Name: Microscopía de expansión: Imagen fluorescente de alta resolución con microscopio convencional (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-19T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Aprende microscopía de expansión con criofijación para biología celular de alta resolución. Este protocolo preserva estructuras celulares nativas y permite imaginar microtúbulos dinámicos con microscopios estándar.

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<ol><li>Jacquemet, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+biologist%27s+guide+to+super-resolution+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The cell biologist's guide to super-resolution microscopy.</a> J Cell Sci. 133 (11), jcs240713(2020).</li>
<li>Chen, F., Tillberg, P. W., Boyden, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+imaging%3A+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Optical imaging: expansion microscopy.</a> Science. 347 (6221), 543-548 (2015).</li>
<li>Laporte, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-series+reconstruction+of+the+molecular+architecture+of+human+centriole+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Time-series reconstruction of the molecular architecture of human centriole assembly.</a> Cell. 187 (9), 2158-2174 (2024).</li>
<li>Steib, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WDR90+is+a+centriolar+microtubule+wall+protein+important+for+centriole+architecture+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">WDR90 is a centriolar microtubule wall protein important for centriole architecture integrity.</a> Elife. 9, e57205(2020).</li>
<li>Le Borgne, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolutionary+conserved+proteins+CEP90%2C+FOPNL%2C+and+OFD1+recruit+centriolar+distal+appendage+proteins+to+initiate+their+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">The evolutionary conserved proteins CEP90, FOPNL, and OFD1 recruit centriolar distal appendage proteins to initiate their assembly.</a> PLoS Biol. 20 (9), e3001782(2022).</li>
<li>Bertiaux, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy+provides+new+insights+into+the+cytoskeleton+of+malaria+parasites+including+the+conservation+of+a+conoid%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy provides new insights into the cytoskeleton of malaria parasites including the conservation of a conoid.</a> PLoS Biol. 19 (3), e3001020(2021).</li>
<li>Liffner, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atlas+of+Plasmodium+falciparum+intraerythrocytic+development+using+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Atlas of Plasmodium falciparum intraerythrocytic development using expansion microscopy.</a> Elife. 12, RP88088(2023).</li>
<li>Amodeo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+novel+mitochondrial+genome+segregation+factor+TAP110+in+Trypanosoma+brucei%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Characterization of the novel mitochondrial genome segregation factor TAP110 in Trypanosoma brucei.</a> J Cell Sci. 134 (5), jcs254300(2021).</li>
<li>Corrales, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tubulin+detyrosination+shapes+Leishmania+cytoskeletal+architecture+and+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Tubulin detyrosination shapes Leishmania cytoskeletal architecture and virulence.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 122 (3), e2415296122(2025).</li>
<li>Brunet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Alms1+proteins+regulate+centriolar+cartwheel+assembly+by+enabling+Plk4-Ana2+amplification+loop%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Drosophila Alms1 proteins regulate centriolar cartwheel assembly by enabling Plk4-Ana2 amplification loop.</a> EMBO J. 44 (8), 2396(2025).</li>
<li>Langner, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+expansion+microscopy+%28U-ExM%29+of+mouse+and+human+kidneys+for+analysis+of+subcellular+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Cytoskeleton+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure expansion microscopy (U-ExM) of mouse and human kidneys for analysis of subcellular structures.</a> Cytoskeleton (Hoboken). 81 (11), 618-638 (2024).</li>
<li>Mercey, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+connecting+cilium+inner+scaffold+provides+a+structural+foundation+that+protects+against+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">The connecting cilium inner scaffold provides a structural foundation that protects against retinal degeneration.</a> PLoS Biol. 20 (6), e3001649(2022).</li>
<li>Steib, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TissUExM+enables+quantitative+ultrastructural+analysis+in+whole+vertebrate+embryos+by+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Methods%22%5BJournal%5D)">TissUExM enables quantitative ultrastructural analysis in whole vertebrate embryos by expansion microscopy.</a> Cell Rep Methods. 2 (10), 100311(2022).</li>
<li>Freifeld, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy+of+zebrafish+for+neuroscience+and+developmental+biology+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy of zebrafish for neuroscience and developmental biology studies.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (50), E10799-E10808 (2017).</li>
<li>Yu, C. J., Orozco Cosio, D. M., Boyden, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ExCel%3A+super-resolution+imaging+of+C.+elegans+with+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">ExCel: super-resolution imaging of C. elegans with expansion microscopy.</a> Methods Mol Biol. 2468, 141-203 (2022).</li>
<li>Tillberg, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein-retention+expansion+microscopy+of+cells+and+tissues+labeled+using+standard+fluorescent+proteins+and+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Protein-retention expansion microscopy of cells and tissues labeled using standard fluorescent proteins and antibodies.</a> Nat Biotechnol. 34 (9), 987-992 (2016).</li>
<li>Gambarotto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+cellular+ultrastructures+using+expansion+microscopy+%28U-ExM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Imaging cellular ultrastructures using expansion microscopy (U-ExM).</a> Nat Methods. 16 (1), 71-74 (2019).</li>
<li>Ku, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+and+scalable+super-resolution+imaging+of+three-dimensional+protein+localization+in+size-adjustable+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multiplexed and scalable super-resolution imaging of three-dimensional protein localization in size-adjustable tissues.</a> Nat Biotechnol. 34 (9), 973-981 (2016).</li>
<li>Schnell, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunolabeling+artifacts+and+the+need+for+live-cell+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Immunolabeling artifacts and the need for live-cell imaging.</a> Nat Methods. 9 (2), 152-158 (2012).</li>
<li>Dubochet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-EM-the+first+thirty+years%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">Cryo-EM-the first thirty years.</a> J Microsc. 245 (3), 221-224 (2012).</li>
<li>Neuhaus, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethane-freezing%2Fmethanol-fixation+of+cell+monolayers%3A+a+procedure+for+improved+preservation+of+structure+and+antigenicity+for+light+and+electron+microscopies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Ethane-freezing/methanol-fixation of cell monolayers: a procedure for improved preservation of structure and antigenicity for light and electron microscopies.</a> J Struct Biol. 121 (3), 326-342 (1998).</li>
<li>Kellenberger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+cryofixation+and+freeze+substitution%3A+observations+and+theoretical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">The potential of cryofixation and freeze substitution: observations and theoretical considerations.</a> J Microsc. 161 (Pt 2), 183-203 (1991).</li>
<li>Laporte, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+native+cellular+organization+by+coupling+cryofixation+with+expansion+microscopy+%28Cryo-ExM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Visualizing the native cellular organization by coupling cryofixation with expansion microscopy (Cryo-ExM).</a> Nat Methods. 19 (2), 216-222 (2022).</li>
<li>Hinterndorfer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+expansion+microscopy+reveals+the+cellular+architecture+of+budding+and+fission+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure expansion microscopy reveals the cellular architecture of budding and fission yeast.</a> J Cell Sci. 135 (24), jcs260240(2022).</li>
<li>Mikus, F., Dey, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+expansion+microscopy+%28U-ExM%29+of+the+fission+yeast+Schizosaccharomyces+pombe%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure expansion microscopy (U-ExM) of the fission yeast Schizosaccharomyces pombe.</a> Methods Mol Biol. 2862, 47-59 (2025).</li>
<li>Ben Chaabene, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxoplasma+gondii+rhoptry+discharge+factor+3+is+essential+for+invasion+and+microtubule-associated+vesicle+biogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Toxoplasma gondii rhoptry discharge factor 3 is essential for invasion and microtubule-associated vesicle biogenesis.</a> PLoS Biol. 22 (8), e3002745(2024).</li>
<li>Shah, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life-cycle-coupled+evolution+of+mitosis+in+close+relatives+of+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Life-cycle-coupled evolution of mitosis in close relatives of animals.</a> Nature. 630 (8015), 116-122 (2024).</li>
<li>Klena, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in-depth+guide+to+the+ultrastructural+expansion+microscopy+%28U-ExM%29+of+Chlamydomonas+reinhardtii%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">An in-depth guide to the ultrastructural expansion microscopy (U-ExM) of Chlamydomonas reinhardtii.</a> Bio Protoc. 13 (17), e4792(2023).</li>
<li>van den Hoek, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+architecture+of+the+ciliary+base+reveals+the+stepwise+assembly+of+intraflagellar+transport+trains%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">In situ architecture of the ciliary base reveals the stepwise assembly of intraflagellar transport trains.</a> Science. 377 (6605), 543-548 (2022).</li>
<li>Mikus, F., et al. Charting the landscape of cytoskeletal diversity in microbial eukaryotes. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMikus%2C+F+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2024).</li>
<li>Petrich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+insights%3A+harnessing+expansion+microscopy+for+super-resolution+analysis+of+HIV-1-cell+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Expanding insights: harnessing expansion microscopy for super-resolution analysis of HIV-1-cell interactions.</a> Viruses. 16 (10), 1610(2024).</li>
<li>Louvel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((iU-ExM%3A+nanoscopy+of+organelles+and+tissues+with+iterative+ultrastructure+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">iU-ExM: nanoscopy of organelles and tissues with iterative ultrastructure expansion microscopy.</a> Nat Commun. 14 (1), 7893(2023).</li>
<li>Lemaître, F., et al. Unveiling the molecular architecture of T cells and immune synapses with cryo-expansion microscopy. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLema%C3%AEtre%2C+F+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2025).</li>
<li>Millierioux, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+biosynthesis+of+sterols+and+fatty+acids+in+the+Trypanosoma+brucei+procyclic+form%3A+carbon+source+preferences+and+metabolic+flux+redistributions%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">De novo biosynthesis of sterols and fatty acids in the Trypanosoma brucei procyclic form: carbon source preferences and metabolic flux redistributions.</a> PLoS Pathog. 14 (5), e1007116(2018).</li>
<li>Bangs, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+cloning+and+cellular+localization+of+a+BiP+homologue+in+Trypanosoma+brucei%3A+divergent+ER+retention+signals+in+a+lower+eukaryote%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Molecular cloning and cellular localization of a BiP homologue in Trypanosoma brucei: divergent ER retention signals in a lower eukaryote.</a> J Cell Sci. 105 (Pt 4), 1101-1113 (1993).</li>
<li>Dolgin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Expansion+microscopy%27+turns+ten%3A+how+a+tissue-swelling+method+brought+super-resolution+imaging+to+the+masses%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">'Expansion microscopy' turns ten: how a tissue-swelling method brought super-resolution imaging to the masses.</a> Nature. 637 (8046), 752-754 (2025).</li>
<li>Tosetti, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+function+of+the+alveolin+network+in+the+subpellicular+microtubules+and+conoid+assembly+in+Toxoplasma+gondii%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Essential function of the alveolin network in the subpellicular microtubules and conoid assembly in Toxoplasma gondii.</a> Elife. 9, e56635(2020).</li>
<li>Gorilak, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy+facilitates+quantitative+super-resolution+studies+of+cytoskeletal+structures+in+kinetoplastid+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biol%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy facilitates quantitative super-resolution studies of cytoskeletal structures in kinetoplastid parasites.</a> Open Biol. 11 (9), 210131(2021).</li>
<li>Halpern, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybrid+structured+illumination+expansion+microscopy+reveals+microbial+cytoskeleton+organization%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Hybrid structured illumination expansion microscopy reveals microbial cytoskeleton organization.</a> ACS Nano. 11 (12), 12677-12686 (2017).</li>
<li>Gao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+stimulated+emission+depletion+microscopy+%28ExSTED%29%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Expansion stimulated emission depletion microscopy (ExSTED).</a> ACS Nano. 12 (5), 4178-4185 (2018).</li>
<li>Zwettler, F. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+resolution+imaging+by+post-labeling+expansion+single-molecule+localization+microscopy+%28Ex-SMLM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Molecular resolution imaging by post-labeling expansion single-molecule localization microscopy (Ex-SMLM).</a> Nat Commun. 11 (1), 3388(2020).</li>
<li>Daetwyler, S., Fiolka, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-sheets+and+smart+microscopy%2C+an+exciting+future+is+dawning%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Light-sheets and smart microscopy, an exciting future is dawning.</a> Commun Biol. 6 (1), 502(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Soporte metálico para tubos de 5 ml</td><td>Dominique Dutscher</td><td>QB-E5</td><td>Paso de sustitución por congelación</td></tr><tr><td>Crio-émbolo manual 620</td><td>RHOST</td><td>https://rhost-em.com/</td><td>Paso de criofijación</td></tr><tr><td>Acetona 99,8% AcroSeal</td><td>Acros Organics</td><td>Gato. nº 67-64-1&nbsp;</td><td>Paso de sustitución por congelación</td></tr><tr><td>Acrilamida 40% (AA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4058</td><td>Procedimiento de expansión &nbsp; (ancla)</td></tr><tr><td>Ácido acrílico y nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>8.00181&nbsp;</td><td>Procedimiento de expansión (polímero)</td></tr><tr><td>Persulfato de amonio (APS)</td><td>Thermo Fisher</td><td>17874</td><td>Procedimiento de expansión (polímero)</td></tr><tr><td>Punzón para biopsia</td><td>Dominique Dutscher</td><td>PUK-40</td><td>Necesario para cortar el gel antes de la desnaturalización y no es necesario;</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td>Inmunotinción &nbsp;</td></tr><tr><td>Cámara celular Attofluor</td><td>Invitrogen</td><td>A7816</td><td>Cámara de imagen adaptada a cubiertas de 24 mm para imagen</td></tr><tr><td>Cámara de celdas</td><td>Servicio de Ampliación de Vida</td><td>10900</td><td>Cámara de imagen adaptada a cubiertas de 18 mm para imagen</td></tr><tr><td>Coberturas 12 mm&nbsp;</td><td>Dominique Dutscher</td><td>100040</td><td>Crecimiento de células / unión de T. brucei</td></tr><tr><td>Coberturas 24 mm&nbsp;</td><td>Dominique Dutscher</td><td>900547</td><td>Imagens&nbsp;</td></tr><tr><td>Cubiertas de 18mm</td><td>VWR</td><td>631-0153</td><td>Imagens&nbsp;</td></tr><tr><td>Etano gaz&nbsp;</td><td>Linde Gaz</td><td>88888DE</td><td>Necesario para la criofijación</td></tr><tr><td>Formaldehído 36.5&ndash; 38% (FA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; F8775</td><td>Procedimiento de expansión &nbsp; (ancla)</td></tr><tr><td>Glutaraldhehído 25% (GA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; G5882</td><td>Paso de sustitución por congelación</td></tr><tr><td>Glicerol y nbsp;</td><td>Euromedex&nbsp;</td><td>EU3550</td><td>Almacenamiento a largo plazo en gel y nbsp;</td></tr><tr><td>Nitrógeno líquido &nbsp;</td><td>Linde Gaz</td><td>2200975</td><td>Necesario para la criofijación (enfriar el sistema)</td></tr><tr><td>Microtubo de bloqueo transparente 5 ml&nbsp;</td><td>Dominique Dutscher</td><td>390932A</td><td>Necesario para la sustitución por congelación</td></tr><tr><td>Aguja 18G</td><td>Dominique Dutscher</td><td>050123B</td><td>Necesario para recoger acetona</td></tr><tr><td>N,N-metilbisacrilamida 2% (BIS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1533, SIGMA</td><td>Procedimiento de expansión (polímero)</td></tr><tr><td>Paraformaldehído 16% (PFA)</td><td>EMS</td><td>Gato. Nº 15710</td><td>Paso de sustitución por congelación</td></tr><tr><td>Poli-D-lisina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1024</td><td>Cubiertas de recubrimiento para muestra / imagen/nbsp;</td></tr><tr><td>Poli-L-lisina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1274</td><td>Cubiertas de recubrimiento para muestra / imagen/nbsp;</td></tr><tr><td>Reducidor de presión &nbsp;</td><td>Linde Gaz</td><td>CPLH0SJ-LIN224</td><td>Reduicador de presión que permite la distrurgación de etano (criofijación)</td></tr><tr><td>Seringe Terumo 10 ml</td><td>Dominique Dutscher</td><td>50132</td><td>Necesario para recoger acetona</td></tr><tr><td>Kit de elastómeros de silicona</td><td>Dow</td><td>4001834</td><td>Kit para la preparación de placas de pozo en silioneado (inmunotinción) y nbsp;</td></tr><tr><td>Acrilato de sodio 97-99% (SA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>408220</td><td>Procedimiento de expansión (polímero)</td></tr><tr><td>AK Scientific</td><td>R624</td><td>Procedimiento de expansión (polímero)</td><td></td></tr><tr><td>Dodecilo sulfato de sodio</td><td>Euromedex</td><td>EU0660</td><td>Procedimiento de expansión (desnaturalización)</td></tr><tr><td>Tetrametiletilendiamina (TEMED)</td><td>Thermo Fisher</td><td>17919</td><td>Procedimiento de expansión (polímero)</td></tr><tr><td>Tubings y nbsp;</td><td>Termo Científica</td><td>8060-0060</td><td>Tubos para la desplegación de etano (criofijación)</td></tr><tr><td>Preadolescente-20</td><td>Euromedex</td><td>1005-7</td><td>Inmunotinción &nbsp;</td></tr><tr><td>Pinzas Dumont n&deg; 5&nbsp;</td><td>FineScienceTools</td><td>11255-20</td><td>Manipulación de los portados &nbsp;</td></tr></tbody></table>

microscopía de expansión: imagen fluorescente de alta resolución con microscopio convencional

Expansion Microscopy: High-Resolution Fluorescent Imaging with a Conventional Microscope

Microscopía de expansión: Imagen fluorescente de alta resolución con microscopio convencional

Expansion microscopy (ExM) is an innovative super-resolution fluorescence microscopy technique that physically enlarges biological specimens, enabling ...

expansion-microscopy-high-resolution-fluorescent-imaging-with

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

En muchas situaciones clínicas y biológicas es conveniente estudiar los procesos celulares a medida que evolucionan en su microambiente nativa. A continuación se describe el montaje y el uso de un bajo costo de fibra óptica de microscopio que puede ofrecer imágenes en tiempo real en el cultivo celular, los estudios en animales y estudios clínicos del paciente.

De alta resolución de fibra óptica para Microendoscopy In situ Celular imágenes

La información espacio-temporal sobre las proteínas dinámicas dentro de las células vivas es crucial para entender la biología. Un tipo de microscopía de superresolución llamada microscopía rápida de iluminación estructurada en 3D (f3D-SIM) revela información única sobre el anillo Z citocinético en las bacterias: tanto su apariencia en forma de perla como la rápida dinámica de FtsZ dentro del anillo.

Super-resolución de imagen del anillo Z cytokinetic en bacterias vivas Utilizando 3D-estructurado Fast Iluminación Microscopía (F3D-SIM)

Aquí presentamos una guía práctica de la construcción de un sistema de microscopía integrado, que combina la proyección de imagen de epi-fluorescente convencional, proyección de imagen de una sola molécula basada en la detección de súper resolución y detección de una sola molécula de varios color, incluyendo transferencia de energía de resonancia de la fluorescencia de una sola molécula la proyección de imagen, en una puesta en marcha de una manera costo-eficiente.

Realización de múltiples modos de la proyección de imagen con un microscopio de fluorescencia

Las imágenes a nanoescala de muestras de tejido clínico pueden mejorar la comprensión de la patogénesis de la enfermedad. La patología de expansión (ExPath) es una versión de la microscopía de expansión (ExM), modificada por compatibilidad con muestras de tejido sortea estándar, para explorar la configuración a nanoescala de biomoléculas utilizando microscopios limitados de difracción convencional.

Imágenes nanoscópicas de secciones de tejido humano a través de la expansión física e isotrópica

El método presentado permite visualizar proteínas celulares etiquetadas fluorescentemente con microscopía de expansión que conduce a una resolución de 70 nm en un microscopio convencional.

Imagen de las proteínas podocíticas nefrina, actina y podocina con microscopía de expansión

Aquí, se presenta un protocolo para la implementación de microscopía de expansión en embriones tempranos de Drosophila para lograr imágenes de superresolución utilizando un microscopio confocal convencional de barrido láser.

Uso de microscopía de expansión para agrandar físicamente embriones de Drosophila de montaje completo para obtener imágenes de superresolución

Aquí se presenta una nueva versión de microscopía de expansión (ExM), Magnify, que está modificada para una expansión de hasta 11 veces, conservando una amplia gama de clases de biomoléculas y es compatible con una amplia gama de tipos de tejidos. Permite la interrogación de la configuración a nanoescala de biomoléculas utilizando microscopios convencionales limitados por difracción.

Retención molecular universal con microscopía de expansión de 11 veces

Este estudio muestra un protocolo detallado para realizar microscopía de expansión de ultraestructura en tres etapas del ciclo de vida in vitro de Trypanosoma cruzi, el patógeno responsable de la enfermedad de Chagas. Incluimos la técnica optimizada para las proteínas del citoesqueleto y el marcaje panproteoma.

Microscopía de expansión ultraestructural en tres etapas del ciclo de vida in vitro de Trypanosoma cruzi

Aquí, proponemos un protocolo simple que combina ingeniería de oligosacáridos metabólicos, química de clic y microscopía de expansión que permite la obtención de imágenes de N-glicoproteínas sialiladas intracelulares con resolución mejorada utilizando equipos de microscopía de rutina.

Visualización de la sialilación intracelular con química de clic y microscopía de expansión

Este protocolo detalla las aplicaciones avanzadas de imagen y la gestión de recursos compartidos de un sistema de microscopio confocal de barrido láser integrado con un detector de matriz multiplexada para imágenes celulares y subcelulares de alta resolución. El flujo de trabajo permite la obtención de imágenes multimodales desde confocal hasta superresolución (~120 nm) dentro de una sola plataforma, haciendo que la visualización a escala nanométrica sea más accesible.

Imagen de superresolución y gestión compartida: un protocolo para microscopía confocal con detección multiplex

Aprende microscopía de expansión con criofijación para biología celular de alta resolución. Este protocolo preserva estructuras celulares nativas y permite imaginar microtúbulos dinámicos con microscopios estándar.

Microscopía de expansión: Imagen fluorescente de alta resolución con microscopio convencional

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