Name: Aclaramiento óptico transitorio mediante moléculas absorbentes para la obtención de imágenes ex vivo e in vivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T16:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Aprende a implementar aclaramiento óptico transitorio con tartracina para mejorar la imagen biomédica ex vivo e in vivo. Este protocolo reversible mejora la profundidad y claridad de imagen en tejidos y animales vivos.

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<ol><li>Yun, S. H., Kwok, S. J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light+in+diagnosis%2C+therapy+and+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Light in diagnosis, therapy and surgery.</a> Nat Biomed Eng. 1 (1), 0008(2017).</li>
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<li>Ertürk, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+3D+histology+powered+by+tissue+clearing%2C+omics+and+AI%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Deep 3D histology powered by tissue clearing, omics and AI.</a> Nat Methods. 21 (7), 1153-1165 (2024).</li>
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<li>Yu, H., Liu, J. -B., Ma, Y. -S., Fu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+live+mice+offer+more+possibilities+for+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Innov+Med%22%5BJournal%5D)">Transparent live mice offer more possibilities for biomedical research.</a> Innov Med. 2 (4), 100098(2024).</li>
<li>Shabbir, M. W., Biswas, S., Kajla, R., Nadella, S., Ou, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designing+refractive+index+fluids+of+food+dye+for+light+propagation+through+scattering+media%5BTitle%5D)+AND+%22MRS+Commun%22%5BJournal%5D)">Designing refractive index fluids of food dye for light propagation through scattering media.</a> MRS Commun. , (2025).</li>
<li>Scheele, C. L. G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiphoton+intravital+microscopy+of+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Multiphoton intravital microscopy of rodents.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 89(2022).</li>
<li>Schmidt, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+II+fluorescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Near-infrared II fluorescence imaging.</a> Nat Rev Methods Primers. 4 (1), 23(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Balanza analítica</td><td>HZK</td><td>FA220S</td><td></td></tr><tr><td>Máquina de anestesia animal</td><td>Empresa de ciencias de la vida RWD</td><td>TAIJI-IE</td><td>Anestésicos por inhalación</td></tr><tr><td>Atipamezol HCL inyectable 5 mg/ml</td><td>Covertus</td><td>82124</td><td>Anestesia inyectable</td></tr><tr><td>Cámara CMOS</td><td>Laboratorios Thor</td><td>CS165CU/M, Zelux</td><td></td></tr><tr><td>Dexmedetomidina HCL inyectable 5 mg/10 mL</td><td>Covertus</td><td>72960</td><td>Anestesia inyectable</td></tr><tr><td>Iluminador de luz de fibra</td><td>Empresa de ciencias de la vida RWD</td><td>76301</td><td>Fuente de luz para iluminación superior</td></tr><tr><td>Portaobjetos de vidrio</td><td>CravitySci</td><td>0303-2122</td><td>Portaobjetos de microscopio de grado superior</td></tr><tr><td>Manta homeotérmica</td><td>Empresa de ciencias de la vida RWD</td><td>69027</td><td>Controlador de temperatura para animales</td></tr><tr><td>Tratamiento de imágenes</td><td>Abrir CV</td><td>Pitón</td><td>Software</td></tr><tr><td>Jeringa de insulina 0,5 ml 29 g</td><td>Punto de confort</td><td>26028</td><td>Anestesia inyectable</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Covertus</td><td>029405 SKU</td><td>Anestésicos por inhalación</td></tr><tr><td>Inyección de cemina HCL 100 mg/ml</td><td>Dechra</td><td>20042240</td><td>Anestesia inyectable</td></tr><tr><td>Fuente de luz LED</td><td>GGE corp</td><td>TLB-01</td><td>Fuente de luz para iluminación superior</td></tr><tr><td>Lente</td><td>Laboratorios Thor</td><td>MVL4WA</td><td>Distancia focal de 3,5 mm y apertura f/1,4</td></tr><tr><td>Nair</td><td>Iglesia y Dwight</td><td>L 1224</td><td>Crema depilatoria</td></tr><tr><td>PBS ph 7.4 (1x)</td><td>Gibco</td><td>2902869</td><td>Anestesia inyectable</td></tr><tr><td>Hisopo</td><td>Empresa puritana de productos médicos</td><td>Hospital 806-WC</td><td></td></tr><tr><td>Agarosa SeaPlaque</td><td>Lonza</td><td>50101</td><td>Químico</td></tr><tr><td>Tartrazina</td><td>MilliporeSigma</td><td>Número CAS: 1934-21-0</td><td>Químico</td></tr><tr><td>Pipeta de transferencia</td><td>Marca de pescador</td><td>13-711-9AMMD</td><td></td></tr><tr><td>Espectrofotómetro UV-VIS-NIR</td><td>Shimadzu</td><td>Especificaciones sólidas-3700i</td><td>Instrumento</td></tr><tr><td>Viales</td><td>Qorpak</td><td>242633</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas volumétricas</td><td>Investigación de Eppendorf plus</td><td>3123000063</td><td>100-1000&micro; L</td></tr><tr><td>Sistema de purificación de agua</td><td>Ciencia de la avidez</td><td>SOLO S</td><td>Instrumento</td></tr></tbody></table>

aclaramiento óptico transitorio mediante moléculas absorbentes para la obtención de imágenes ex vivo e in vivo

Transient Optical Clearing Using Absorbing Molecules for Ex Vivo and In Vivo Imaging

Demostración de transparencia óptica en tejido de pechuga de pollo ex vivo Para investigar la propagación de la luz a través de tejido ex vivo , utilizamos trozos de pechuga de pollo cruda deshuesada en rodajas con grosores de 1,5 mm, 2,5 mm y 3,5 mm (Figura 2B). Los tejidos se cortaron en paralelo a las fibras de colágeno, lo que garantizó una orientación consistente de las fibras muscu...

Aclaramiento óptico transitorio mediante moléculas absorbentes para la obtención de imágenes ex vivo e in vivo

Dynamic imaging is a foundational tool in biology and medicine, but it is limited by light scattering in live tissues caused by refractive index ...

transient-optical-clearing-using-absorbing-molecules-for-ex-vivo-vivo

Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

Se describen los métodos de formación de imágenes que utilizamos para investigar la distribución y la movilidad de las proteínas fluorescentes transfectadas residentes en el retículo endoplásmico (RE) por medio de la imagen confocal de células vivas. También analizamos ultraestructuralmente el efecto de su expresión en la arquitectura de este compartimento subcelular.

Visualización del retículo endoplasmático subdominios en células cultivadas

Para obtener imágenes de alta resolución de células marcadas con fluorescencia dentro de tejidos grandes, idealmente, las muestras biológicas deben ser visualizadas sin seccionar. 3DISCO es un procedimiento sencillo de limpieza de tejidos basado en la incubación secuencial con disolventes orgánicos. Al aclararse, los órganos se vuelven transparentes, lo que permite un escaneo láser de extremo a extremo del espécimen.

Borrado de imágenes Sistemas Biológicos intactos a nivel celular por 3DISCO

El uso de fluoróforos para la obtención de imágenes in vivo puede verse muy limitado por la opsonización, el aclaramiento rápido, la baja sensibilidad de detección y los efectos citotóxicos en el huésped. La encapsulación de fluoróforos en liposomas mediante hidratación y extrusión de película conduce a la extinción y protección de la fluorescencia, lo que permite obtener imágenes in vivo con una alta sensibilidad de detección.

Fluorescencia de extinción de un fluoróforo encapsulada en liposomas en infrarrojo cercano como herramienta para En Vivo Imagen Óptico

Las técnicas de aclarado óptico están revolucionando la forma en que se visualizan los tejidos. En este informe describimos las modificaciones del protocolo original Clear-Lipid-Exchange-Acrylamide-Hibridado-Rigid Imaging-compatible Tissue-hYdrogel (CLARITY) que produce resultados más consistentes y menos costosos.

Clearing óptico del sistema nervioso central del ratón Utilizando CLARITY pasiva

Debido al contenido alto de lípidos, tejido adiposo ha estado desafiando a visualizar utilizando métodos histológicos tradicionales. Adipo-Clear es un tejido de limpieza técnica que permite etiquetado robusta y alta resolución volumétrica fluorescente la proyección de imagen del tejido adiposo. Aquí, describimos los métodos para la preparación de la muestra, tratamiento previo, tinción, limpieza y montaje para la proyección de imagen.

Adipo-claro: Un tejido claro método de proyección de imagen tridimensional del tejido adiposo

La combinación de etiquetado de anticuerpos, limpieza óptica y microscopía de luz avanzada permite el análisis tridimensional de estructuras u órganos completos. Aquí se describe un método sencillo para combinar la inmunoetiquetado de rodajas renales gruesas, la limpieza óptica con la canela etílico y la imagen confocal que permite la visualización y cuantificación de estructuras renales tridimensionales.

Limpieza óptica e imágenes del tejido renal inmunoetiquetado

La imagen in vivo es una herramienta poderosa para el estudio de la biología en la salud y la enfermedad. Este protocolo describe imágenes transpupilares de la retina del ratón con un microscopio estándar de dos fotones. También demuestra diferentes métodos de imagen in vivo para etiquetar fluorescentemente múltiples cohortes celulares de la retina.

Imágenes transpupilares de dos fotones in vivo de la retina del ratón

La microscopía de dispersión Raman estimulada (SRS) permite obtener imágenes sin etiquetas de biomoléculas en función de su vibración intrínseca de enlaces químicos específicos. En este protocolo, se describe la configuración instrumental de un SRS integrado y un microscopio de fluorescencia de dos fotones para visualizar las estructuras celulares en la médula espinal de ratones vivos.

In vivo Imágenes de tejidos biológicos con fluorescencia combinada de dos fotones y microscopía de dispersión Raman estimulada

Aquí, se describe un método para hacer que los tejidos vegetales sean transparentes mientras se mantiene la estabilidad de las proteínas fluorescentes. Esta técnica facilita la obtención de imágenes profundas de tejidos vegetales despejados sin seccionamiento físico.

Limpieza óptica de tejidos vegetales para imágenes de fluorescencia

Este protocolo combina el aclaramiento óptico y el inmunomarcaje para obtener imágenes confocales de volumen completo de organoides de retina de montaje completo. Preserva la estructura 3D, lo que permite una visualización detallada de las vías neuronales clave, mejorando el estudio de la maduración de la retina, la organización espacial y sus posibles aplicaciones en el modelado de enfermedades y la medicina personalizada.

Visualización de organoides retinianos de montaje completo con resolución celular

Aprende a implementar aclaramiento óptico transitorio con tartracina para mejorar la imagen biomédica ex vivo e in vivo. Este protocolo reversible mejora la profundidad y claridad de imagen en tejidos y animales vivos.

Aclaramiento óptico transitorio mediante moléculas absorbentes para la obtención de imágenes ex vivo e in vivo

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