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DOI: 10.3791/68830-v
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Se describe una serie de métodos, que incluyen el aislamiento de lipoproteínas de baja densidad (LDL) del plasma humano, la diferenciación de células HL-60 en células similares a neutrófilos, la preparación de trampas extracelulares de neutrófilos (NET) en presencia de LDL y la estimulación de células endoteliales aórticas humanas con una mezcla de NET y LDL.
Las trampas extracelulares de neutrófilos están involucradas en una variedad de enfermedades, incluidas las enfermedades cardiovasculares. Sin embargo, los efectos sinérgicos de la formación de NET y las lipoproteínas en las células vasculares siguen sin estar claros. Utilizando este protocolo, hasta la fecha se están realizando análisis mecanicistas de cómo se inducen las respuestas inflamatorias en las células endoteliales aórticas humanas tratadas con trampas extracelulares de neutrófilos y lipoproteínas de baja densidad.
Hemos demostrado que la lipoproteína de alta densidad actúa como supresor de la formación de NET. Eso es promovido por lipoproteínas oxidadas de baja densidad, fosfolípidos oxidados y lisofosfolípidos. Para comenzar, centrifugar de 45 a 50 mililitros de sangre entera humana obtenida en un tubo de heparina a 700 G durante 15 minutos a cuatro grados centígrados.
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