Name: Un modelo de explante ex vivo para estudiar las interacciones gliales en la retina del ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-15T13:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Aprende a aislar la retina de ratón para cultivos de explante ex vivo que preservan el entorno natural celular. Este método facilita el estudio de la función glial en la neuroinflamación del glaucoma.

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<ol><li>Quigley, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+glaucomatous+optic+neuropathy%3A+the+synergy+between+clinical+observation+and+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Understanding glaucomatous optic neuropathy: the synergy between clinical observation and investigation.</a> Annu Rev Vis Sci. 2, 235-254 (2016).</li>
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<li>Jeon, C. J., Strettoi, E., Masland, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+major+cell+populations+of+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The major cell populations of the mouse retina.</a> J Neurosci. 18 (21), 8936-8946 (1998).</li>
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<li>Alarautalahti, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viability+of+mouse+retinal+explant+cultures+assessed+by+preservation+of+functionality+and+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Viability of mouse retinal explant cultures assessed by preservation of functionality and morphology.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 60 (6), 1914-1927 (2019).</li>
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<li>Reboussin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+neuroprotective+and+immunomodulatory+properties+of+mesenchymal+stem+cells+in+an+ex+vivo+retinal+explant+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Evaluation of neuroprotective and immunomodulatory properties of mesenchymal stem cells in an ex vivo retinal explant model.</a> J Neuroinflammation. 19 (1), 63(2022).</li>
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<li>Yu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+target+synaptic+sites+early+during+excitatory+circuit+disassembly+in+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Microglia target synaptic sites early during excitatory circuit disassembly in neurodegeneration.</a> iScience. 28 (4), 112201(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>#11 Cuchillas de bisturí</td><td>Bard-Parker</td><td>3,71,311</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta de 1 mL ('Pipetman P1000')</td><td>Gilson</td><td>F144059M</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri de 100 mm</td><td>Falcon</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>16% Paraformaldehído</td><td>Ted Pella Inc</td><td>18,505</td><td>Diluido al 4% para fijación</td></tr><tr><td>Placa de 24 pocillos</td><td>Falcon 353047</td><td></td><td>Para fijación, bloqueo y incubación de anticuerpos</td></tr> placa de <tr><td>Petri de 35 mm</td><td>Falcon</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>placa de 6 pocillos y kit de inserción</td><td>Greiner bio-one</td><td>657641</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488-Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.</td><td>711-545-152</td><td>Dilución 1:800</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 Burro anti-rata IgG (H+L) Altamente adsorbido cruzado</td><td>Invitrogen</td><td>A-21209</td><td>Dilución 1:800</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594-F(ab')2 Burro Anti-ratón IgG (H+L)&nbsp;</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.</td><td>715-586-150</td><td>Dilución 1:800</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647-Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.&nbsp;</td><td>706-605-148</td><td>Dilución 1:800</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647-F(ab')2 Donkey Anti-Chicken IgY (IgG) (H+L)&nbsp;</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.</td><td>703-606-155</td><td>Dilución 1:800</td></tr><tr><td>Pinzas angulares ('5/45')</td><td>FST / Dumont</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-Brn3a (ratón)</td><td>Chemicon</td><td>MAB1585</td><td>dilución 1:200 Anticuerpo</td></tr><tr><td>anti-CD206 (rata)</td><td>Biorad</td><td>MCA2235</td><td>dilución 1:200</td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-GFAP (pollo)</td><td>Abcam</td><td>ab4674</td><td>1:1000 dilución</td></tr><tr><td>Anti-Iba1 anticuerpo (conejo)</td><td>FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation</td><td>019-19741</td><td>dilución 1:500</td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-Tmem119 (conejillo de indias)</td><td>Synaptic Systems</td><td>400 004</td><td>dilución 1:500</td></tr><tr><td>B-27, 50x</td><td>Gibco (Thermofisher)</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas curvas romas ('Extra Fine Graefe)</td><td>FST</td><td>11152-10</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina de suero bovino</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647</td><td>Utilice 1% p/v para el bloqueo y la incubación de anticuerpos</td></tr><tr><td>Kit de filtro (0,2 &micro; Membrana de PES, filtro superior de botella de 150 ml)&nbsp;</td><td>FisherScientific</td><td>FB12566508</td><td></td></tr><tr><td>Pincel fino, tamaño 3/0</td><td>Princeton Art & Brush Co.</td><td>06435-1030</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMax</td><td>Gibco (Thermofisher)</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Toallitas de laboratorio (toallitas Kim)&nbsp;</td><td>KIMTECH</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>N-2, 100x</td><td>Gibco (Thermofisher)</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal-A Medium, menos rojo fenol</td><td>Gibco (Thermofisher)</td><td>12349015</td><td></td></tr><tr><td>Suero de burro normal</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.</td><td>017-000-121</td><td>Uso al 10% para el bloqueo y la incubación de anticuerpos</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina</td><td>Gibco (Thermofisher)</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de pipeta, 1000 &micro; L</td><td>TipOne</td><td>1126-7810</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte ('Cohan-Vannas')</td><td>FST</td><td>15000-11</td><td></td></tr><tr><td>Agua estéril ('Dnase, Rnase free')</td><td>Invitrogen</td><td>10977-015</td><td></td></tr><tr>PBS <td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td><td>Pinzas rectas con filtro</td></tr> estéril <tr><td>('mini')</td><td>FST / Dumont</td><td>11200-14</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta de transferencia, 5,8 ml</td><td>FisherScientific</td><td>13-711-9AMMD</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>A16046. Uso de AP</td><td>al 0,5% para el bloqueo y la incubación de anticuerpos</td></tr></tbody></table>

un modelo de explante ex vivo para estudiar las interacciones gliales en la retina del ratón

An Ex Vivo Explant Model for Studying Glial Interactions in the Mouse Retina

A escala macroscópica, las retinas explantadas permanecen esencialmente sin cambios en los puntos de tiempo de 1 y 3 días, aunque en este último momento se vuelven relativamente frágiles, lo que requiere un manejo cuidadoso antes de la fijación u otros puntos finales experimentales. Las retinas deben ser relativamente planas, sin pliegues (lo que puede resultar en una interrupción localizada de la difusión de oxígeno y nutrientes), y deben estar suspendidas en el medio entre la interfaz aire-líquido y el inserto de culti...

Un modelo de explante ex vivo para estudiar las interacciones gliales en la retina del ratón

The role of glia in glaucoma is an increasingly prominent research topic, but much remains unknown about how populations of these support cells - namely ...

an-ex-vivo-explant-model-for-studying-glial-interactions-mouse

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Investigación

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Biología

Aquí se presentan dos técnicas para manipular la expresión génica en las células ganglionares de la retina murina (CGR)...

La electroporación in vivo en el útero y el ex de la expresión génica en células de ratón ganglionares retinianas

Este artículo video demuestra el establecimiento de cultivos de retina organotípicos wholemount y un procedimiento citospina para el análisis de los efectos inducidos exógenamente. Organotípicos culturas wholemount imitar la...

En vivo-como organotípicos Cultura murino wholemount retina

Aquí desarrollamos las herramientas necesarias...

Ex vivo de imágenes en vivo de las divisiones sola celda en ratón neuroepitelio

Este video muestra el cultivo de células gliales de Müller (MG) aisladas de retinas de ratones. Las retinas se disocian en una suspensión unicelular utilizando enzimas digestivas. Luego, las células se cultivan en un medio con un factor de crecimiento que promueve la proliferación de células MG y la mortalidad de las células neuronales. Las células neuronales muertas se eliminan durante el paso, y las células MG se cultivan para su posterior análisis.

Establecimiento de un cultivo de células gliales de Müller obtenido de retinas de ratón

Source: Bosco, A., et al. Dinámica in vivo de la activación de la microglía retiniana durante la neurodegeneración: imagen oftalmoscópica confocal y morfometría celular en glaucoma de ratón. J. Vis. Exp. (2015) Este video muestra imágenes in vivo de la microglía de la retina en un modelo de ratón de glaucoma. Un ratón transgénico con microglía retiniana fluorescente que expresa proteínas se coloca debajo de un oftalmoscopio. La iluminación infrarroja se utiliza para localizar la cabeza del...

Obtención de imágenes in vivo de la microglía de la retina en un modelo murino de glaucoma

En este informe, se destacan las ventajas de las culturas organotypic y disociadas cultivos primarios de ganglios de raíz dorsal derivadas de ratón para investigar una amplia gama de mecanismos asociados a la interacción neuronal-glial, neuroplasticidad, neuroinflamación y la respuesta a la infección viral.

Ratón adulto DRG explante y disociado modelos celulares para investigar respuestas a insultos ambientales incluyendo infección Viral y la neuroplasticidad

Un ensayo de rebanada ex vivo permite que el crecimiento del nervio oculomotor se intermiera en tiempo real. Los cortes se generan mediante la incrustación de embriones E10.5 IslMN:GFP en agarosa, cortando en un vibratome, y creciendo en una incubadora de etapa superior. El papel de las vías de orientación de axón se evalúa mediante la adición de inhibidores a los medios de cultivo.

Cultivo de rebanadas de Oculomotor Ex Vivo de ratones embrionarios con tecnología GFP para imágenes de lapso de tiempo de crecimiento del nervio oculomotor

El protocolo describe explantes organotípicos de ratón neuroretina,cultivados junto con su epitelio pigmentario retiniano (EPR), en medio definido R16, libre de suero y antibióticos. Este método es relativamente simple de realizar, menos costoso y lento en comparación con los experimentos in vivo, y se puede adaptar a numerosas aplicaciones experimentales.

A largo plazo, Cultivo Sin Suero De Explantes Organotípicos De La Retina De Ratón Con Epitelio Pigmento Retiniano Intacto

La imagen in vivo es una herramienta poderosa para el estudio de la biología en la salud y la enfermedad. Este protocolo describe imágenes transpupilares de la retina del ratón con un microscopio estándar de dos fotones. También demuestra diferentes métodos de imagen in vivo para etiquetar fluorescentemente múltiples cohortes celulares de la retina.

Imágenes transpupilares de dos fotones in vivo de la retina del ratón

Este protocolo presenta y describe los pasos para el aislamiento, disección, cultivo y tinción de explantes de retina obtenidos de un ratón adulto. Este método es beneficioso como modelo ex vivo para estudiar diferentes enfermedades neurovasculares de la retina como la retinopatía diabética.

Explante retiniano de la retina de ratón adulto como modelo ex vivo para el estudio de enfermedades neurovasculares retinianas

Este artículo demuestra un método para visualizar y cuantificar la motilidad y el contacto de la microglía con puntos postsinápticos en la retina mediante microscopía confocal de disco giratorio.

Imágenes en vivo y caracterización de la dinámica de la microglía e interacciones con sinapsis en retina murina enferma

Aprende a aislar la retina de ratón para cultivos de explante ex vivo que preservan el entorno natural celular. Este método facilita el estudio de la función glial en la neuroinflamación del glaucoma.

Un modelo de explante ex vivo para estudiar las interacciones gliales en la retina del ratón

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