabilidad comparable al ensayo de exclusión de azul de tripano (Tabla 2).
Además de las líneas celulares de MCL establecidas, se cultivaron células primarias de MCL de tres pacientes diferentes con MCL en cultivo en suspensión 2D o en cortes de hidrogel 3D (Figura 4, Figura complementaria 2). Según lo verificado por un patólogo, los tres MCL (Paciente 1-3) eran de morfología clásica / común con índices Ki67 de 20% a 50%. Las células primarias de MCL incluían todos los tipos de células aisladas de los ganglios linfáticos de los pacientes con MCL y, por lo tanto, contenían no solo células de MCL sino también otros tipos de células inmunes o células estromales. La viabilidad de las rodajas primarias de hidrogel MCL se evaluó mediante el ensayo de exclusión de azul de tripano. Después de 4 días de cultivo, las células primarias de MCL en cortes de hidrogel mantuvieron una viabilidad del 43,6% (45,7% el día 3) en comparación con una viabilidad inicial del 71,0% antes de la impresión (Figura 4A). Esto representa una mayor viabilidad en comparación con las células cultivadas en suspensión (2D), que tuvieron una supervivencia del 19,6% después de cuatro días de cultivo (28,4% el día 3). Esta viabilidad se visualizó mediante imágenes de fluorescencia en vivo de cuatro colores, en las que la mayoría de las células eran positivas para TMRM y viables, mientras que una subpoblación era positiva para la actividad de Caspasa-3 y PicoGreen, lo que indica apoptosis y muerte celular, respectivamente (Figura 4B). Los datos de cuantificación de la Figura 4B se muestran en la Tabla 2. Las células primarias de otros dos pacientes con LCM mostraron una mayor supervivencia de las células cuando se cultivaron en las rodajas de hidrogel (3D) en comparación con el cultivo en suspensión 2D respectivo (Figura complementaria 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68417/68417fig1.jpg"> 
Figura 1: Flujo de trabajo de impresión 3D de cortes de tumores de hidrogel . (A) Flujo de trabajo de impresión 3D y cultivo de células en cortes de tumores de hidrogel. (B) Configuración de la impresora utilizada para la bioimpresión 3D de rodajas de hidrogel en un baño de soporte de gelatina. (C) Impresión de un plano en el software de la impresora 3D. Se imprimieron hasta cinco rebanadas de hidrogel a la vez. (D) Representación esquemática del cultivo de rodajas de hidrogel. Las rodajas de hidrogel se cultivaron sobre un soporte de filtro en una placa de 6 pocillos. Se agregó una gota de medio encima de cada rebanada de hidrogel para mantener su humedad. Se pueden cultivar hasta cinco rodajas de hidrogel en un soporte de filtro. (E) Rodajas de hidrogel impresas en 3D cultivadas en un soporte de filtro, como se muestra en una imagen general o en imágenes de primer plano. Las barras de escala representan 5 mm, 1 mm o 200 μm como se indica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68417/68417fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68417/68417fig2.jpg"> 
Figura 2: Cultivo de una línea celular de linfoma de células del manto (LCM) en cortes de hidrogel impresos en 3D.(A) Primer plano de una rebanada de hidrogel representativa que contiene la línea celular MCL Jeko-1 después de la impresión (d0) o después de 3 días de cultivo (d3). La barra de escala representa 1 mm. (B) Viabilidad de células Jeko-1 cultivadas en suspensión (2D) o en rodajas de hidrogel (3D) durante 2 días según lo evaluado por ensayo de exclusión de azul de tripano. Se muestra la media ± SD de tres experimentos de bioimpresión independientes. (C) Número de células Jeko-1 contenido en cada rebanada de hidrogel directamente después de la impresión (d0) o después de hasta 3 días de cultivo (d1-d3). Se muestra la media ± SD de tres experimentos de bioimpresión independientes. No se observaron diferencias estadísticamente significativas (n.s., p &gt; 0,05, prueba de Mann-Whitney). (D) Reconstrucción tridimensional de rodajas de hidrogel Jeko-1 el día de la impresión (d0) o después de 3 días de cultivo (d3). El modelo se generó a partir de pilas z de una imagen de fluorescencia 3D en vivo de cuatro colores. Las células vivas se muestran en rojo (TMRM), las células apoptóticas en amarillo (actividad enzimática Caspasa-3), las células muertas en verde (PicoGreen) y los núcleos en azul (DRAQ5). La barra de escala representa 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68417/68417fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68417/68417fig3.jpg"> 
Figura 3: Tratamiento farmacológico de una línea celular de linfoma de células del manto (LCM) en rodajas de hidrogel. (A) Primer plano de una rebanada de hidrogel representativa que contiene la línea celular MCL Jeko-1 tratada con 3 μM de doxorrubicina durante 3 días (d3). La barra de escala representa 1 mm. (B) Las células Jeko-1 cultivadas en suspensión (2D) o en rodajas de hidrogel (3D) fueron tratadas con concentraciones crecientes del agente quimioterapéutico Doxorrubicina durante 2 días. La viabilidad de las células se evaluó mediante el ensayo de exclusión de azul de tripano. Se muestra la media ± SD de cuatro experimentos de bioimpresión independientes. (C) Reconstrucción tridimensional de rodajas de hidrogel Jeko-1 tratadas con doxorrubicina 9 μM (Doxo) durante 3 días (d3). El modelo se generó a partir de pilas z de una imagen de fluorescencia 3D en vivo de cuatro colores. Las células vivas se muestran en rojo (TMRM), las células apoptóticas en amarillo (actividad enzimática Caspasa-3), las células muertas en verde (PicoGreen) y los núcleos en azul (DRAQ5). La barra de escala representa 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68417/68417fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68417/68417fig4.jpg"> 
Figura 4: Cultivo de células primarias de MCL en cortes de hidrogel impresos en 3D. (A) Viabilidad de las células primarias de MCL cultivadas en suspensión (2D) o en rodajas de hidrogel (3D) durante un máximo de 4 días, según lo evaluado por el ensayo de exclusión de azul de tripano. Se muestra la viabilidad media de un experimento. (B) Reconstrucción tridimensional de células primarias de MCL cultivadas en rodajas de hidrogel (3D) durante 3 días. Las pilas Z se generaron a partir de rodajas de hidrogel teñidas con una tinción viva de cuatro colores y se analizaron utilizando un microscopio de barrido láser confocal (CLSM). Las células vivas se muestran en rojo (TMRM), las células apoptóticas en amarillo (actividad enzimática Caspasa-3), las células muertas en verde (PicoGreen) y los núcleos en azul (DRAQ5). La barra de escala representa 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68417/68417fig4large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mancha</td>
			<td>TMRM</td>
			<td>DRAQ5</td>
			<td>Sustrato NucView405 Caspase-3</td>
			<td>PicoGreen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excitación/Emisión</td>
			<td>548 nm/574 nm</td>
			<td>647 nm/681 nm</td>
			<td>429 nm/ 469 nm</td>
			<td>488 nm/ 520 nm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 1: Máximos de excitación/emisión de las tinciones utilizadas para imágenes de fluorescencia 3D en vivo de cuatro colores.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">Muestra</td>
			<td colspan="3">% de células</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMRM (Células viables)</td>
			<td>PicoGreen (Células muertas)</td>
			<td>Caspasa-3 (células apoptóticas)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jeko-1 Ctrl</td>
			<td>83</td>
			<td>23.6</td>
			<td>18.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jeko-1 Doxo 9 μM</td>
			<td>27.6</td>
			<td>81.3</td>
			<td>86.6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paciente primario de MCL 1</td>
			<td>75.2</td>
			<td>31.1</td>
			<td>33.1</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 2: Cuantificación de reconstrucciones 3D de tinción viva de cuatro colores de cortes de tumor de hidrogel cultivados. Los cortes tumorales de hidrogel se cultivaron durante 3 días y contenían células Jeko-1 cultivadas con o sin tratamiento con doxorrubicina 9 μM o células primarias de MCL (paciente 1).
Figura complementaria 1: Identificación celular a partir de reconstrucciones 3D de tinción viva de cuatro colores. Reconstrucciones 3D de una imagen confocal etiquetada con DRAQ5 obtenidas a partir de (A) tinción en vivo de cuatro colores y (B) una imagen segmentada en este canal generada utilizando la canalización de análisis de imágenes de Python. La barra de escala representa 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68417/JoVE_Suppl_Figure%201.tiff" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta figura.</a>
Figura complementaria 2: Cultivo de células primarias de MCL de los pacientes 2 y 3 en cortes tumorales de hidrogel . Viabilidad de las células primarias del LCM de (A) paciente 2 o (B) paciente 3 cultivadas en suspensión (2D) o en rodajas de hidrogel (3D) durante un máximo de 4 días según lo evaluado por ensayo de exclusión de azul de tripano. Se muestra la viabilidad media de un experimento. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68417/JoVE_Suppl_Figure%202.tiff" target="_blank">Haga clic aquí para descargar esta figura.</a>
Archivo complementario 1: Instrucciones para el análisis de reconstrucciones 3D obtenidas a partir de tinción en vivo de cuatro colores. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68417/Supplementary_File_1_proof%20read%20version.docx" target="_blank">Haga clic aquí para descargar este archivo.</a>
Archivo complementario 2: Script de Python para el análisis de reconstrucciones 3D obtenidas a partir de tinción en vivo de cuatro colores. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68417/Supplementary_File_2.ipynb%20" target="_blank">Haga clic aquí para descargar este archivo.</a>
Archivo de codificación suplementario 1: Stl. que contiene el plano de las rodajas tumorales de hidrogel. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68417/Hydrogel%20slice%208mm%201.5mm.stl" target="_blank">Haga clic aquí para descargar este archivo.</a>

Bioimpresión de cortes tumorales de hidrogel como modelo 3D para el linfoma de células del manto

Mantle cell lymphoma (MCL) is a rare, aggressive B-cell neoplasm that frequently relapses and only shows a limited response to conventional chemotherapy. ...

bioprinting-hydrogel-tumor-slices-as-3d-model-for-mantle-cell

Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

Los xenoinjertos derivados del paciente de glioblastoma multiforme pueden miniaturizarse en microtumores vivos utilizando un sistema de cultivo de biogel humano en 3D. Este ensayo tumoral 3D de tipo in vivo es adecuado para las pruebas de respuesta a fármacos y la elaboración de perfiles moleculares, incluido el análisis cinómico.

Generación de microtumores Uso Humano 3D Biogel sistema de cultivo y las células de glioblastoma derivados de los pacientes para Kinomic de perfiles y pruebas de respuesta a los fármacos

Linfoma del manto (MCL) es un difícil de tratar el trastorno de la célula de B y es igualmente difícil establecer un modelo de ratón de xenoinjerto de MCL primaria a estudiar y desarrollar la terapéutica. Aquí, describimos el establecimiento acertado de xenoinjertos MCL en ratones para ayudar a comprender su biología subyacente.

Engraftment de tumor en un modelo de ratón de xenoinjerto de linfoma de manto humano

Aquí, se describe un método para la preparación de la cultura de co de 3 dimensiones (3D) esferoide de células de cáncer de páncreas y fibroblastos, seguidos por la medida de las funciones metabólicas utilizando un analizador de flujo extracelular.

Preparación y análisis metabólico de 3 dimensiones del esferoide co-cultivos de células de cáncer de páncreas y fibroblastos

Hemos desarrollado un modelo de cáncer de mama heterogéneos consistiendo en las células fibroblastos y tumor inmortalizadas encajadas un bioink de alginato/gelatina de bioprintable. El modelo recoge el microambiente tumoral de en vivo y facilita la formación de esferoides multicelulares tumor, dando la penetración en los mecanismos de conducción tumorigenesis.

Hidrogel Bioprintable alginato/gelatina 3D In Vitro modelo sistemas inducen formación de glóbulo esferoide

Aquí se presenta un método para la bioimpresión 3D de gelatina metacriloyl.

Protocolos de Bioimpresión 3D de Bioinks basados en Gelatin Methacryloyl Hydrogel

Este protocolo demuestra métodos para permitir el cultivo in vitro extendido de xenoinjertos derivados del paciente (PDX). Un paso mejora la viabilidad general de los cultivos de racimos multicelulares en hidrogeles 3D, a través de la eliminación directa de células individuales no viables. Un paso secundario demuestra las mejores prácticas para el cultivo de PDX en una plataforma microfluídica perfundida.

Viabilidad mejorada para cultivos de hidrogel 3D Ex vivo de xenoinjertos derivados del paciente en una plataforma microfluídica perfundida

Este protocolo presenta un modelo biomimético 3D con compartimento estromal fibromático que lo acompaña. Preparado con hidrogeles fisiológicamente relevantes en proporciones que imitan las propiedades biofísicas de la matriz extracelular estromal, un mediador activo de interacciones celulares, crecimiento tumoral y metástasis.

Un modelo biomimético para el cáncer de hígado para estudiar las interacciones tumorales-estroma en un entorno 3D con propiedades biofísicos ajustables

El objetivo de este protocolo es bioimprimir directamente las células epiteliales mamarias como esferoides multicelulares en redes endoteliales preformadas para crear rápidamente modelos de co-cultivo endotelial mamario 3D que pueden ser utilizados para estudios de detección de fármacos.

Bioimpresión directa de esferoides multicelulares de mama 3D en redes endoteliales

La hipoxia es un sello distintivo del microambiente tumoral y desempeña un papel crucial en la progresión del cáncer. Este artículo describe el proceso de la fabricación de un cáncer-en-una-viruta hipóxico basado en tecnología de célula-impresión 3D para recapitular una patología hipoxia-relacionada del cáncer.

3D Cell-Printed Hypoxic Cancer-on-a-Chip Para Recapitular la Progresión Patológica Del Cáncer Sólido

El presente protocolo describe una plataforma experimental para evaluar los efectos de las señales mecánicas y bioquímicas en las respuestas quimioterapéuticas de las células de glioblastoma derivadas de pacientes en cultivos miméticos de matriz 3D utilizando un dispositivo de iluminación UV hecho a medida que facilita la fotoreticulación de alto rendimiento de hidrogeles con características mecánicas sintonizables.

Las matrices de hidrogel permiten un mayor rendimiento para los efectos de detección de los componentes de la matriz y la terapéutica en modelos tumorales 3D

Presentamos un método para replicar el microambiente tumoral de glioma en el frente invasivo que incorpora flujo de líquido intersticial. Este modelo es un hidrogel de hialuronano-colágeno I en un inserto de cultivo de tejidos donde se puede aplicar un cabezal de presión de fluido. La invasión se puede cuantificar y las células se pueden aislar o lisar.

Un modelo fotopolimerizable de ácido hialurónico-colágeno del microambiente de glioma invasivo con flujo intersticial

Aprende a bioimprimir cortes tumorales de hidrogel para estudiar el linfoma de células del manto. Este modelo 3D mejora la relevancia fisiológica y permite analizar la resistencia a fármacos.

Bioimpresión de cortes tumorales de hidrogel como modelo 3D para el linfoma de células del manto

Explorar más videos