Name: Recolección de líquido de lavado nasal murino sin contaminación de sangre (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T15:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Aprende a recolectar líquido de lavado nasal murino sin contaminación sanguínea mediante la vía faríngea con bolas de algodón. Este método mejora la precisión en la detección de patógenos respiratorios.

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<li>Lindahl, M., Ståhlbom, B., Tagesson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+new+potential+airway+irritation+marker%2C+palate+lung+nasal+epithelial+clone+protein%2C+in+human+nasal+lavage+fluid+with+two-dimensional+electrophoresis+and+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization-time+of+flight%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Identification of a new potential airway irritation marker, palate lung nasal epithelial clone protein, in human nasal lavage fluid with two-dimensional electrophoresis and matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight.</a> Electrophoresis. 22 (9), 1795-1800 (2001).</li>
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<li>Abolins, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+comparative+immunology+of+wild+and+laboratory+mice%2C+Mus+musculus+domesticus%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The comparative immunology of wild and laboratory mice, Mus musculus domesticus.</a> Nat Commun. 8 (1), 1-13 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Aguja de fijación de animales</td><td>Natsume Seisakusho Co., Ltd., Tokio, Japón</td><td>KN-358-A</td><td>Fijamos un ratón con agujas de fijación de animales. Acero inoxidable; longitud total, 23 mm; y punta de aguja, 15 mm.</td></tr><tr><td>BD OptEIATM&nbsp; Juego de reactivos de sustrato TMB</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, USA</td><td>555214</td><td>Agregamos 100 &mu; L de solución de sustrato TMB por pocillo.</td></tr><tr><td>Campana NA</td><td></td><td>NA</td><td>Usamos una campana para anestesia.</td></tr><tr><td>Placas inmunológicas no estériles de 96 pocillos de fondo plano transparente&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific, Rochester, NY, EE. UU</td><td>. 442404</td><td>Utilizamos placas inmuno no estériles de 96 pocillos de fondo plano transparente con tratamiento de superficie MaxiSorp para ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas.</td></tr><tr><td>Bola de algodón</td><td>Sansho Co., Ltd., Tokio, Japón</td><td>94-1951</td><td>Usamos bolas de algodón para evitar la contaminación de la sangre. El diámetro de las bolas de algodón era de 7 mm.</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, EE. UU.</td><td>172012-500 ML</td><td>Agregamos 10% de suero fetal bovino al diluyente del ensayo.</td></tr><tr><td>Pinzas (micropinzas para experimentos de investigación, punta curva)</td><td>Sansho Co., Ltd., Tokio, Japón</td><td>91-1506</td><td>Utilizamos pinzas para la disección. Modelo, HSC 551-10; y en toda su longitud, 105 mm.</td></tr><tr><td>Fórceps (pinzas de precisión)</td><td>Sansho Co., Ltd., Tokio, Japón</td><td>91-2772</td><td>Usamos fórceps para la disección. Modelo, HSC 607-12; longitud total, 120 mm; y diámetro de la punta, 0,3 mm.</td></tr><tr><td>Cabra Anti-Ratón IgA-UNLB</td><td>SouthernBiotech, Birmingham, AL, USA</td><td>1040-01</td><td>Recubrimos placas inmunológicas no estériles de 96 pocillos de fondo plano transparente con 100 &mu; L/pocillo (20 ng/pocillo) de inmunoglobulina A total.</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Viatris Inc., Canonsburg, PA, EE. UU</td>. <td>NA</td><td>Usamos isoflurano para anestesia.</td></tr><tr><td>Juego de reactivos de reacción de luminol</td><td>FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation, Osaka, Japón</td><td>124-06511</td><td>Utilizamos un conjunto de reactivos de reacción de luminol para detectar hemoglobina en muestras de NLF.</td></tr><tr><td>Microtubo</td><td>Watson Co., Ltd., Tokio, Japón</td><td>131-7155C</td><td>Utilizamos microtubos para recolectar NLF y BALF (microtubo de 1,5 ml con tapa de bloqueo, fondo redondo, tapa suave al tacto).</td></tr><tr><td>Milli-Q water</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Germany</td><td>Milli-Q Direct 8</td><td>Utilizamos agua MilliQ para hacer una solución de rectión de luminol.</td></tr><tr><td>Mini-Shaker PSU-2T</td><td>Biosan Ltd., Riga, Letonia</td><td>PSU-2T</td><td>Agitamos placas de 96 pocillos con el Mini-Shaler PSU-2T.</td></tr><tr><td>Cepa de ratón</td><td>CLEA Japan, Inc., Tokio, Japón</td><td>NA</td><td>utilizamos ratones machos C57BL/6 de 4 meses de edad.</td></tr><tr><td>Nunc MicroWell 96-Well, Nunclon Delta-Treated Microplate Flat-Bottom Thermo</td><td>Fisher Scientific Nunc A/S . Kamstrupvej, Roskilde, Dinamarca</td><td>136101</td><td>Utilizamos la microplaca de fondo plano NuncTM MicroWellTM de 96 pocillos, tratada con Nunclon Delta, de fondo plano para la prueba de luminol.</td></tr><tr><td>AffiniPure conjugado con peroxidasa F(ab')2 IgG anti-ratón de cabra, F(ab')2 Fragmento específico (reacción cruzada mínima a proteínas de suero humano, bovino y de caballo)</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA, USA</td><td>115-036-072</td><td>Agregamos 100 &mu; L de IgG de cabra anti-ratón AffiniPure conjugada con peroxidasa F(ab')2, F(ab')2 fragmento específico, como anticuerpo de detección (dilución de 10.000 veces) para cada pocillo.</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato</td><td>Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, EE. UU.</td><td>D8537-500ML</td><td>Utilizamos solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (modificada sin cloruro de calcio y cloruro de magnesio, líquida, filtrada estérilmente, adecuada para el cultivo celular) para la recolección de NLF y BALF.</td></tr><tr><td>Pipeta&nbsp;</td><td>Watson Co., Ltd., Tokio, Japón</td><td>NA</td><td>Usamos un 200-&mu; Pipeta L para lavado nasal.</td></tr><tr><td>Punta de pipeta</td><td>Watson Co., Ltd., Tokio, Japón</td><td>NA</td><td>Utilizamos una 200-&mu; L punta de pipeta multifit para lavado nasal.</td></tr><tr><td>Monolaurato de polioxietileno (20) de sorbitán (Tween 20)</td><td>FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation, Osaka, Japón</td><td>167-11515</td><td>Agregamos 0,05% de Tween 20 al tampón de lavado y 0,2% de Tween 20 al diluyente del ensayo.</td></tr><tr><td>Anticuerpo IgG (reactividad mínima al cromo) Anticuerpo BioLegend de Cabra Purificado Anti-IgG</td><td>, San Diego, CA, USA</td><td>405301</td><td>Recubrimos placas inmuno no estériles de 96 pocillos de fondo plano transparente con 100 &mu; L/pocillo (10 ng/pocillo) de inmunoglobulina G total.</td></tr><tr><td>Tijeras pequeñas, de doble punta</td><td>Sansho Co., Ltd., Tokio, Japón</td><td>91-7005</td><td>Usamos tijeras para la disección. Modelo, S-4A; y en toda su longitud, 115 mm.</td></tr><tr><td>Ácido sulfúrico</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd, Tokio, Japón</td><td>192-04755</td><td>Agregamos 50 &mu; L de ácido sulfúrico 2 N a cada pocillo para detener la reacción.</td></tr><tr><td>Catéter intravenoso Surflo</td><td>Terumo Corporation, Tokio, Japón&nbsp;</td><td>SR-FS2032</td><td>Utilizamos un catéter intravenoso surflo e inyectamos PBS en la tráquea para el lavado broncoalveolar. catéter, 20G; longitud del catéter, 32 mm; diámetro interno del catéter, 0,80 mm; diámetro exterior del catéter, 1,1 mm; y la aguja interna, 22G.</td></tr><tr><td>Tijeras rectas quirúrgicas</td><td>Sansho Co., Ltd., Tokio, Japón</td><td>91-7004</td><td>Usamos tijeras para la disección. Modelo, S-3B; y en toda su longitud, 120 mm.</td></tr><tr><td>Placa quirúrgica</td><td>Natsume Seisakusho Co., Ltd., Tokio, Japón</td><td>KN-321-B</td><td>Utilizamos una placa de corcho para la disección. Profundidad, 20 cm; ancho, 15 cm; y altura 3 cm.</td></tr><tr><td>Synergy H1 Lector de microplacas multimodo híbrido</td><td>Agilent Technologies, Inc., Santa Clara, CA, EE. UU</td>. <td>NA</td><td>Medimos la absorbancia de las muestras a 450 nm, utilizando el lector de microplacas multimodo híbrido Synergy H1.</td></tr><tr><td>Jeringa</td><td>Terumo Corporation, Tokio, Japón&nbsp;</td><td>SS-01T</td><td>Usamos una jeringa de 1 ml para la extracción de sangre del corazón.</td></tr><tr><td>Hilo</td><td>&nbsp; Niccho Kogyo Co., Ltd. Tokio, Japón,</td><td>NA</td><td>Atamos un catéter con hilo para asegurar un posicionamiento adecuado durante el procedimiento.</td></tr></tbody></table>

recolección de líquido de lavado nasal murino sin contaminación de sangre

Murine Nasal Lavage Fluid Collection without Blood Contamination

Utilizando el método convencional o novedoso, se recogieron muestras de NLF de ratones C57BL/6 por vía transfaríngea. Como se muestra en la Figura 1, las muestras de NLF recolectadas por el método convencional estaban ligeramente teñidas de rosa (Figura 1A); las muestras de NLF recolectadas por el nuevo método fueron claras (Figura 1B). Dado que la diferencia parecía ser el resultado de la contaminación de la sangre en las muestras ...

Recolección de líquido de lavado nasal murino sin contaminación de sangre

Upper airway samples, including nasal lavage fluid (NLF) and nasal swabs, are useful in detecting pathogens, including viruses and bacteria, which can ...

murine-nasal-lavage-fluid-collection-without-blood-contamination

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Fuente: Venuprasad, K., et al. Administración intratraqueal de Haemophilus influenzae en modelos de ratón para estudiar la inflamación de las vías respiratorias. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra la recolección y el procesamiento del líquido de lavado broncoalveolar de un ratón sacrificado infectado con Haemophilus influenzae no tipificable para su análisis posterior.

Recolección de líquido de lavado broncoalveolar de un modelo de ratón infectado con Haemophilus influenzae no tipificable

Este video demuestra el uso de la citometría de flujo para identificar y contar varias células inmunitarias en el líquido de lavado broncoalveolar. Inicialmente, las células inmunitarias individuales se identifican utilizando un colorante de viabilidad, seguido de la tinción diferencial de las proteínas marcadoras de superficie, lo que permite la enumeración precisa de cada tipo de célula.

Identificación y enumeración de células inmunitarias en líquido de lavado broncoalveolar mediante citometría de flujo

La colonización del nasopharynx murine con pneumoniae del estreptococo y la extracción subsecuente de células adherentes o reclutadas se describe. Esta técnica consiste en enjuagar la nasofaringe y la recolección del líquido a través de las narinas y es adaptable para varias lecturas, incluyendo la cuantificación celular diferencial y el análisis de la expresión de ARNm in situ.

Caracterización De Las Respuestas Inflamatorias Durante La Colonización Intranasal Con Streptococcus pneumoniae

El estado de salud de los pulmones se refleja por el tipo y número de células inmunitarias que están presentes en los bronquiolos del pulmón. Se describe una técnica de lavado broncoalveolar que permite el aislamiento y estudio de las células no adherentes y factores solubles en el tracto respiratorio inferior de los ratones.

Lavado broncoalveolar de los pulmones murinos para analizar infiltración de células inflamatorias

Este protocolo describe una técnica no invasiva para la toma de muestras del líquido guarnición mucosa de las vías aéreas superiores. Puede ser utilizado para realizar la cuantificación de en vivo los niveles de mediadores de la proteína, tales como citoquinas y quimioquinas, en sujetos de todas las edades.

Muestreo no invasivo de revestimiento mucoso líquido para la cuantificación In Vivo de la vía aérea superior mediador inmune niveles

Este manuscrito describe el uso de técnicas de absorción nasal y bronquial, específicamente utilizando matrices absorbentes sintéticos (SAM) para el líquido de la mucosa de revestimiento (MLF) de la vía aérea superior e inferior de la muestra. Estos métodos proporcionan mejor estandarización y tolerabilidad que técnicas de muestreo respiratorias existentes.

Absorción de fluidos nasales y bronquiales: precisión muestras de la Mucosa respiratoria humana y laboratorio de procesamiento de muestras

Este protocolo describe una técnica mejorada para la abundante colección de líquido cefalorraquídeo (LCR) sin contaminación de la sangre. Con la mayor colección de la muestra y la pureza, se pueden realizar análisis más uso de CSF para mejorar nuestra comprensión de las enfermedades que afectan el cerebro y la médula espinal.

Un método mejorado para la recolección de líquido cefalorraquídeo de los ratones anestesiados

Esta comunicación describe modelos murinos para los propósitos experimentales y metodologías para el aislamiento y cultivo de macrófagos alveolares de los seres humanos.

Aislamiento y cultivo In Vitro de los macrófagos alveolares murinos y humanos

El lavado nasal con solución salina se puede utilizar para tomar muestras del microambiente inmunitario nasal canino. Debido a que el abordaje es relativamente no invasivo y no altera los tejidos nasales, se puede realizar en serie. Las células y proteínas recogidas de la técnica de lavado nasal pueden ser procesadas para diversos análisis de laboratorio.

Lavado salino para la toma de muestras del microambiente inmunitario nasal canino

Aquí, presentamos un protocolo para una técnica de extracción de sangre optimizada en sujetos murinos a través de la venopunción de la vena facial utilizando una lanceta. Utilizamos esta técnica junto con la evaluación de citometría de flujo para caracterizar fenotipos celulares de cepas transgénicas, congénitas e indicadoras. También es adecuado para el análisis de citoquinas séricas y estudios de diabetes.

Venopunción de venas faciales para extracción de sangre murina

Aprende a recolectar líquido de lavado nasal murino sin contaminación sanguínea mediante la vía faríngea con bolas de algodón. Este método mejora la precisión en la detección de patógenos respiratorios.

Recolección de líquido de lavado nasal murino sin contaminación de sangre

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