Name: Actividad convulsiva inducida por electrochoque en larvas de Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T16:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 10 s
Description: Aprende a identificar compuestos anticonvulsivos en larvas de Drosophila para el estudio de la epilepsia. Este método permite evaluar intervenciones terapéuticas y comprender los mecanismos neuronales subyacentes.

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<li>Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pentylenetetrazole-induced+changes+in+zebrafish+behavior%2C+neural+activity+and+c-fos+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pentylenetetrazole-induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression.</a> Neuroscience. 131 (3), 759-768 (2005).</li>
<li>Gauthier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State+of+the+art+on+insect+nicotinic+acetylcholine+receptor+function+in+learning+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">State of the art on insect nicotinic acetylcholine receptor function in learning and memory.</a> Adv Exp Med Biol. 683, 97-115 (2010).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Portaelectrodo</td><td>Instrumentos de precisión mundial&nbsp;</td><td>M3301</td><td></td></tr><tr><td>Capilares de vidrio</td><td>Instrumentos de Harvard</td><td>GC100F-10</td><td></td></tr><tr><td>Alambre de tungsteno (99,95%)</td><td>Goodfellow Cambridge, Reino Unido</td><td></td><td>0,1 mm de diámetro</td></tr><tr><td>Estimulador de voltaje</td><td>Digitimer Ltd, Reino Unido</td><td>DS2A mkII&nbsp;</td><td>Estimulador aislado de voltaje constante&nbsp;</td></tr></tbody></table>

actividad convulsiva inducida por electrochoque en larvas de drosophila

Seizure Activity Induced by Electroshock in Drosophila Larvae

Numerosas mutaciones de Drosophila exhiben un comportamiento similar a las convulsiones 7,20. La base genética de estas mutaciones es variada, lo que imita favorablemente las causas genéticas igualmente variadas de la epilepsia humana. Tres de las mutaciones de Drosophila más estudiadas son parabangsenseless (parabss), julius seizure (jus) y easy-shock (eas). La mutación...

Actividad convulsiva inducida por electrochoque en larvas de Drosophila

Epilepsy presents a significant health burden that is exacerbated by high numbers of individuals who are drug-refractory. Whilst some drug-refractory ...

Utilizamos las larvas de la mosca de la fruta drosophila para identificar nuevos tratamientos para la epilepsia. Al igual que los humanos, las moscas pueden portar mutaciones genéticas que las hacen propensas a las convulsiones, y podemos reducir la gravedad de las convulsiones en las moscas con medicamentos anticonvulsivos utilizados clínicamente. Los principales desafíos son comprender completamente el funcionamiento del sistema nervioso de la mosca, de modo que podamos mapear áreas a sus áreas equivalentes en el cerebro humano.Alrededor del 1% de la población tiene epilepsia, y de ese número, aproximadamente 1/3 no responde bien a los medicamentos anticonvulsivos que se usan actualmente. Estamos explorando nuevas formas de tratar la epilepsia. El uso de larvas de mosca en lugar de moscas adultas es ventajoso porque las larvas viven en los alimentos que comen. Esto hace que agregar medicamentos experimentales sea muy simple. La técnica que utilizamos para inducir convulsiones también es simple pero efectiva.Hemos identificado algunos fármacos candidatos que tienen una potente actividad anticonvulsiva. Ahora nos centraremos en comprender cómo funcionan estos medicamentos y probar que son seguros para usar en mamíferos.[Instructor] Para comenzar, construya la sonda de electrochoque para el procedimiento. Asegúrese de que estén disponibles tallos de aproximadamente 100 larvas errantes de tercer estadio tanto de una cepa de control de tipo salvaje como de una cepa mutante de convulsiones. Retire una sola larva errante de tercer estadio de la pared del vial y colóquela en una pequeña placa de Petri de plástico. Con un pincel pequeño, lave suavemente las larvas con agua doble destilada para eliminar cualquier residuo de comida. Ahora, transfiera las larvas lavadas a un plato de plástico vacío. Con fórceps, sostenga un pequeño fragmento de toalla de papel y seque suavemente las larvas. Retire el exceso de agua sin secar completamente las larvas para evitar que se pegue al plato. Deje que la larva se recupere durante 30 segundos para garantizar un fácil manejo durante la colocación de la sonda. A continuación, vea la larva bajo un microscopio de disección con un aumento de 15 a 20 veces. Una vez que la larva reanude el gateo normal, coloque suavemente la sonda de electrochoque en la superficie dorsal anterior por encima del sistema nervioso central. Aplique suficiente presión para comprimir la larva a aproximadamente un tercio a la mitad de su profundidad para garantizar una conductividad adecuada sin causar daños. Aplique un pulso de dos segundos de voltaje constante utilizando un estimulador de voltaje aislado, cuya intensidad se calibró previamente a través de una curva de valoración. Inmediatamente, inicie un temporizador tan pronto como se administre la descarga. Observe la larva en busca de signos de parálisis transitoria, espasmos o comportamiento rodante. Detenga el temporizador una vez que la larva se aleje claramente de su posición original, lo que indica recuperación a través del movimiento peristáltico hacia adelante. Luego, enjuague los cables de la sonda primero con etanol al 100%, seguido de agua destilada doble. Después de inspeccionar los cables con aumento, raspe suavemente cualquier residuo con fórceps sin cambiar el espacio entre los cables. Utilice la sonda para entregar un pulso de dos segundos de voltajes variables a alrededor de 15 larvas por voltaje para cada genotipo. Electrocuta a cada larva solo una vez. Mida el tiempo de recuperación de cada larva y calcule el tiempo de recuperación promedio para cada voltaje en todos los genotipos. Traza los tiempos medios de recuperación en un gráfico y ajusta una línea recta a los datos. Elija un voltaje que muestre una diferencia clara y significativa en el tiempo de recuperación entre las larvas mutantes de tipo salvaje y las de convulsiones. Asegúrese de que el voltaje seleccionado no provoque una recuperación prolongada que obstaculice el rendimiento. Para la preparación de medicamentos, agregue medicamentos disueltos en un solvente apropiado directamente sobre la superficie de los alimentos sólidos para moscas y deje tiempo para que se absorba y se evapore. Alternativamente, saque la comida de los viales y vuelva a fundirla. Cuando la temperatura se enfríe a 40 grados centígrados, agregue la solución del medicamento y mezcle bien con un mezclador de vórtice. Vierta aproximadamente cinco mililitros de los alimentos tratados nuevamente en viales y deje que se solidifique antes de usarlo. Ejecute un gradiente de concentración probando un rango de concentraciones de fármacos para determinar la dosis óptima. Aplique electroshock a las larvas del genotipo de prueba o a las expuestas a un fármaco y mida el tiempo de recuperación de las convulsiones. Aplique un tiempo de corte de 300 segundos para eliminar duraciones de recuperación excesivamente largas. Solo registre las convulsiones con tiempos de recuperación superiores a 30 segundos como cuantificables. La sonda fue calibrada, y fue evidente a partir de los ajustes de línea que el mutante mostró un mayor tiempo de recuperación de convulsiones en todos los voltajes en comparación con el tipo salvaje. Los tiempos de recuperación de las convulsiones variaron significativamente entre los genotipos esofágicos, siendo Parabang sin sentido el que exhibió el tiempo de recuperación más largo y la convulsión de Julius el más corto entre los mutantes. El tratamiento con valproato de sodio y fenitoína redujo significativamente el tiempo de recuperación de las convulsiones en el mutante sin sentido parabang en comparación con los controles del vehículo.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

A continuación se describen los métodos electrofisiológicos para la medición de la transmisión sináptica en la unión neuromuscular de larvas de Drosophila. Liberación evocada se inicia artificialmente mediante la estimulación de los axones de la neurona motora, y la transmisión a través de la UNM se puede medir por la respuesta postsináptica evocado en el músculo.

Los métodos electrofisiológicos para la grabación de los potenciales sinápticos de la UNM de larvas de Drosophila

Uso de alta frecuencia de estimulación eléctrica, actividades similares a convulsiones pueden ser inducidos...

Neurocircuit ensayos para las convulsiones en la epilepsia de los mutantes Drosophila</em

Este procedimiento utiliza una luz azul activa el canal de las algas y las células específicas de las herramientas de la expresión genética para evocar los potenciales sinápticos con pulsos de luz en la unión neuromuscular (UNM),...

Channelrhodopsin2 estimulación mediada de los potenciales sinápticos en Drosophila Las uniones neuromusculares

Registro electrofisiológico en el Drosophila Embrión

El video muestra el registro extracelular de la actividad neuronal del sistema nervioso central (SNC) de las larvas de Drosophila. El SNC seccionado se coloca en una cámara de registro y se registra la actividad eléctrica de un nervio descendente para establecer la frecuencia de disparo de referencia. A continuación, se introduce un agente de prueba y se registra el cambio en la frecuencia de disparo para determinar el efecto excitador o inhibidor del agente.

Registro extracelular de la actividad eléctrica en el sistema nervioso central de Drosophila

Un método simple para registrar los potenciales de campo extracelular en el cerebro anterior de las larvas de pez cebra se describe. El método proporciona una...

Prosencéfalo electrofisiológico de grabación en larvas de pez cebra

El método para medir de adultos de Drosophila memoria asociativa se describe. El ensayo se basa en la capacidad de la mosca para asociar un olor presentado con un reforzador negativo (descarga eléctrica) y luego recuperar esta información en un momento posterior, permitiendo que la memoria a medir.

Drosophila Adulto olfativa Choque Aprendizaje

Con una webcam y una combinación de programas de software libre y de bajo costo, los patrones locomotores en Drosophila melanogaster se pueden analizar para detectar diferencias en la velocidad, la distancia y el tiempo de las distintas actividades de motor.

Un método de bajo costo para el Análisis convulsiva actividad y movimiento en<em&gt; Drosophila</em

Este protocolo describe un método para registrar la actividad eléctrica descendente de la sistema de nervioso central de Drosophila melanogaster para permitir pruebas de agentes farmacológicos, mutaciones genéticas de las proteínas neuronales, conveniente y rentable o el papel de los caminos fisiológicos inexplorados.

Registro electrofisiológico de la actividad del sistema nervioso Central de tercer estadio de Drosophila Melanogaster

Aquí, presentamos un protocolo para el desarrollo y la caracterización de un modelo de epilepsia de pez cebra resultante de la inhibición transitoria del gen DEPDC5.

Análisis conductual y fisiológico en un modelo de epilepsia de pez cebra

Aquí, presentamos un protocolo para la obtención de imágenes de calcio ex vivo en Drosophila adulta que expresa GCaMP6 para monitorear las actividades epileptiformes. El protocolo proporciona una herramienta valiosa para investigar eventos ictales en Drosophila adulta a través de imágenes de calcio ex vivo , lo que permite explorar los posibles mecanismos de la epilepsia a nivel celular.

Ex Vivo Imágenes de calcio para el modelo de epilepsia de Drosophila

Aprende a identificar compuestos anticonvulsivos en larvas de Drosophila para el estudio de la epilepsia. Este método permite evaluar intervenciones terapéuticas y comprender los mecanismos neuronales subyacentes.

Actividad convulsiva inducida por electrochoque en larvas de Drosophila

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