Name: Disección de tejidos craneofaciales de pez cebra al teñirlos con azul alcián (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-12T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Aprende a diseccionar cartílagos craneofaciales en larvas de pez cebra de cinco días mediante tinción con azul alcián. Este protocolo permite caracterizar la morfología del paladar a nivel tisular y celular.

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<li>Rochard, L., Monica, S. D., Ling, I. T. C., Kong, Y., Roberson, S., Harland, R., Halpern, M., Liao, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+Wnt+pathway+genes+wls%2C+wnt9a%2C+wnt5b%2C+frzb+and+gpc4+in+regulating+convergentextension+during+palate+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Roles of Wnt pathway genes wls, wnt9a, wnt5b, frzb and gpc4 in regulating convergentextension during palate morphogenesis.</a> Development. 143 (14), 2541-2547 (2016).</li>
<li>Liu, S., Narumi, R., Ikeda, N., Morita, O., Tasaki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemicalinduced+craniofacial+anomalies+caused+by+disruption+of+neural+crest+cell+development+in+a+zebrafish+model%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Chemicalinduced craniofacial anomalies caused by disruption of neural crest cell development in a zebrafish model.</a> Dev Dyn. 249 (7), 794-815 (2020).</li>
<li>Zinck, N., FranzOdendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+wholemount+bone+and+cartilage+staining+requires+acidfree+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Accurate wholemount bone and cartilage staining requires acidfree conditions.</a> Anat Rec. 304 (5), 958-960 (2021).</li>
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<li>Klingenberg, C. P., Barluenga, M., Meyer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shape+analysis+of+symmetric+structures%3A+quantifying+variation+among+individuals+and+asymmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Shape analysis of symmetric structures: quantifying variation among individuals and asymmetry.</a> Evolution. 56 (10), 1909-1920 (2002).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Agarosa</td><td>Biociencia de Lonza</td><td>50004</td><td>Para recubrir placas de Petri</td></tr><tr><td>Azul alcián 8G&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Referencia A3157</td><td>Para teñir cartílagos</td></tr><tr><td>Cloruro de calcio dihidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>12022</td><td>Para hacer búferes</td></tr><tr><td>Cámara</td><td>Olimpo</td><td>DP28</td><td>Para la adquisición de imágenes</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Roche Ciencias de la Vida</td><td>10236276001</td><td>Para el etiquetado de núcleos</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Honeywell</td><td>32221</td><td>Disolvente para tinción azul alcián</td></tr><tr><td>FIJI</td><td></td><td></td><td>Versión: ImageJ 1.54f</td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>Dumont</td><td>Dumont</td><td>Para realizar disecciones</td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>MP biomédica</td><td>193996</td><td>Para realizar lavados y montar muestras&nbsp;</td></tr><tr><td>Peróxido de hidrógeno</td><td>MP biomédica</td><td>194057</td><td>Para hacer una solución de lejía</td></tr><tr><td>Cloruro de magnesio hexahidratado</td><td>ADRS Biociencias</td><td>SBRC0217</td><td>Para hacer búferes</td></tr><tr><td>Sulfato de magnesio heptahidratado</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2773</td><td>Para hacer búferes</td></tr><tr><td>MS-222 (Tricaína)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040</td><td>Para anestesiar larvas</td></tr><tr><td>Cloruro de potasio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9541</td><td>Para hacer búferes</td></tr><tr><td>Hidróxido de potasio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>484016</td><td>Para hacer búferes</td></tr><tr><td>Fosfato de potasio monobásico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0662</td><td>Para hacer búferes</td></tr><tr><td>Cloruro de sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3014</td><td>Para hacer búferes</td></tr><tr><td>Fosfato de sodio dibásico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71640</td><td>Para hacer búferes</td></tr><tr><td>Estereoscopio</td><td>Olimpo</td><td>SZX61</td><td>Para realizar disecciones</td></tr><tr><td>Interpolación-20</td><td>HIMEDIA</td><td>TC287</td><td>Detergente, utilizado para permeabilizar las células</td></tr></tbody></table>

disección de tejidos craneofaciales de pez cebra al teñirlos con azul alcián

Dissection of Zebrafish Craniofacial Tissues Upon Staining with Alcian Blue

El esqueleto craneofacial del pez cebra es completamente cartilaginoso a los 5 días después de la fertilización (dpf) y, por lo tanto, puede ser teñido con azul alcián, que es un colorante básico capaz de unirse a glicosaminoglicanos presentes abundantemente en los cartílagos23. Esto da como resultado que el cartílago se tiña de azul (Figura 1) para que pueda distinguirse de otros tejidos presentes en la larva utilizando un microscopio estereoscópico estándar disponib...

Disección de tejidos craneofaciales de pez cebra al teñirlos con azul alcián

Zebrafish, given its optical transparency, is an excellent vertebrate model to study the mechanisms by which craniofacial cartilages form in the embryo. ...

dissection-zebrafish-craniofacial-tissues-upon-staining-with-alcian

Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Este protocolo describe un procedimiento para identificar y disecar los órganos de los adultos de pez cebra.

La disección de los órganos del pez cebra adultos

Este video describe la técnica de microdisección del cerebro de un pez cebra adulto. Este método ayuda a obtener neuorosferas derivadas de todo el cerebro que se pueden estudiar más a fondo.

Disección del cerebro del pez cebra: una técnica de neurobiología de peces

Imágenes del desarrollo cerebrovascular en larvas de pez cebra se describe. También se proporcionan técnicas para facilitar la proyección de imagen 3D y modificar desarrollo cerebrovascular el uso de tratamientos químicos.

Imágenes y Reconstrucción 3D de Estructuras Embrionarias cerebrovasculares en pez cebra

La visualización de los datos experimentales se ha convertido en un elemento clave en la presentación de resultados a la comunidad científica. Generación de grabación a intervalos regulares en vivo de embriones en crecimiento contribuye a la mejor presentación y la comprensión de los procesos de desarrollo complejos. Este protocolo es una guía paso a paso para el etiquetado de células a través de la proteína fotoconversión Kaede en el pez cebra.

Visualización de Desarrollo Craneofacial en los SOX10: Kaede pez cebra transgénico Línea Usando Time-lapse microscopía confocal

Imagen confocal Time-lapse es una técnica de gran alcance útil para caracterizar el desarrollo embrionario. Aquí se describe la metodología y caracterizamos la morfogénesis craneofacial de tipo salvaje, así como PDGFRA, Smad5 y smo embriones mutantes.

Analizando Craneofacial en la morfogénesis de pez cebra Utilizando 4D Microscopía Confocal

Aquí, Describimos 3 modelos de lesión del pez cebra adulto y su uso combinado con tratamiento inmunosupresor. Proporcionamos orientación en proyección de imagen de regenerar los tejidos y en la detección de la mineralización ósea en esto.

Pez cebra adulto lesión modelos para estudiar los efectos de la prednisolona en regeneración de tejido óseo

Aquí, presentamos una serie estandarizada de protocolos para observar el surco ocular superior, una estructura recientemente identificadas, conservadas evolutivamente en el ojo vertebrado. Con larvas de pez cebra, demostramos técnicas necesarias para identificar los factores que contribuyen a la formación y cierre del surco ocular superior.

Visualización del surco Ocular Superior durante la embriogénesis de Danio rerio

Este protocolo demuestra la inmunofluorescencia secuencial y la inmunohistoquímica en criosecciones de embriones de pez cebra en etapa temprana que permiten análisis precisos de la colocación en poblaciones celulares específicas.

Inmunofluorescencia secuencial e inmunohistoquímica en embriones de pez cebra crioseccionados

Aquí, hemos utilizado la tinción de rojo alizarina para mostrar que la exposición al acetato de plomo causa un cambio de masa ósea en las larvas de pez cebra. Este método de tinción se puede adaptar a la investigación de la pérdida ósea en larvas de pez cebra inducida por otros tóxicos peligrosos.

Uso de tinción de rojo de alizarina para detectar la pérdida ósea inducida químicamente en larvas de pez cebra

Aquí, presentamos un método para alinear y crioseccionar múltiples muestras de larvas de pez cebra (Danio rerio) y recolectarlas en un solo portaobjetos para el análisis transcriptómico espacial.

Disposición espacialmente compacta de secciones de larvas de pez cebra para análisis transcriptómico espacial

Este trabajo describe un protocolo para cuantificar la forma del cartílago craneofacial utilizando software libre (tpsDigs2, MorphoJ y PAST) para medir cambios en la estructura facial en larvas de pez cebra.

Análisis morfométricos de la forma: la caja de herramientas de software de análisis para la cuantificación de formas craneofaciales en peces cebra

Aprende a diseccionar cartílagos craneofaciales en larvas de pez cebra de cinco días mediante tinción con azul alcián. Este protocolo permite caracterizar la morfología del paladar a nivel tisular y celular.

Disección de tejidos craneofaciales de pez cebra al teñirlos con azul alcián

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