Name: La senescencia inducida por fármacos en las células hepáticas promueve la polarización de los macrófagos M2: implicaciones para la hepatotoxicidad asociada a los inhibidores de la tirosina quinasa (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T13:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 32 s
Description: Aprende cómo los inhibidores de tirosina quinasa inducen senescencia en hepatocitos Hep G2 y activan el fenotipo secretor asociado a senescencia para polarizar macrófagos M2. Este método revela mecanismos de hepatotoxicidad inducida por fármacos.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Línea celular de HepG2</td><td>NCCS</td><td></td><td>Línea celular adherente</td></tr><tr><td>Línea celular RAW264.7</td><td>NCCS</td><td></td><td>Línea celular adherente</td></tr><tr><td>DMEM (Eagle Medium Modificado de Dulbacco)</td><td>Himedia</td><td>AT066</td><td>Glucosa alta, polvo</td></tr><tr><td>MEM (Eagle Medium Modificado</td><td>Gibco</td><td>611100-053</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>PBS (Suero tampón de fosfato)</td><td>Himedia</td><td>TS1101</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>Solución de tripsina-EDTA</td><td>Himedia</td><td>TCL007</td><td>Solución</td></tr><tr><td>FBS (Suero Bovino Fetal)</td><td>Himedia</td><td>RM1112</td><td>Líquido</td></tr><tr><td>Tinte MTT</td><td>Himedia</td><td>TC191</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>Lapatinib</td><td>Selleckchem</td><td>S2111</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>Neratinib</td><td>Compañía Química de Caimán</td><td>18404</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>DMSO (Dimetil Sulfóxido)&nbsp;</td><td>Himedia</td><td>TC185</td><td>Solución</td></tr><tr><td>Formaldehído y nbsp;</td><td>Rankem</td><td>F0080</td><td>Solución</td></tr><tr><td>Glutaraldehído</td><td>Sigma-aldrich</td><td>340855</td><td>Solución</td></tr><tr><td>Ácido cítrico monohidrato, puro</td><td>Himedia</td><td>GRM229</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>Fosfato de sodio dibásico anhidro &nbsp;</td><td>Himedia</td><td>MB024</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>Ferrocianuro potásico, K4[Fe(CN)6]</td><td>Fisher Scientific & nbsp;</td><td>P-236-500</td><td></td></tr><tr><td>Ferricianuro de potasio, K3[Fe(CN)6]</td><td>Fisher Scientific & nbsp;</td><td>P-232-500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SRL</td><td>41721</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>MgCl2 hexahidrato</td><td>Himedia</td><td>GRM-1068</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>X-Gal</td><td>SRL</td><td>45904</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>Lipopolisacárido</td><td>Sigma-aldrich</td><td>L6529</td><td></td></tr><tr><td>interferón recombinante humano-&gamma;</td><td>Himedia</td><td>CF040-20MCG</td><td></td></tr><tr><td>Reactivo rojo profundo Cell ROX</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>C10422</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>H3570</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>MitoTRACKER Verde</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>1842298</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-ARG1</td><td>Afinidad</td><td>DF6657</td><td>Solución, MW calculado - 35kDa, MW observado - 65kDa</td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-NOS2</td><td>Cloudo Clone Corp.</td><td>PAA837Hu01</td><td>Solución, MW calculado - 130kDa, MW observado - 65kDa</td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-iNOS</td><td>Afinidad</td><td></td><td>Solución, MW calculada - 130kDa, MW observada - 120kDa</td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-GAPDH</td><td>Biobharati LifeScience Pvt.Ltd</td><td>BB-AB0060</td><td>Solución</td></tr><tr><td>Anticuerpo anticonejo</td><td>Compañía Química de Caimán</td><td>10004301</td><td>Solución</td></tr><tr><td>Membrana de nitrocelulosa &nbsp;</td><td>Merck Millipore Ltd.&nbsp;</td><td>HATF00010 (Número de producto)</td><td></td></tr><tr><td>femtoLUCENTTMPLUS HRP</td><td>G Biociencias &nbsp;</td><td>786-003</td><td></td></tr><tr><td>Antenas parabólicas de 60mm</td><td>¡NUCK</td><td>150462</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 96 pozos, &nbsp;</td><td>¡NUCK</td><td>165306</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora de cultivos celulares &nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>371</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio&nbsp;</td><td>1. Microscopio Invertido LEICA&nbsp; &nbsp; 2. Microscopio Confocal Nikon&nbsp;</td><td>1. LED DMIL & nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 2. Ti2E, A1R</td><td>&nbsp; Ambos son números de modelo</td></tr><tr><td>Sistema de Imagen iBright</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>CL1500 (número de modelo)</td><td></td></tr><tr><td>Lector de matrículas</td><td>Bio-RAD</td><td>Lector de microplacas iMark</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugadora&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Sorvall ST 8R (número de modelo)</td><td></td></tr></tbody></table>

la senescencia inducida por fármacos en las células hepáticas promueve la polarización de los macrófagos m2: implicaciones para la hepatotoxicidad asociada a los inhibidores de la tirosina quinasa

Drug-Induced Senescence in Liver Cells Promotes M2 Macrophage Polarization: Implications for Tyrosine Kinase Inhibitor-Associated Hepatotoxicity

La senescencia inducida por fármacos en las células hepáticas promueve la polarización de los macrófagos M2: implicaciones para la hepatotoxicidad asociada a los inhibidores de la tirosina quinasa

Lapatinib and neratinib are tyrosine kinase inhibitors (TKIs) approved for treating HER2-positive metastatic breast cancer, but their clinical use is ...

drug-induced-senescence-liver-cells-promotes-m2-macrophage

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Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

La senescencia celular, el estado irreversible de la detención del ciclo celular, puede ser inducida por diferentes tipos de estrés celular. A continuación, describimos protocolos para inducir senescencia y métodos celular para evaluar marcadores de senescencia.

Técnicas para inducir la senescencia celular y cuantificar

Los macrófagos asociados a tumores (TAM) similares a M2 se asocian con progresión tumoral y mal pronóstico en el cáncer. Este protocolo sirve como una guía detallada para diferenciar y polarizar de manera reproducible las células similares a los monocitos THP-1 en macrófagos similares a M2 en un plazo de 14 días. Este modelo es la base para investigar los efectos antiinflamatorios de la TAM dentro del microambiente tumoral.

Diferenciación y polarización de macrófagos en un fenotipo similar a M2 utilizando una línea celular de leucemia THP-1 similar a monocitos humanos

Aquí presentamos un método basado en citometría de flujo para la visualización y cuantificación de múltiples marcadores asociados a la senescencia en células individuales.

Detección simultánea basada en imágenes y citometría de flujo de múltiples marcadores de senescencia fluorescente en células cancerosas senescentes inducidas por terapia

Este protocolo presenta microscopía confocal de luz reflejada para la detección objetiva y unicelular de la actividad beta-galactosidasa asociada a la senescencia (SA-β-gal) en la fracción vascular estromal aislada del tejido adiposo humano. El método es compatible con inmunocitoquímica, incorpora controles de pH para la evaluación cuantitativa y, además, ofrece una alternativa más sensible y menos subjetiva a la tinción convencional de SA-β-gal.

Detección de senescencia usando luz reflejada en la fracción vascular estromal adiposa

Este método estudia cómo los fibroblastos cutáneos senescentes afectan a los sanos. La senescencia se induce mediante la exposición a UVB, y el medio condicionado se aplica a fibroblastos normales. Ayuda a evaluar compuestos bioactivos que actúan en la comunicación alterada célula a célula en el envejecimiento cutáneo.

Novedosa combinación de antioxidantes para restaurar una comunicación intercelular saludable en un modelo in vitro utilizando un medio condicionado de células senescentes

Comprender el comportamiento maligno del cáncer requiere crear modelos precisos de cómo las células tumorales interactúan con los componentes del microambiente tumoral, como los macrófagos. En este trabajo describimos dos métodos para estudiar la interacción de las células del glioblastoma con los macrófagos asociados al tumor y la microglía, donde se evalúa el efecto sobre la invasión del glioblastoma.

Cocultivo Los ensayos para Estudiar macrófagos y microglia Estimulación de Glioblastoma Invasion

Aquí, presentamos un protocolo para matrices de anticuerpo para identificar alteraciones en las vías de señalización en distintos modelos celulares. Estos cambios, causados por drogas/hipoxia/ultra-violet luz radiación, o sobreexpresión/downregulation/nocauts, son importantes para varios modelos de la enfermedad y pueden indicar si una terapia eficaz o puede identificar mecanismos de drogas resistencia.

Evaluación de la resistencia a inhibidores de la cinasa de tirosina por un interrogatorio de vías de transducción de señal por Arrays de anticuerpos

Este artículo representa un ensayo in vitro útil para evaluar la capacidad del medio acondicionado de las células tumorales para atraer macrófagos.

Ensayo In Vitro para estudiar la interacción tumor-macrofago

Este estudio describe un método para aislar vesículas extracelulares enriquecidas con exosomas que transportan factores estimulantes de colonias de macrófagos de granulocitos inmunoestimulantes a partir de células madre embrionarias.

Aislamiento de vesículas extracelulares enriquecidas con exosomas que transportan factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos a partir de células madre embrionarias

En este estudio se tomó la imagen de la actividad fagocítica de macrófagos contra las células cancerosas, específicamente las células del carcinoma mamario del ratón 4T1. El modelo de cocultivo de células vivas se estableció y observó utilizando una combinación de microscopía de contraste de interferencia fluorescente y diferencial. Esta evaluación se realizó utilizando un software de imágenes para desarrollar vídeo de lapso de tiempo multipunto.

Time-Lapse 2D Imaging of Phagocytic Activity in M1 Macrophage-4T1 Mouse Mammary Carcinoma Cells in Co-cultures

Aprende cómo los inhibidores de tirosina quinasa inducen senescencia en hepatocitos Hep G2 y activan el fenotipo secretor asociado a senescencia para polarizar macrófagos M2. Este método revela mecanismos de hepatotoxicidad inducida por fármacos.

La senescencia inducida por fármacos en las células hepáticas promueve la polarización de los macrófagos M2: implicaciones para la hepatotoxicidad asociada a los inhibidores de la tirosina quinasa (Video) | JoVE Journal

La senescencia inducida por fármacos en las células hepáticas promueve la polarización de los macrófagos M2: implicaciones para la hepatotoxicidad asociada a los inhibidores de la tirosina quinasa

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