Name: Medición de monofosfato de guanosina cíclico (cGMP) en tejidos sólidos mediante un ensayo competitivo de inmunoabsorción enzimática (ELISA) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Aprende a medir cGMP en tejidos sólidos mediante ELISA competitivo usando tejido porcino. Este protocolo permite cuantificar el segundo mensajero en estudios de metabolismo del óxido nítrico y envejecimiento.

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<ol><li>Dierks, E. A., Burstyn, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+%28NO%29%2C+the+only+nitrogen+monoxide+redox+form+capable+of+activating+soluble+guanylyl+cyclase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide (NO), the only nitrogen monoxide redox form capable of activating soluble guanylyl cyclase.</a> Biochem Pharmacol. 51 (12), 1593-1600 (1996).</li>
<li>Koglin, M., Behrends, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+domain+of+the+alpha1+subunit+of+soluble+guanylyl+cyclase+is+necessary+for+activation+of+the+enzyme+by+nitric+oxide+and+YC-1+but+is+not+involved+in+heme+binding%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A functional domain of the alpha1 subunit of soluble guanylyl cyclase is necessary for activation of the enzyme by nitric oxide and YC-1 but is not involved in heme binding.</a> J Biol Chem. 278 (14), 12590-12597 (2003).</li>
<li>Olson, L. J., Knych, E. T., Herzig, T. C., Drewett, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+guanylyl+cyclase+inhibitor+reverses+nitric+oxide-induced+vasorelaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Selective guanylyl cyclase inhibitor reverses nitric oxide-induced vasorelaxation.</a> Hypertension. 29 (1), 254-261 (1997).</li>
<li>Bailey, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+nitrate+supplementation+reduces+the+O2+cost+of+low-intensity+exercise+and+enhances+tolerance+to+high-intensity+exercise+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Dietary nitrate supplementation reduces the O2 cost of low-intensity exercise and enhances tolerance to high-intensity exercise in humans.</a> J Appl Physiol (1985). 107 (4), 1144-1155 (2009).</li>
<li>Vanhatalo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+chronic+effects+of+dietary+nitrate+supplementation+on+blood+pressure+and+the+physiological+responses+to+moderate-intensity+and+incremental+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Acute and chronic effects of dietary nitrate supplementation on blood pressure and the physiological responses to moderate-intensity and incremental exercise.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 299 (4), R1121-R1131 (2010).</li>
<li>Qin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balancing+role+of+nitric+oxide+in+complement-mediated+activation+of+platelets+from+mcd59a+and+mcd59b+double-knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hematol%22%5BJournal%5D)">Balancing role of nitric oxide in complement-mediated activation of platelets from mcd59a and mcd59b double-knockout mice.</a> Am J Hematol. 84 (4), 221-227 (2009).</li>
<li>Radomski, M. W., Palmer, R. M., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+l-arginine%2Fnitric+oxide+pathway+present+in+human+platelets+regulates+aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">An l-arginine/nitric oxide pathway present in human platelets regulates aggregation.</a> PNAS. 87 (13), 5193-5197 (1990).</li>
<li>Thomas, D. D., Liu, X., Kantrow, S. P., Lancaster, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biological+lifetime+of+nitric+oxide%3A+Implications+for+the+perivascular+dynamics+of+NO+and+O2%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">The biological lifetime of nitric oxide: Implications for the perivascular dynamics of NO and O2.</a> PNAS. 98 (1), 355-360 (2001).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+rat+skeletal+muscle+homogenates+for+nitrate+and+nitrite+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of rat skeletal muscle homogenates for nitrate and nitrite measurements.</a> J Vis Exp. (173), e62427(2021).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+roles+of+nitrate+and+nitrite+in+nitric+oxide+metabolism+in+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Potential roles of nitrate and nitrite in nitric oxide metabolism in the eye.</a> Sci Rep. 10 (1), 13166(2020).</li>
<li>Srihirun, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrate+uptake+and+metabolism+in+human+skeletal+muscle+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">Nitrate uptake and metabolism in human skeletal muscle cell cultures.</a> Nitric Oxide. 94, 1-8 (2020).</li>
<li>Montoliu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+nitric+oxide+and+atrial+natriuretic+peptide+changes+with+altered+cGMP+homeostasis+in+liver+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Correlation of nitric oxide and atrial natriuretic peptide changes with altered cGMP homeostasis in liver cirrhosis.</a> Liver Int. 25, 787-795 (2005).</li>
<li>Origlia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+cGMP+inversely+correlates+with+age+in+healthy+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol+Invest%22%5BJournal%5D)">Platelet cGMP inversely correlates with age in healthy subjects.</a> J Endocrinol Invest. 27 (2), RC1-RC4 (2004).</li>
<li>Calamera, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fret-based+cyclic+GMP+biosensors+measure+low+cGMP+concentrations+in+cardiomyocytes+and+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Fret-based cyclic GMP biosensors measure low cGMP concentrations in cardiomyocytes and neurons.</a> Commun Biol. 2, 394(2019).</li>
<li>Rutkowski, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+cGMP+signaling+shows+pronounced+differences+between+glomerular+endothelial+cells+and+podocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of cGMP signaling shows pronounced differences between glomerular endothelial cells and podocytes.</a> Sci Rep. 14, 26099(2024).</li>
<li>Straub, A. C., Beuve, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+primer+for+measuring+cGMP+signaling+and+cGMP-mediated+vascular+relaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">A primer for measuring cGMP signaling and cGMP-mediated vascular relaxation.</a> Nitric Oxide. 117, 40-45 (2021).</li>
<li>Huang, K. T., Lin, T. J., Hsu, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+cyclic+GMP+concentration+using+a+gold+nanoparticle-modified+optical+fiber%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Determination of cyclic GMP concentration using a gold nanoparticle-modified optical fiber.</a> Biosens Bioelectron. 26 (1), 11-15 (2010).</li>
<li>Cyclic gmp elisa kit. , 
 <a target="_blank" href="https://cdn.caymanchem.com/cdn/seawolf/insert/581021.pdf">https://cdn.caymanchem.com/cdn/seawolf/insert/581021.pdf</a> (2024).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+nitrate+metabolism+in+porcine+ocular+tissues+determined+using+15N-labeled+sodium+nitrate+supplementation%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Dietary nitrate metabolism in porcine ocular tissues determined using 15N-labeled sodium nitrate supplementation.</a> Nutrients. 16 (8), 1154(2024).</li>
<li>Cgmp enzyme immunoassay kit, direct technical bulletin. , 
 <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/289/571/cg200bul.pdf?srsltid=AfmBOoqWnOVurQ549ESXk_E7DJoqNs7v268ktTabHHYc6I_6NZkc-j_V">https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/289/571/cg200bul.pdf?srsltid=AfmBOoqWnOVurQ549ESXk_E7DJoqNs7v268ktTabHHYc6I_6NZkc-j_V</a> (2025).</li>
<li>Cyclic gmp competitive elisa lysate and homogenate samples. , 
 <a target="_blank" href="https://assets.thermofisher.com/TFS Assets/LSG/certificate/Certificates%20of%20Analysis/RA229061_EMSCGMPL.pdf">https://assets.thermofisher.com/TFS Assets/LSG/certificate/Certificates%20of%20Analysis/RA229061_EMSCGMPL.pdf</a> (2025).</li>
<li>Hamad, A. M., Range, S., Holland, E., Knox, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+cGMP+by+soluble+and+particulate+guanylyl+cyclases+in+cultured+human+airway+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regulation of cGMP by soluble and particulate guanylyl cyclases in cultured human airway smooth muscle.</a> Am J Physiol. 273 (4), L807-L813 (1997).</li>
<li>Mo, E., Amin, H., Bianco, I. H., Garthwaite, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+a+cellular+nitric+oxide%2FcGMP%2Fphosphodiesterase-5+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Kinetics of a cellular nitric oxide/cGMP/phosphodiesterase-5 pathway.</a> J Biol Chem. 279 (25), 26149-26158 (2004).</li>
<li>Corbin, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5B3h%5Dsildenafil+binding+to+phosphodiesterase-5+is+specific%2C+kinetically+heterogeneous%2C+and+stimulated+by+cGMP%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">[3h]sildenafil binding to phosphodiesterase-5 is specific, kinetically heterogeneous, and stimulated by cGMP.</a> Mol Pharmacol. 63 (6), 1364-1372 (2003).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Jeringa oral transparente BD de 1 ml</td><td>Becton Dickinson</td><td>50382903052177</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de ensayo de fondo redondo de 14 ml</td><td>Halcón</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>Microtubos de 2,0 ml, surtidos</td><td>Plásticos Olympus</td><td>24-283A</td><td></td></tr><tr><td>30-300 &micro; Pipeta multicanal L</td><td>Eppendorf</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>Anhídrido acético (en kit cGMP)</td><td>Compañía química de las Islas Caimán</td><td>400031</td><td>98% puro <fuerte>Peligro</fuerte>: Inflamable, Corrosivo: quema gravemente la piel, daño ocular, toxicidad aguda <fuerte>Manejo seguro</fuerte>: Mantener alejado de fuentes de ignición, trabajar en un área ventilada, usar guantes</td></tr><tr><td>Trazador de acetilcolinesterasa cGMP (en kit cGMP)</td><td>Compañía química de las Islas Caimán</td><td>481020</td><td>fosfato de potasio dibásico, cloruro de sodio&nbsp; fosfato de potasio monobásico, albúmina bovina, azida de sodio, EDTA, trazador cGMP AChE Peligro: Peligro para la salud: toxicidad orgánica por exposición repetida, Corrosivo: daño ocular, Irritante cutáneo y respiratorio Safe Handling: Trabajar en un área ventilada, usar guantes</td></tr><tr><td>Antisuero ELISA cGMP (en kit cGMP)</td><td>Compañía química de las Islas Caimán</td><td>481022</td><td>fosfato de potasio dibásico, cloruro de sodio&nbsp; fosfato de potasio monobásico, albúmina bovina&nbsp; azida de sodio, EDTA, anti-cGMP policlonal de conejo Antisuero <fuerte>Peligro</fuerte>: Peligro para la salud: toxicidad orgánica por exposición repetida, Corrosivo: daño ocular, Irritante cutáneo y respiratorio, Toxicidad aguda <fuerte>Manejo seguro</fuerte>: Trabaje en un área ventilada, use guantes</td></tr><tr><td>Estándar ELISA cGMP (en kit cGMP)</td><td>Compañía química de las Islas Caimán</td><td>481024</td><td>fosfato de potasio dibásico, cloruro de sodio&nbsp; fosfato de potasio monobásico, albúmina bovina&nbsp; azida de sodio, EDTA, estándar cGMP Peligro: Peligro para la salud: toxicidad orgánica por exposición repetida, Corrosivo: daño ocular, Irritante cutáneo y respiratorio Manejo seguro: Trabaje en un área ventilada, use guantes</td></tr><tr><td>Kit ELISA GMP cíclico</td><td>Compañía química de las Islas Caimán</td><td>581021</td><td></td></tr><tr><td>Concentrado de tampón ELISA 10X (en kit cGMP)</td><td>Compañía química de las Islas Caimán</td><td>400060</td><td>1 M de fosfato, 1% de BSA, 4 M de cloruro de sodio, 10 mM de EDTA, 0,1% de azida de sodio <fuerte>Peligro</fuerte>: Peligro para la salud: toxicidad orgánica por exposición repetida, Corrosivo: daño ocular, Irritante cutáneo y respiratorio <fuerte>Manejo seguro</fuerte>: Trabaje en un área ventilada, almacene en un recipiente con tapa que se pueda cerrar, use guantes</td></tr><tr><td>Depósito de reactivos ELISA</td><td>Pierce (ahora Thermo Fisher Scientific)</td><td>15075</td><td></td></tr><tr><td>Reactivo de Ellman (en kit cGMP)</td><td>Compañía química de las Islas Caimán</td><td>400050</td><td>fosfato de potasio dibásico, cloruro de sodio, fosfato de potasio monobásico, acetiltiocolina (yoduro), 5,5'-ditiobis-(ácido 2-nitrobenzoico) <fuerte>Peligro</fuerte>: Toxicidad aguda, Peligro para la salud: toxicidad orgánica, Corrosivo: Daño ocular, Irritante de la piel, irritante respiratorio <fuerte>Manejo seguro</fuerte>: Trabaje en un área ventilada, use guantes</td></tr><tr><td>Ácido clorhídrico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>320331</td><td><fuerte>Peligro</fuerte>: Corrosivo: corroe el metal, quema gravemente la piel, Daño ocular, Irritante respiratorio <fuerte>Manejo seguro</fuerte>: Trabaje en un área ventilada, use guantes</td></tr><tr><td>Nitrógeno líquido</td><td>El oxígeno de Robert</td><td></td><td>Nitrógeno <fuerte>Peligro</fuerte>: Gas comprimido: Riesgo de quemaduras criogénicas, fractura, asfixia <fuerte>Manejo seguro</fuerte>: Trabaje en un área ventilada, use guantes</td></tr><tr><td>Placa recubierta de IgG anti-conejo para ratones (en kit cGMP)</td><td>Compañía química de las Islas Caimán</td><td>400006</td><td> Peligro: Ninguno</td></tr><tr><td>Nuevo equilibrio MF clásico</td><td>Mettler Toledo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agitador orbital</td><td>Stovall Life Science Inc. (ahora IBI Scientific)</td><td>15-453-211 (Varía)</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Compañía Bemis, Inc.</td><td>3023-4526 (Varía)</td><td></td></tr><tr><td>Polisorbato 20 (en kit cGMP)</td><td>Compañía química de las Islas Caimán</td><td>400035</td><td> Peligro: Ninguno</td></tr><tr><td>Hidróxido de potasio (en kit cGMP)</td><td>Compañía química de las Islas Caimán</td><td>400029</td><td>85% puro <fuerte>Peligro</fuerte>: Corrosivo: corroe metales y piel, Daño ocular, Toxicidad aguda <fuerte>Manejo seguro</fuerte>: Trabaje en un área ventilada, use guantes</td></tr><tr><td>Homogeneizador Precellys Evolution</td><td>Bertin Technologies</td><td>PE000062-PEVO0-A</td><td></td></tr><tr><td>Precellys Lysing Kit Homogeneizador de Tejidos Duros</td><td>Bertin Technologies</td><td>P000911-LYSK0-A</td><td></td></tr><tr><td>Lector de microplacas Sense</td><td>HIDEX</td><td>425-301</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga Sorvall Legend Micro 17R</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>75002441</td><td></td></tr><tr><td>Pulverizador de tejidos</td><td>Trituradora de celdas</td><td>Kit de trituradora de celdas</td><td></td></tr><tr><td>Genio del vórtice 2</td><td>Industrias científicas&nbsp;</td><td>SI-0246</td><td></td></tr><tr><td>Botella de lavado</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z423092</td><td></td></tr><tr><td>Concentrado de tampón de lavado 400X (en kit cGMP)</td><td>Compañía química de las Islas Caimán</td><td>400062</td><td>fosfato de potasio dibásico, fosfato de potasio monobásico, agua <fuerte>Peligro</fuerte>: Corrosivo: Daño ocular, Toxicidad aguda,Irritante de la piel, Toxicidad de órganos <fuerte>Manejo seguro</fuerte>: Trabaje en un área ventilada, use guantes</td></tr></tbody></table>

medición de monofosfato de guanosina cíclico (cgmp) en tejidos sólidos mediante un ensayo competitivo de inmunoabsorción enzimática (elisa)

Measurement of Cyclic Guanosine Monophosphate (cGMP) in Solid Tissues using Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

Los cerdos domésticos de Yorkshire tratados con cloruro de sodio en la dieta (0,15 mmol/kg) o nitrato marcado con 15N (0,15 mmol/kg) administrados una vez al día durante cinco días consecutivos como bolo en comida se perfundieron con una solución de heparina sódica (cloruro de sodio al 0,9%) antes de la recolección de tejidos; Todos los detalles de la colección fueron publicados previamente19. Las concentraciones de cGMP en los glúteos, los músculos y el hígado de cuatro cerdos domésticos de Yorkshire se midieron de acuerdo con el protocolo ELISA descrito. Los tejidos hepáticos se diluyeron en una proporción de dilución de 1:5, y los músculos glúteos en una proporción de dilución de 1:10, con ácido clorhídrico (HCl) 0,1 N para precipitar proteínas. Los homogeneizados diluidos en HCl se acetilaron y luego se diluyeron con tampón ELISA en una proporción de dilución de 1:2 y 1:3 para muestras de músculo hepático y glúteo. Las concentraciones de GMPc se midieron como se describió anteriormente. Las absorbancias se convirtieron en picomoles de cGMP por mililitro de muestra preparada y luego en nanomoles de cGMP por gramo de tejido (nmol/g de tejido) como se indica en el protocolo anterior.
Las concentraciones de GMPc medidas en los tejidos hepáticos produjeron resultados experimentales óptimos en las condiciones anteriores. Las concentraciones de GMPc en el grupo control y en el grupo tratado con nitrato en el hígado porcino son de 0,0202 nmol/g ± 0,003 nmol/g de tejido y de 0,0364 nmol/g ± 0,011 nmol/g de tejido, respectivamente (Figura 3). Varios valores confirman la fiabilidad de los resultados. Las absorbancias de los pocillos B0 con los blancos restados, que oscilan entre 0,466 y 0,475, se encuentran dentro del rango de 0,3 UA a 1,0 UA, lo que verifica un desarrollo suficiente de microplacas con el reactivo de Ellman. La alta calidad de la curva estándar se manifiesta tanto en los aumentos incrementales de las absorbancias del estándar 1 al estándar 8 como en la linealidad de la curva estándar, verificada por un coeficiente de determinación de 0,99. El porcentaje <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68432/68432eq001.jpg" style="margin: auto;"> por cada pozo medido (31,5%-71,2%) está entre el 20% y el 80%, lo que valida que todas las muestras caen en la curva estándar. Las muestras que poseen las características indicadas son aptas para la interpretación.
Las concentraciones de GMPc medidas en los tejidos musculares de los glúteos produjeron resultados experimentales subóptimos. La etiqueta de subóptimo se asigna a los resultados del músculo glúteo porque la mayoría de los valores porcentuales <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68432/68432eq001.jpg" style="margin: auto;"> de los pocillos del músculo glúteo (3,69%-27,3%) cayeron por debajo del 20%, lo que indica que se necesitaron muestras más diluidas para que las absorbancias cayeran en la curva estándar. Las concentraciones de GMPc en el grupo control y en el grupo tratado con nitrato en el músculo glúteo porcino son de 1,22 nmol/g ± 0,49 nmol/g de tejido y de 0,732 nmol/g ± 0,18 nmol/g de tejido, respectivamente (gráfico no mostrado). Las muestras de músculo glúteo comparten las absorbancias de los pocillos y estándares B0 de las muestras hepáticas. El uso de estas muestras subóptimas puede llevar a conclusiones incorrectas; por lo tanto, es necesario preparar muestras más diluidas y volver a medir las concentraciones de cGMP.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68432/68432fig3v2.jpg"> 
Figura 3: Concentración de GMPc en tejido hepático. Concentración media de GMPc del hígado porcino tratado con cloruro de sodio (0,15 mmol/kg) o nitrato marcado con 15N (0,15 mmol/kg) en nmol/g de tejido. n = 4; Las barras de error indican la desviación estándar; los datos se analizaron mediante la prueba t de Welch; ns no significa significación. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68432/68432fig3v2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Medición de monofosfato de guanosina cíclico (cGMP) en tejidos sólidos mediante un ensayo competitivo de inmunoabsorción enzimática (ELISA)

A major pathway that produces cyclic guanosine monophosphate (cGMP) is the nitric oxide (NO)-cGMP pathway. In this pathway, NO stimulates the catalytic ...

measurement-cyclic-guanosine-monophosphate-cgmp-solid-tissues-using

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

El ensayo in vitro función de las células β usando islotes aislados de ratones de Langerhans es un componente importante en el estudio de la fisiopatología de la diabetes y la terapéutica. Mientras que muchas aplicaciones posteriores están disponibles, este protocolo se describe específicamente la medición de intracelular de adenosina monofosfato cíclico (cAMP) como un parámetro esencial para determinar la función de las células β.

Un método para ratón islotes pancreáticos Aislamiento y cAMP intracelular Determinación

Nos genéticamente-codificar el aminoácido no natural, p-azido-L-fenilalanina en varias posiciones específicas en los GPCR y mostrar la versatilidad del grupo azido en diferentes aplicaciones. Estos incluyen una tecnología fotorreticulación dirigido a identificar los residuos en el bolsillo de unión a ligando de un GPCR, y la modificación bioorthogonal específica de sitio de los GPCR con una etiqueta de epítopo de péptido o de la sonda fluorescente.

Codificados genéticamente-sondas moleculares para Estudiar G receptores acoplados a proteínas

Biomarcadores de medición en muestras biológicas complejas es cada vez guían la toma de decisiones clínicas. Se describe un método altamente sensible para medir simultáneamente la miosina cardíaca proteína de unión-C, creatina quinasa MB, troponina I cardiaca y en muestras de suero de pacientes con infarto de miocardio y los sujetos de control sanos.

Un método de cuantificación sensible y específica para la determinación de suero miosina cardíaca proteína de unión-C por inmunoensayo electroquimioluminiscencia

La activación persistente de inhibidores G acoplados a proteínas receptores da como resultado la sensibilización de la señalización de la adenilato ciclasa. Para identificar las vías moleculares esenciales, los enfoques no sesgada son necesarios, sin embargo, esta estrategia requiere el desarrollo de un ensayo de sensibilización cAMP basada en células escalable. Aquí se describe un ensayo para la sensibilización y la detección de moléculas pequeñas siRNA.

Inducido por fármacos Sensibilización de adenilciclasa: Racionalización Ensayo y miniaturización de moléculas pequeñas y siRNA aplicaciones de cribado

El ubicuo segundo mensajero c-di-GMP controla el crecimiento y el comportamiento de muchas bacterias. Hemos desarrollado una novedosa tecnología basada en espectrometría de masas de compuestos de captura para identificar y caracterizar bioquímicamente las proteínas de unión a c-di-GMP en prácticamente cualquier especie bacteriana.

Captura compuesto Espectrometría de Masas - Una herramienta de gran alcance para identificar nuevos c-di-GMP efectoras Proteínas

S1P ejerce sus diversos efectos fisiológicos a través de la subfamilia de receptores S1P (S1PRs). Aquí, se describe una tubería para exponer las estructuras y la función de los S1PR.

Una tubería para investigar las estructuras y vías de señalización de los receptores de esfingosina 1-fosfato

Los datos publicados relacionados con las concentraciones de péptidos relacionados con el gen de la calcitonina (CGRP) en el plasma humano son inconsistentes. Estas inconsistencias pueden deberse a la falta de una metodología estandarizada y validada para cuantificar este neuropéptido. Aquí, describimos un protocolo validado de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) para purificar y cuantificar CGRP en plasma humano.

Detección y cuantificación del péptido relacionado con el gen de la calcitonina (CGRP) en plasma humano mediante un ensayo inmunoabsorbente modificado ligado a enzimas

El protocolo presentado en este estudio ilustra la efectividad del Detector de Diferencia de AMPc In Situ  en la medición de AMPc a través de dos métodos. Un método utiliza un espectrofotómetro de lectura de placa de 96 pocillos con celdas HEK-293. El otro método muestra células HASM individuales bajo un microscopio fluorescente.

Dinámica de cAMP en tiempo real en células vivas utilizando el detector de diferencia de cAMP fluorescente in situ

Presentamos un ensayo ELISA sándwich validado utilizando nuevos anticuerpos monoclonales anti-HER2. Este ensayo permite la cuantificación precisa de la proteína HER2 unida a las células y liberada a partir de células cultivadas in vitro y otras muestras, incluidas la sangre y los tejidos.

Ensayo inmunoquímico validado para la determinación completa del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano liberado y unido a las células

En general, se entiende que las fuerzas mecánicas en el cuerpo puede influir en la diferenciación y proliferación celular. Aquí se presenta un protocolo de vídeo que demuestra el uso de un biorreactor a medida para la entrega de tensión uniaxial de tracción cíclica a las células madre cultivadas en substratos flexibles micropatterned.

La estimulación mecánica de células madre utilizando tensión uniaxial cíclica

Aprende a medir cGMP en tejidos sólidos mediante ELISA competitivo usando tejido porcino. Este protocolo permite cuantificar el segundo mensajero en estudios de metabolismo del óxido nítrico y envejecimiento.

Medición de monofosfato de guanosina cíclico (cGMP) en tejidos sólidos mediante un ensayo competitivo de inmunoabsorción enzimática (ELISA) (Video) | JoVE Journal

Medición de monofosfato de guanosina cíclico (cGMP) en tejidos sólidos mediante un ensayo competitivo de inmunoabsorción enzimática (ELISA)

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