Name: Preparación de distribuciones de cromosomas meióticos de ovocitos de ratón para la evaluación de la sinapsis y la recombinación (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-18T15:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: Aprende a preparar distribuciones de cromosomas meióticos de ovocitos de ratón para evaluar sinapsis y recombinación. Este método permite analizar la meiosis con precisión en investigación reproductiva.

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<table><tbody><tr><td>0,45 & mu; Filtro de jeringuilla m</td><td>Millipore Sigma</td><td>SLHAR33SB</td><td>para fabricar una pipeta de operación bucal</td></tr><tr><td>0,5 M EDTA, pH 8,0</td><td>Corning</td><td>46-034-CI&nbsp;</td><td>para HEB</td></tr><tr><td>Jeringuilla estéril de 1 mL con aguja calibre 25, 16 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-125&nbsp;</td><td>para la ruptura de ovarios</td></tr><tr><td>Placa de Petri de 100 x 15 mm</td><td>VWR</td><td>25384-302&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas Pasteur desechables de vidrio borosilicato de 14,6 cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20B&nbsp;</td><td>para fabricar una pipeta de operación bucal</td></tr><tr><td>Placa de Petri de 35 x 10 mm</td><td>Corning</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>Pines de acero inoxidable #3 de 40 mm x 0,45 mm para entomología</td><td>Amazon</td><td>B0CSSPW5S7</td><td>para inmovilizar ratones fetales para disección</td></tr><tr><td>Ácido acético, glaciar</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38-212</td><td>para el fijador de Carnoy</td></tr><tr><td>Conjuntos de tubos aspiradores para microcapilares calibrados</td><td>Millipore Sigma</td><td>A5177-5EA</td><td>para fabricar una pipeta de operación bucal</td></tr><tr><td>Reloj de B.P.I.</td><td>NDS Technologies&nbsp;</td><td>1580-00</td><td>Alternativamente, utiliza una placa embrionaria de 30 mm de diámetro x 12 mm de profundidad (Electron Microscopy Sciences SKU: 70543-30)</td></tr><tr><td>Ácido bórico</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP168-1</td><td>para ajustar el pH de HEB, PFA</td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Millipore Sigma</td><td>A7906-100G</td><td>para ADB</td></tr><tr><td>Tanque de CO2</td><td></td><td></td><td>para incubadora</td></tr><tr><td>Portaobjetos de microscopio de Corning</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS294875X25</td><td>L x An 75 mm x 25 mm, esmerilado en un lado</td></tr><tr><td>Portaobjetos de microscopio Corning, esmerilado en un lado y en un extremo</td><td>VWR</td><td>294875X25</td><td></td></tr><tr><td>Cubre el cristal rectangular. 60 x 24 mm, #1.5</td><td>VWR</td><td>48393-251</td><td></td></tr><tr><td>Plato Diseccionador</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>70540</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de disección</td><td></td><td></td><td>Cualquier modelo estándar</td></tr><tr><td>Tijeras de disección, punta afilada, 4,5"</td><td>VWR</td><td>82027-578</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas extra finas y afiladas</td><td>VWR</td><td>76548-836</td><td></td></tr><tr><td>Giemsa Stain</td><td>Millipore Sigma</td><td>GS500-500</td><td>para teñir los diseminados de los chiasmatas</td></tr><tr><td>Pluma PAP de barrera hidrofóbica ImmEdge</td><td>Laboratorios Vector</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora</td><td></td><td></td><td>Cualquier modelo estándar con tecnología de CO2 y chaqueta de agua</td></tr><tr><td>Estación de trabajo FIV</td><td>K-Systems</td><td></td><td>Cualquier modelo con una mesa calefactada</td></tr><tr><td>Solución Kodak Photo-Flo 200</td><td>BH Photo & Vídeo</td><td>1464510</td><td>para lavados deslizantes</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412-4</td><td>para el fijador de Carnoy</td></tr><tr><td>Tarro de tinción Coplin de MP Biomedicals</td><td>Fisher Scientific</td><td>ICN17006201</td><td></td></tr><tr><td>Suero normal para cabra</td><td>Gibco</td><td>16210-072</td><td>para ADB</td></tr><tr><td>Paraformaldehído, grado electromagnético, prill purificado</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>19200</td><td></td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td>for&nbsp; Correderas de montaje para extensiones de chiasmata</td></tr><tr><td>Montaje antifade de vidrio ProLong con tinte NucBlue</td><td>Termo Científica</td><td>P36985</td><td>para montar portaobjetos inmunotintidos</td></tr><tr><td>Tubo de silicona, diámetro interior: 0,125", diámetro exterior: 0,25"</td><td>VWR</td><td>89068-474</td><td>para fabricar una pipeta de operación bucal</td></tr><tr><td>Dihidrato de citrato de sodio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S279-500</td><td>para HEB, solución hipotónica</td></tr><tr><td>Sistema de tinción por deslizamiento StainTray</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>71396-B</td><td>Para usarse como cámara humidificada. Hay que usar la tapa negra para la tinción por inmunofluorescencia. Alternativamente, puede forrar el fondo de una caja opaca de deslizantes o cubiertos con toallas de papel húmedas para usarlas como cámara humidificada...</td></tr><tr><td>Consejos para stripper - 100</td><td>Cooper Surgical</td><td>MXL3-100</td><td>para pipeta de operación bucal</td></tr><tr><td>Puntas para stripper - 150</td><td>Cooper Surgical</td><td>MXL3-150</td><td>para pipeta de operación bucal</td></tr><tr><td>Sacarosa</td><td>Millipore Sigma</td><td>S-8501</td><td>para HEB, solución hipotónica de sacarosa</td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP152-5</td><td>para HEB</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-100&nbsp;</td><td>para PFA, ADB y Triton-PBS</td></tr><tr><td>Tarro de tinción Coplin de United Scientific</td><td>Fisher Scientific</td><td>S17495A</td><td>Plástico blanco opaco para lavados y portaobjetos de bloqueo tras la adición de anticuerpos secundarios fotosensibles</td></tr><tr><td>Portaobjetos de concavidad de vidrio de United Scientific</td><td>Fisher Scientific</td><td>S139533</td><td>1,3 mm de grosor, 2 pozos</td></tr><tr><td>Tijeras Vannas Microdissection 5mm rectas</td><td>VWR</td><td>76457-358</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Axio Imager.Z2, Colibri 7</td><td>Carl Zeiss</td><td>000000-2624-307</td><td></td></tr><tr><td>Zen Blue 3.11 Software</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td>Software de adquisición y análisis de imágenes</td></tr><tr><td>Anticuerpos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>¿Alexa Fluor 488 AffiniPure F(ab')? Fragmento Goat Anti-Mouse IgG, fragmento específico de Fc</td><td>Jackson InmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>115-546-071</td><td>Dilución usada 1:1.000</td></tr><tr><td>¿Alexa Fluor 488 AffiniPure F(ab')? Fragmento Goat Anti-Rabbit IgG, fragmento específico de Fc</td><td>Jackson InmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>111-546-046</td><td>Dilución usada 1:1.000</td></tr><tr><td>¿Alexa Fluor 647 AffiniPure F(ab')? Fragmento de cabra anti-humano IgG, Fc&gamma; Específico de fragmentos</td><td>Jackson InmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>109-606-170</td><td>Dilución usada 1:1.000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG, Fc fragmento especificado</td><td>Jackson InmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>106-605-008</td><td>Dilución usada 1:1.000</td></tr><tr><td>Cavillo anti-MLH3 pAb</td><td></td><td></td><td>Hecho a medida con Thermo-Fisher, con dilución 1:500</td></tr><tr><td>Cavillo anti-SYCP1 pAb</td><td></td><td></td><td>de Christer H&ouml; &ouml; g (Kouznetsova et al. 2005), utilizó dilución 1:200</td></tr><tr><td>Proteína anti-centrómero humana pAb</td><td>Antibodies Inc.</td><td>15-234</td><td>Dilución usada 1:1.000</td></tr><tr><td>Mouse anti-MLH1 mAb</td><td>BD Biociencias</td><td>550838</td><td>Dilución 1:100 usada</td></tr><tr><td>Anti-SYCP3 de ratón mAb</td><td>Abcam</td><td>ab97672</td><td>Dilución usada 1:1.000</td></tr><tr><td>Rabbit anti-HORMAD1 pAb</td><td>Proteintech</td><td>13917-1-AP</td><td>Dilución usada 1:500</td></tr><tr><td>Rabbit anti-MSH4 pAb</td><td>Abclonal</td><td>A8556</td><td>Dilución 1:100 usada</td></tr><tr><td>Rabbit anti-RAD51 pAb</td><td>Millipore</td><td>PC130</td><td>Dilución usada 1:500</td></tr><tr><td>Rabbit anti-SYCP3 pAb</td><td>Abcam</td><td>ab15093</td><td>Dilución usada 1:1.000</td></tr><tr><td>¿Rhodamine Red-X (RRX) AffiniPure F(ab')? Fragmento Goat Anti-Mouse IgG, fragmento específico de Fc</td><td>Jackson InmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>115-296-071</td><td>Dilución usada 1:1.000</td></tr><tr><td>¿Rhodamine Red-X (RRX) AffiniPure F(ab')? Fragmento Goat Anti-Rabbit IgG, fragmento específico de Fc</td><td>Jackson InmunoResearch Laboratories Inc.</td><td>111-296-046</td><td>Dilución usada 1:1.000</td></tr></tbody></table>

preparación de distribuciones de cromosomas meióticos de ovocitos de ratón para la evaluación de la sinapsis y la recombinación

Preparation of Meiotic Chromosome Spreads from Mouse Oocytes for Assessment of Synapsis and Recombination

Preparación de distribuciones de cromosomas meióticos de ovocitos de ratón para la evaluación de la sinapsis y la recombinación

Three critical and interdependent processes define meiotic prophase I: homologous chromosomes must pair together, a proteinaceous structure called the ...

preparation-meiotic-chromosome-spreads-from-mouse-oocytes-for

Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Los ovocitos son propensos a la aneuploidía debido a errores en la segregación cromosómica durante la maduración meiótica. Huevos aneuploides puede causar infertilidad, abortos involuntarios o trastornos del desarrollo como el síndrome de Down. Aquí se describen los métodos para introducir los materiales de elección en los ovocitos y los métodos para estudiar la maduración meiótica y evaluar la ploidía.

La microinyección de ovocitos de ratón, Maduración y Evaluación de ploidía

A continuación, presentamos un protocolo para el agotamiento de ARNm siRNA mediada específico seguido por análisis de inmunofluorescencia para evaluar ensamblaje del huso meiótico y la organización de los ovocitos de ratón. Este protocolo es adecuado para el agotamiento de las transcripciones in vitro y la evaluación funcional de los diferentes husillo y / o factores MTOC asociada en ovocitos.

Evaluación del huso meiótico en ovocitos de ratón por silenciamiento siRNA mediada

La meiosis es el proceso de desarrollo por que los gametos se forman a través de una sola ronda de replicación del ADN y dos series sucesivas de segregación cromosómica. Meiosis mamífera pueden examinarse mediante la utilización de una técnica para preparar extensiones de cromosoma meiótico. Aquí, demostramos un método de preparación de superficie de extensión núcleos de espermatocitos de ratón.

Preparación del cromosoma meiótico se extiende desde ratón espermatocitos

Ovogénesis en mamíferos es conocido por ser errores, particularmente debido a protooncogenes del cromosoma. Este manuscrito describe métodos de preparación de cromatina extensión de profase de ratón, metafase I y II etapas ovocitos. Estas técnicas fundamentales permiten el estudio de las proteínas de la cromatina-limite y morfología cromosómicas en mamíferos Oogénesis.

Cromatina difundir preparados para el análisis de progresión de ovocitos de ratón de profase a metafase II

Como las variantes genéticas asociadas con enfermedades humanas empiezan a ser descubierto, se está convirtiendo en cada vez más importante para el desarrollo de sistemas con los que evaluar rápidamente la importancia biológica de las variantes identificadas. Este protocolo describe los métodos para evaluar la función del gen humano durante la meiosis femenina utilizando ovocitos de ratón.

Uso de ovocitos de ratón para evaluar la función humana del Gene durante la Meiosis I

Las propagaciones de superficies nucleares son una herramienta indispensable para estudiar los eventos cromosómicos durante la meiosis. Aquí demostramos un método para preparar y visualizar cromosomas meióticos durante la profase I a partir de espermacitos de peces brabra.

Preparación de las propagaciones del cromosoma meiótico a partir de espermacitos de peces cebra

El error en la segregación cromosómica es una característica común en los ovocitos. Por lo tanto, estudiar el punto de control de ensamblaje del husillo da pistas importantes sobre los mecanismos necesarios para producir óvulos sanos. El presente protocolo describe tres ensayos complementarios para evaluar la integridad del punto de control del ensamblaje del huso en ovocitos de ratón.

Evaluación de la integridad del punto de control del ensamblaje del husillo en ovocitos de ratón

Este protocolo describe una técnica para evaluar los cambios en la vasculatura materna durante el embarazo en ratones. Utilizando métodos estereológicos, se evalúa cuantitativamente la remodelación de las arterias espirales deciduales y los resultados se confirman cualitativamente mediante inmunohistoquímica.

Evaluación del Materno remodelado vascular durante el embarazo en el útero de ratón

Aquí se presenta un protocolo para la caracterización de los ovocitos antrales ratón sobre la base de la organización nucleolar.

Aislamiento y caracterización de ratón antral Los ovocitos Sobre la base de organización de la cromatina nucleolar

Este manuscrito describe un enfoque experimental para caracterizar morfológicamente y bioquímicamente ovocitos de caballo. Específicamente, el presente trabajo ilustra cómo recolectar ovocitos de caballo inmaduros y maduros mediante recogida de óvulos guiada por ultrasonido (OPU) y cómo investigar la segregación de cromosomas, morfología de huso, acetilación de histonas globales y expresión de mRNA.

Análisis de la segregación cromosómica, acetilación de histonas y morfología de huso en ovocitos de caballo

Aprende a preparar distribuciones de cromosomas meióticos de ovocitos de ratón para evaluar sinapsis y recombinación. Este método permite analizar la meiosis con precisión en investigación reproductiva.

Preparación de distribuciones de cromosomas meióticos de ovocitos de ratón para la evaluación de la sinapsis y la recombinación

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