Name: Mejora de la tecnología de vesículas extracelulares con receptor de antígeno quimérico (CAR-EV): el futuro de la terapia contra el cáncer (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T13:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: Descubre el desarrollo de vesículas extracelulares con receptor de antígeno quimérico (CAR-EV) para terapia contra el cáncer. Este método mejora la eficiencia de los tratamientos dirigidos mediante cromatografía de intercambio iónico y análisis de nanopartículas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Park, J. H., Geyer, M. B., Brentjens, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD19-targeted+CAR+T-cell+therapeutics+for+hematologic+malignancies%3A+Interpreting+clinical+outcomes+to+date%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">CD19-targeted CAR T-cell therapeutics for hematologic malignancies: Interpreting clinical outcomes to date.</a> Blood. 127 (26), 3312-3320 (2016).</li>
<li>Jain, M. D., Smith, M., Shah, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+I+treat+refractory+CRS+and+ICANS+following+CAR+T-cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">How I treat refractory CRS and ICANS following CAR T-cell therapy.</a> Blood. 141 (20), 2430-2442 (2023).</li>
<li>Tang, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+potential+of+CAR-T+cell-derived+exosomes%3A+A+cell-free+modality+for+targeted+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Therapeutic potential of CAR-T cell-derived exosomes: A cell-free modality for targeted cancer therapy.</a> Oncotarget. 6 (42), 44179-44190 (2015).</li>
<li>St-Denis-Bissonnette, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+clinically+relevant+large-scale+biomanufacturing+workflow+to+produce+natural+killer+cells+and+natural+killer+cell-derived+extracellular+vesicles+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22JEV%22%5BJournal%5D)">A clinically relevant large-scale biomanufacturing workflow to produce natural killer cells and natural killer cell-derived extracellular vesicles for cancer immunotherapy.</a> JEV. 12 (12), e12387(2023).</li>
<li>Jiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+enhances+the+production+and+antitumor+effect+of+exosomes+derived+from+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Hypoxia enhances the production and antitumor effect of exosomes derived from natural killer cells.</a> Ann Transl Med. 9 (6), 473-473 (2021).</li>
<li>Decot, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural-killer+cell+amplification+for+adoptive+leukemia+relapse+immunotherapy%3Acomparison+of+three+cytokines+IL-2%2C+IL-15%2C+or+IL-7+and+impact+on+NKG2D%2C+KIR2DL1%2C+and+KIR2DL2+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Hematol%22%5BJournal%5D)">Natural-killer cell amplification for adoptive leukemia relapse immunotherapy:comparison of three cytokines IL-2, IL-15, or IL-7 and impact on NKG2D, KIR2DL1, and KIR2DL2 expression.</a> Exp Hematol. 38 (5), 351-362 (2010).</li>
<li>Kim, I. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+enhancement+of+exosomes+derived+from+NK+cells+by+IL-15+and+IL-21+synergy+against+hepatocellular+carcinoma+cells%3A+The+cytotoxicity+and+apoptosis+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Heliyon%22%5BJournal%5D)">Functional enhancement of exosomes derived from NK cells by IL-15 and IL-21 synergy against hepatocellular carcinoma cells: The cytotoxicity and apoptosis in vitro study.</a> Heliyon. 9 (6), e16962-e16962 (2023).</li>
<li>Mehdiani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+innovative+method+for+exosome+quantification+and+size+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An innovative method for exosome quantification and size measurement.</a> J Vis Exp. (95), e50974(2015).</li>
<li>Bachurski, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicle+measurements+with+nanoparticle+tracking+analysis-an+accuracy+and+repeatability+comparison+between+NanoSight+NS300+and+ZetaView%5BTitle%5D)+AND+%22JEV%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicle measurements with nanoparticle tracking analysis-an accuracy and repeatability comparison between NanoSight NS300 and ZetaView.</a> JEV. 8 (1), 1596016(2019).</li>
<li>Khanabdali, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+throughput+surface+epitope+immunoaffinity+isolation+of+extracellular+vesicles+and+downstream+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Methods+Protoc%22%5BJournal%5D)">High throughput surface epitope immunoaffinity isolation of extracellular vesicles and downstream analysis.</a> Biol Methods Protoc. 9 (1), bpae032(2024).</li>
<li>Salomon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+detection+of+ovarian+cancer%3A+An+accurate+high-throughput+extracellular+vesicle+test%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Early detection of ovarian cancer: An accurate high-throughput extracellular vesicle test.</a> J Clin Oncol. 43 (16_suppl), 5582-5582 (2025).</li>
<li>Fu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+exosomes+derived+from+effector+CAR-T+cells+have+potent+antitumour+effects+and+low+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">CAR exosomes derived from effector CAR-T cells have potent antitumour effects and low toxicity.</a> Nat Commun. 10 (1), 1-12 (2019).</li>
<li>Zheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhalable+CAR-T+cell-derived+exosomes+as+paclitaxel+carriers+for+treating+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Inhalable CAR-T cell-derived exosomes as paclitaxel carriers for treating lung cancer.</a> J Transl Med. 21 (1), 383(2023).</li>
<li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+exosome+for+drug+delivery%3A+Recent+development+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Nanomed%22%5BJournal%5D)">Engineered exosome for drug delivery: Recent development and clinical applications.</a> Int J Nanomed. 18, 7923-7940 (2023).</li>
<li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulation+and+assessment+of+therapeutic+cargo+in+engineered+exosomes%3Aa+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Encapsulation and assessment of therapeutic cargo in engineered exosomes:a systematic review.</a> J Nanobiotechnology. 22 (1), 18(2024).</li>
<li>Basyoni, A. E., Atta, A., Salem, M. M., Mohamed, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harnessing+exosomes+for+targeted+drug+delivery+systems+to+combat+brain+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+Int%22%5BJournal%5D)">Harnessing exosomes for targeted drug delivery systems to combat brain cancer.</a> Cancer Cell Int. 25 (1), 150(2025).</li>
<li>Coughlan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome+isolation+by+ultracentrifugation+and+precipitation+and+techniques+for+downstream+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Exosome isolation by ultracentrifugation and precipitation and techniques for downstream analyses.</a> Curr Protoc Cell Biol. 88 (1), e110(2020).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+separation+and+purification+of+exosomes+using+ion-exchange+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Large-scale separation and purification of exosomes using ion-exchange chromatography.</a> Biomed Res Ther. 11 (4), 6348-6356 (2024).</li>
<li>Fernandes, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+isolation+of+extracellular+vesicles+from+cell+culture+supernatant+using+immuno-affinity+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Sep+Purif+Technol%22%5BJournal%5D)">Targeted isolation of extracellular vesicles from cell culture supernatant using immuno-affinity chromatography.</a> Sep Purif Technol. 358 (Part A), 130312-130312 (2024).</li>
<li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-EGFR+ScFv+functionalized+exosomes+delivering+LPCAT1+specific+siRNAs+for+inhibition+of+lung+cancer+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22JNB%22%5BJournal%5D)">Anti-EGFR ScFv functionalized exosomes delivering LPCAT1 specific siRNAs for inhibition of lung cancer brain metastases.</a> JNB. 22 (1), 159(2024).</li>
<li>Dobersberger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+engineering+strategy+to+target+activated+EGFR+with+CAR+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Methods%22%5BJournal%5D)">An engineering strategy to target activated EGFR with CAR T cells.</a> Cell Rep Methods. 4 (4), 100728-100728 (2024).</li>
<li>Shi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bispecific+CAR+T+cell+therapy+targeting+BCMA+and+CD19+in+relapsed%2Frefractory+multiple+myeloma%3Aa+phase+I%2FII+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Bispecific CAR T cell therapy targeting BCMA and CD19 in relapsed/refractory multiple myeloma:a phase I/II trial.</a> Nat Commun. 15 (1), 3371(2024).</li>
<li>Roddie, G., Amrolia, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+targeting+CAR-T+cells+for+B-cell+acute+lymphoblastic+leukaemia+and+B-cell+non-Hodgkin+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Adv%22%5BJournal%5D)">Dual targeting CAR-T cells for B-cell acute lymphoblastic leukaemia and B-cell non-Hodgkin lymphoma.</a> Blood Adv. 9 (4), 704-721 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td><fuerte>Materiales</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x solución salina tamponada con fosfato (PBS), pH 7,4</td><td>Gibco</td><td>10010049</td><td>Enriquecimiento de vehículos eléctricos</td></tr><tr><td>1% de dodecil sulfato de sodio (SDS)</td><td>Sigma</td><td>L3771-100G</td><td>Disuelva 1 g de polvo SDS en 10 ml de agua ultrapura</td></tr><tr><td>1x solución salina tamponada con trís con Tween-20 (TBST)</td><td>Productos químicos Thermo Scientific</td><td>J77500. K2</td><td>Diluir con agua ultrapura para hacer una solución 1x (alternativamente, preparar una solución de polisorbato-20/Tween-20 al 0,1% en solución salina tamponada con tris 1x)</td></tr><tr><td>Microplaca de poliestireno tratada con TC de fondo plano transparente de 96 pocillos, estéril</td><td>Corning</td><td>3595</td><td>Ensayo funcional In vitro</td></tr><tr><td>Bolt Bis-Tris Plus Mini Geles Proteicos, 4-12%, 1,0 mm, formato WedgeWell</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>Caracterización de celdas/EV</td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647-100G</td><td>Caracterización de celdas/EV</td></tr><tr><td>Anticuerpo de calnexina</td><td>Señalización celular</td><td>2433S</td><td>Caracterización de celdas/EV</td></tr><tr><td>Células CAR-NK/T</td><td>ProMab Biotecnologías</td><td>Varía</td><td>El dominio de unión al ligando extracelular CAR depende del objetivo preferido en las células receptoras</td></tr><tr><td>CellTiter 96 Ensayo de proliferación celular de una solución (MTS)</td><td>Promega</td><td>G3580</td><td>Ensayo funcional In vitro</td></tr><tr><td>Cóctel completo de inhibidores de proteasa sin EDTA</td><td>Roche</td><td>11836170001</td><td>Lisis celular</td></tr><tr><td>Reactivo de detección de Western blot ECL</td><td>Amersham</td><td>RPN2232</td><td>Caracterización de celdas/EV</td></tr><tr><td>Tampón de elución</td><td>INOVIQ</td><td></td><td>Enriquecimiento/aislamiento de vehículos eléctricos</td></tr><tr><td>Tampón de equilibrio</td><td>INOVIQ</td><td></td><td>Enriquecimiento/aislamiento de vehículos eléctricos</td></tr><tr><td>Columna EXO-ACE IEX</td><td>INOVIQ</td><td></td><td>Enriquecimiento/aislamiento de EV para ensayo funcional aguas abajo ID de patente AU2024901931</td></tr><tr><td>Perlas de captura de panexosomas EXO-NET</td><td>INOVIQ</td><td></td><td>Aislamiento de EV para la caracterización posterior ID de patente WO/2014/011673</td></tr><tr><td>Anticuerpo Granzima B</td><td>Señalización celular</td><td>4275</td><td>Caracterización de celdas/EV</td></tr><tr><td>IL-2 IS humana, grado premium</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-097-744</td><td>Cultivo libre de xenocélulas T/NK</td></tr><tr><td>iBlot 2 Pilas de transferencia, PVDF</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>Caracterización de celdas/EV</td></tr><tr><td>ImmunoCult-XF (cGMP)</td><td>Tecnologías de células madre</td><td>100-0956</td><td>Cultivo libre de xenocélulas T/NK</td></tr><tr><td>K-562</td><td>ATCC</td><td>CCL-243</td><td>Ensayo funcional In vitro</td></tr><tr><td>MCF-7</td><td>ATCC</td><td>HTB-22</td><td>Ensayo funcional In vitro</td></tr><tr><td>Unidad de filtro de jeringa Millex-GP, 0.22 &micro; m</td><td>Merck Millipore</td><td>SLGPR33RS</td><td>Filtración terminal</td></tr><tr><td>Búfer de regeneración</td><td>INOVIQ</td><td></td><td>Enriquecimiento/aislamiento de vehículos eléctricos</td></tr><tr><td>Tampón RIPA (10X)</td><td>Tecnología de señalización celular</td><td>9806</td><td>Lisis celular</td></tr><tr><td>Solución de azul de tripano, 0,4%</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>Evaluación de la viabilidad y densidad celular</td></tr><tr><td>Tampón de lavado</td><td>INOVIQ</td><td></td><td>Enriquecimiento/aislamiento de vehículos eléctricos</td></tr><tr><td><fuerte>Equipo</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Contador de células automatizado</td><td>Invitrogen</td><td>Condesa II FL</td><td>Evaluación de la viabilidad y densidad celular</td></tr><tr><td>Instrumento de extracción automatizado de sobremesa</td><td>Invitrogen</td><td>Sistema KingFisher Apex</td><td>Sistema de purificación automatizado de alto rendimiento Consulte el enlace para obtener detalles del protocolo: https://www.inoviq.com/site/technology/resources</td></tr><tr><td>Microscopio de fluorescencia</td><td>Zeiss</td><td>Axio Observador 7</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Análisis de seguimiento de nanopartículas (NTA)</td><td>Particle Metrix GmbH</td><td>Zetaview PMX-130</td><td>Análisis de partículas</td></tr><tr><td>Lector de placas</td><td>BMG Labtech</td><td>SPECTROstar Nano</td><td>Ensayo funcional In vitro</td></tr><tr><td>Centrífuga refrigerada de sobremesa</td><td>Beckman Coulter</td><td>Avanti J-15R</td><td>Cultivo celular y Procesamiento de enriquecimiento EV</td></tr><tr><td>Tanque de gel SDS-PAGE mini</td><td>Invitrogen</td><td>Referencia A25977</td><td>Caracterización de celdas/EV</td></tr><tr><td>Sistema de transferencia Western blot</td><td>Invitrogen</td><td>iBlot 2</td><td>Caracterización de celdas/EV</td></tr></tbody></table>

mejora de la tecnología de vesículas extracelulares con receptor de antígeno quimérico (car-ev): el futuro de la terapia contra el cáncer

Enhancing Chimeric Antigen Receptor-Extracellular Vesicles (CAR-EV) Technology: The Future of Cancer Therapy

En la Figura 1 se ilustra un flujo de trabajo típico de cultivo de células CAR T/NK, seguido del aislamiento, caracterización y utilización de EV en un ensayo funcional. Se recolecta CM del cultivo de células CAR T/NK, antes del enriquecimiento de EV y la caracterización posterior (incluido el análisis de seguimiento de nanopartículas) y la actividad funcional se evalúa mediante un ensayo MTS de placa de múltiples pocillos (Figura 1).
Las células CAR marcadas con GFP se pueden visualizar mediante microscopía para confirmar la expresión de la construcción CAR en cultivo. La microscopía debe realizarse como un paso de rutina antes y durante la recolección de la MC para garantizar una eficiencia de transducción suficiente. Es importante superponer los canales de campo claro y GFP, para capturar la autofluorescencia potencial al evaluar la eficiencia. Cabe destacar que las células T poseen una tendencia a agruparse naturalmente (observada de manera similar en las células NK; datos no mostrados), y la fluorescencia se puede observar claramente cuando las células exhiben un fenotipo agrupado (Figura 2).
Después del enriquecimiento de EV, los EV se pueden caracterizar mediante NTA e inmunotransferencia occidental. Usando NTA, el análisis del rendimiento de partículas puede confirmar un aumento de la concentración en los EV aislados, en comparación con CM (Figura 3A). Los datos de Western blot confirman además la expresión del marcador citolítico granzima B en células CAR y EV, y la ausencia de calnexina en estas últimas, lo que confirma la ausencia de material celular en las preparaciones. HEK293T células se incluyen como control negativo para CAR (Figura 3B).
El análisis de la funcionalidad de EV se realizó mediante un ensayo MTS para determinar la viabilidad/capacidad de proliferación celular. El efecto de los CAR-EV dirigidos a EGFR y HER2 en la viabilidad y el crecimiento de las células del cáncer de mama MCF-7 y el cáncer de sangre K562 se determina mediante la medición del reactivo colorimétrico MTS a una absorbancia de 490 nm (después de la eliminación de la señal de fondo). En este ejemplo, el EGFR dirigido a los CAR-EV redujo la viabilidad de las células MCF-7 y K562 en un 70% y 40%, respectivamente. El HER-2 dirigido a los CAR-EV redujo el MCF-7 en ~10% (según lo determinado a través de la prueba t de Student). Teniendo en cuenta el diseño experimental, el empleo de una prueba no paramétrica (por ejemplo, Mann-Whitney U) puede ofrecer información más sólida en estudios posteriores (Figura 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68726/68726fig1.jpg"> 
Figura 1: Generación, enriquecimiento, caracterización de CAR-EV y lectura funcional. Diagrama esquemático que representa un flujo de trabajo típico de generación, producción y caracterización de EV de muestras CAR-EV enriquecidas antes del análisis de funcionalidad. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68726/68726fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68726/68726fig2.jpg"> 
Figura 2: Análisis microscópico representativo mediante la confirmación de la expresión de GFP en células CAR-T dirigidas a HER2. Las imágenes se capturaron mediante microscopía de fluorescencia, utilizando un objetivo de 20x. La barra de escala blanca representa una longitud de 50 μm. Las células T tienen una tendencia natural a crecer en grupos antes de desprenderse en células individuales. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68726/68726fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68726/68726fig3.jpg"> 
Figura 3: Caracterización de células CAR y EV. (A) Análisis de partículas de nanoseguimiento de CAR-T CM y EV enriquecidos. La concentración de partículas de los EV fue de 1,6 a 2,1 veces mayor que la de CM, mientras que la concentración de proteínas se redujo en un &gt;80%. Las diferencias estadísticamente significativas se probaron con ANOVA de una vía y prueba de comparación múltiple de Tukey; p≤ 0,001, **** p≤ 0,0001. (B) El análisis de Western blot de células T transducidas y CAR-EV enriquecidos confirmó la presencia de granzima B citolítica tanto en células CAR como en EV, mientras que se observó una ausencia en HEK293T células sin CAR. No se detectó calnexina en CAR-EV, lo que indica baja contaminación por partículas de retículo endoplásmico. Carga de proteína por carril = 5 μg. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68726/68726fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68726/68726fig4.jpg"> 
Figura 4: Efecto de los CAR-EV sobre la viabilidad de las células diana (células de cáncer de mama MCF-7 y línea celular de leucemia mielógena crónica K562). Las células diana se trataron con una dosis única de 4,5 x 105 y 2,5 x 105 EV / célula (EGFR o HER2 CAR, respectivamente) o control (tampón EV) durante un máximo de 3 días. (A) Células CAR-EV dirigidas a EGFR. (B) CAR-EV dirigidos a HER2. Se observó una disminución en la lectura de absorbancia (indicativa de la eficacia del tratamiento) en ambas líneas celulares. Los datos representan la absorbancia media ± DE (n = 3), analizada mediante una prueba t de Student no apareada de dos colas, con valores de p que indican significación estadística; ** pág≤ 0,01. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68726/68726fig4large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Mejora de la tecnología de vesículas extracelulares con receptor de antígeno quimérico (CAR-EV): el futuro de la terapia contra el cáncer

CAR cell therapies have significantly advanced personalized treatment for several hematological malignancies. Currently, seven CAR-&#8239;cell products ...

enhancing-chimeric-antigen-receptor-extracellular-vesicles-car-ev

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este video muestra una técnica para fabricar células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) ex vivo. Las células T humanas se incuban con perlas magnéticas recubiertas con anticuerpos anti-CD3 y anti-CD28, junto con un medio suplementado con interleucina-2 (IL-2), lo que conduce a la activación y proliferación de las células T. Se introducen vectores lentivirales transgénicos, lo que permite que el ARN transgénico se integre en el genoma del huésped y exprese el transgén. Esto da como...

Una técnica ex vivo para fabricar linfocitos T receptores de antígenos quiméricos

Este video muestra una técnica para la generación ex vivo de células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) específico de antígeno tumoral. Los vectores retrovirales portadores de ARN transgénico se mezclan con células de bazo en un medio suplementado con interleucina-2 para promover la supervivencia y proliferación de las células T. A continuación, la mezcla se transfiere a una placa recubierta con fragmentos de fibronectina humana recombinante y se centrifuga para facilitar la fusión del...

Una técnica ex vivo para generar células T receptoras de antígenos quiméricos específicos de tumores

Los efectos linfodepletorios e inmunomoduladores de la quimioterapia y la radiación estándar pueden aprovecharse para mejorar la eficacia antitumoral de la inmunoterapia con células T. Describimos un método para generar células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) específicas de EGFRvIII y administrarlas en el contexto del tratamiento estándar del glioblastoma.

Generación de células T CAR para realizar la terapia adoptiva en el contexto de Glioblastoma estándar de cuidado

Describimos un sistema de ensayo cuantitativo de citolisis in vitro en tiempo real para evaluar la potencia de las células T del receptor de antígeno quimérico dirigidas a células tumorales líquidas y sólidas. Este protocolo se puede ampliar para evaluar otras células efector inmune, así como tratamientos combinados.

Un ensayo de potencia en tiempo real para células T receptores de antígeno quimérico dirigido a células cancerosas sólidas y hematológicas

Aquí, describimos un método de cultivo in vitro de co para recurrentemente desafío orientada a tumor las células T, que permite el análisis fenotípico y funcional de la actividad de las células T antitumorales.

En Vitro Tumor celular Rechallenge de evaluación predictiva de antígeno quimérico del Receptor de la célula T función antitumoral

Describimos un enfoque para generar de forma fiable células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) y probar su diferenciación y función in vitro e in vivo.

Fabricación de células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) para inmunoterapia adoptiva

Este protocolo agiliza la producción de vectores retrovirales y la transducción de células T murinas, lo que facilita la generación eficiente de células CAR-T de ratón.

Generación eficiente de células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) murino

Este protocolo describe un procedimiento detallado para generar células T con receptor de antígeno quimérico transitorio (CAR) utilizando ARNm no integrador para la inmunoterapia contra el cáncer y proporciona métodos confiables para evaluar las células CAR-T y su función citotóxica.

Un enfoque no viral para generar células T receptoras de antígenos quiméricos transitorios mediante ARNm para la inmunoterapia contra el cáncer

Este protocolo describe los pasos esenciales para el cultivo de células T primarias, incluyendo su aislamiento, activación, expansión y transfección transitoria mediante electroporación de ARNm. Además, se propone un flujo de trabajo y un panel de anticuerpos para el análisis citométrico de flujo del fenotipo, marcadores de activación, viabilidad y expresión del receptor quimérico de antígenos (CAR).

Aislamiento, cultivo y transfección transitoria de células T humanas primarias para generar células T del Receptor de Antígenos Quiméricos (CAR)

El advenimiento de la recombinasa específica de sitio (SSR) la tecnología y el sistema Cre / lox ha dado lugar a numerosos avances en biología molecular, y ha demostrado ser una valiosa herramienta para la evaluación de la función génica en animales transgénicos. Esta entrevista analiza el mecanismo de recombinación sitio específico por ciclación recombinasa (CRE) y cómo el uso de esta enzima ha llevado al desarrollo de mutagénesis condicional, la cual tiene ventajas significativas sobre las...

Principios de la recombinasa específica de sitio (RSS) Tecnología

Descubre el desarrollo de vesículas extracelulares con receptor de antígeno quimérico (CAR-EV) para terapia contra el cáncer. Este método mejora la eficiencia de los tratamientos dirigidos mediante cromatografía de intercambio iónico y análisis de nanopartículas.

Mejora de la tecnología de vesículas extracelulares con receptor de antígeno quimérico (CAR-EV): el futuro de la terapia contra el cáncer (Video) | JoVE Journal

Mejora de la tecnología de vesículas extracelulares con receptor de antígeno quimérico (CAR-EV): el futuro de la terapia contra el cáncer

Explorar más videos