Name: Ensayo de salida de fosfolípidos específicos de lipoproteínas de alta densidad (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 8 s
Description: Aprende a medir la función de la HDL mediante un ensayo de salida de fosfolípidos en plasma humano. Este método simple y rápido predice el riesgo de enfermedad cardiovascular en aplicaciones de investigación y clínica.

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<li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+efflux+capacity+is+an+independent+predictor+of+all-cause+and+cardiovascular+mortality+in+patients+with+coronary+artery+disease%3A+A+prospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Cholesterol efflux capacity is an independent predictor of all-cause and cardiovascular mortality in patients with coronary artery disease: A prospective cohort study.</a> Atherosclerosis. 249, 116-124 (2016).</li>
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<li>Schachtl-Riess, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysis+reagents%2C+cell+numbers%2C+and+calculation+method+influence+high-throughput+measurement+of+HDL-mediated+cholesterol+efflux+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Lysis reagents, cell numbers, and calculation method influence high-throughput measurement of HDL-mediated cholesterol efflux capacity.</a> J Lipid Res. 62, 100125(2021).</li>
<li>Harada, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+uptake+capacity%3A+A+new+measure+of+HDL+functionality+for+coronary+risk+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Cholesterol uptake capacity: A new measure of HDL functionality for coronary risk assessment.</a> J Appl Lab Med. 2 (2), 186-200 (2017).</li>
<li>Horiuchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+and+application+of+a+novel+cholesterol+efflux+assay+using+immobilized+liposomes+as+a+substitute+for+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Rep%22%5BJournal%5D)">Validation and application of a novel cholesterol efflux assay using immobilized liposomes as a substitute for cultured cells.</a> Biosci Rep. 38 (2), BSR20180144(2018).</li>
<li>Lorkowski, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+cell-free+fluorescent+assay+for+HDL+function%3A+Low+apolipoprotein+a1+exchange+rate+associated+with+increased+incident+cardiovascular+events%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">A novel cell-free fluorescent assay for HDL function: Low apolipoprotein a1 exchange rate associated with increased incident cardiovascular events.</a> J Appl Lab Med. 5 (3), 544-557 (2020).</li>
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<li>Borja, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDL-apoa-I+exchange%3A+Rapid+detection+and+association+with+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">HDL-apoa-I exchange: Rapid detection and association with atherosclerosis.</a> PLoS One. 8 (8), e71541(2013).</li>
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<li>Sato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free%2C+high-density+lipoprotein-specific+phospholipid+efflux+assay+predicts+incident+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Cell-free, high-density lipoprotein-specific phospholipid efflux assay predicts incident cardiovascular disease.</a> J Clin Invest. 133 (18), e165370(2023).</li>
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<li>Oram, J. F., Yokoyama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein-mediated+removal+of+cellular+cholesterol+and+phospholipids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein-mediated removal of cellular cholesterol and phospholipids.</a> J Lipid Res. 37 (12), 2473-2491 (1996).</li>
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<li>Smith, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abca1+mediates+concurrent+cholesterol+and+phospholipid+efflux+to+apolipoprotein+A-I%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Abca1 mediates concurrent cholesterol and phospholipid efflux to apolipoprotein A-I.</a> J Lipid Res. 45 (4), 635-644 (2004).</li>
<li>Ossoli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoprotein+X+causes+renal+disease+in+LCAT+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lipoprotein X causes renal disease in LCAT deficiency.</a> PLoS One. 11 (2), e0150083(2016).</li>
<li>Martínez-Beamonte, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+extra+virgin+olive+oil+high+in+bioactive+compounds+on+atherosclerosis+in+apoe-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Nutr+Food+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of extra virgin olive oil high in bioactive compounds on atherosclerosis in apoe-deficient mice.</a> Mol Nutr Food Res. , (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfocolina</td><td>Avanti Research</td><td>850345</td><td>Solución de cloroformo 14:0 PC (DMPC)</td></tr><tr><td>1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-(lisamina rodamina B sulfonilo) (sal de amonio)</td><td>Avanti Research</td><td>810150-C</td><td>Solución de cloroformo LRh-PE</td></tr><tr><td>Película adhesiva</td><td>Biosistemas Aplicados&nbsp;</td><td>4306311</td><td>MicroAmp Transparente Adhesivo Película &nbsp;</td></tr><tr><td>Cinta de teflón de alta densidad Bay Corporation 1/2 pulgada x 520</td><td>Soluciones de Pruebas Médicas</td><td>86732</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de vidrio borosilicato de 20 mm y agudos; 150 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-961-33</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugadora</td><td>Termo Científica</td><td>Serie Sorvall X Pro</td><td></td></tr><tr><td>Cloroformo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>366927</td><td>adecuado para HPLC, &ge; 99.8%</td></tr><tr><td>Polvo de colesterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8667</td><td>3&beta;-hidroxi-5-colesteno, 5-colesteno-3&beta;-ol</td></tr><tr><td>Papel de pesaje de vidriina</td><td>Cole-Palmer</td><td>&nbsp; UX-01338-02</td><td>Para manejar LC-CSH</td></tr><tr><td>Placa de incubación</td><td>USA Scientific & nbsp;</td><td>1402-9700</td><td>Placas TempPlate 96 Pozo Semifalda de 0,2 mL PCR Placas &nbsp;</td></tr><tr><td>Agente eliminador de lípidos (LRA)</td><td>Supelco</td><td>13358-U</td><td>LC-CSH</td></tr><tr><td>Placa de medición</td><td>Greiner bio-one&nbsp;</td><td>655076</td><td>Microplaca, PS, 96 pozos, F-BOTTOM (POZO DE CHIMENEA), NEGRO; FLUOTRAC, UNIÓN DE MEDICAMENTOS</td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft 365 MSO&nbsp;</td><td>Versión 2507</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de pipete MultiFlex</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-550-206</td><td>Para aspiración de sobrenadante durante lavados LC-CSH</td></tr><tr><td>Lector de placas multietiqueta</td><td>Perkin Elmer&nbsp;</td><td>1420-050</td><td>Contador multietiqueta Victor3 Wallac1420</td></tr><tr><td>Solución salina normal</td><td>Biológico de calidad &nbsp;</td><td>114-055-101</td><td>Para múltiples usos y nbsp;</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Cole-Palmer</td><td>HS23452</td><td>Para cubrir la parte superior de tubos de vidrio durante el vórtice</td></tr><tr><td>Frascos Erlenmeyer policabonados</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-041-8</td><td>Para una solución Triton-X al 10%</td></tr><tr><td>Plasma humano acumulado (derivado de la sangre) Li Heparina)</td><td>Innovative Research Inc</td><td>IPLAWBLIH</td><td>Plasma de referencia, control positivo (PC) y nbsp;</td></tr><tr><td>Surfact-Amps x 100&nbsp;</td><td>Termo Científica</td><td>28314</td><td>10% Triton X-100, diluir 10 veces con agua destilada</td></tr><tr><td>Termomezclador</td><td>Eppendorf</td><td>5382000023</td><td>Termomezclador C con termobloque de 96 pozos</td></tr><tr><td>Bloque inteligente termomezclador</td><td>Eppendorf</td><td>5306000006</td><td>SmartBlock de 96 pozos</td></tr><tr><td>Pipetas de transferencia (3 mL, Falcon)</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-9CM</td><td>Para eliminar burbujas de la parte superior del pozo</td></tr><tr><td>Mezclador de vórtice</td><td>Daigger</td><td>3030A</td><td>Soporte para el tubo de cristal en la parte superior</td></tr></tbody></table>

ensayo de salida de fosfolípidos específicos de lipoproteínas de alta densidad

High-Density Lipoprotein-Specific Phospholipid Efflux Assay

Ensayo de salida de fosfolípidos específicos de lipoproteínas de alta densidad

Plasma levels of high-density lipoprotein (HDL)-cholesterol (HDL-C) is currently a key metric for the clinical assessment of cardiovascular disease (CVD) ...

high-density-lipoprotein-specific-phospholipid-efflux-assay

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

El ensayo de colesterol está diseñado para cuantificar la tasa de eflujo de colesterol a partir de células cultivadas y la capacidad de plasma aceptores para aceptar el colesterol liberado de las células. El ensayo consiste en el etiquetado de las células con el colesterol, equilibración de colesterol entre piscinas intracelulares y la liberación de colesterol a un aceptor extracelular.

Ensayo de eflujo de colesterol

Los proteoliposomas se utilizan para estudiar canales purificados y transportadores reconstituidos en un entorno bioquímico bien definido. Se ilustra un procedimiento experimental para medir el flujo de eflujo mediado por estas proteínas. Se describen los pasos para preparar los proteoliposomas, realizar los registros y analizar los datos para determinar cuantitativamente las propiedades funcionales de la proteína reconstituida.

Un Proteoliposoma Basada Eflujo Ensayo para determinar una sola molécula Propiedades de Cl<sup&gt; -</sup&gt; Canales y Transportadores

Este protocolo describe el aislamiento y la cuantificación de pequeños ARN de lipoproteínas de alta densidad.

El aislamiento de las lipoproteínas de alta densidad para no codificante ARN pequeño Cuantificación

Muchas de las (fosfo)lipasas predichas están mal caracterizadas con respecto a sus especificidades de sustrato y funciones fisiológicas. Aquí proporcionamos un protocolo para optimizar las actividades enzimáticas, buscar sustratos naturales y proponer funciones fisiológicas para estas enzimas.

La definición de Sustrato especificidades para la lipasa y la fosfolipasa candidatos

Describimos un ensayo basado en fluorescencia para medir la mezcla de fosfolípidos en grandes liposomas unilamelares reconstituidos con opsina.

Un ensayo basado en la fluorescencia de fosfolípido escramblasa Actividad

Describimos aquí un ensayo fluorométrico sin células bioquímico para la determinación de la peroxidación lipídica HDL. Este ensayo rápido y reproducible puede ser utilizado para determinar la función del HDL en estudios a gran escala y puede contribuir a nuestra comprensión de la función del HDL en enfermedad humana.

Sin células bioquímico análisis enzimático fluorométrico para medición de alto rendimiento de la peroxidación lipídica en lipoproteínas de alta densidad

Este protocolo proporciona un enfoque eficiente para medir la absorción de colesterol LDL con tasas de flujo en tiempo real usando un sistema en diversos tipos celulares de imagen vivo de la célula. Esta técnica proporciona una plataforma para la actividad farmacológica de compuestos que afectan flujo de LDL mientras para morfología de la célula y por lo tanto potencial citotoxicidad de la pantalla.

Ensayo de absorción de colesterol LDL utilizando celular directo imágenes análisis con células control de salud

Medición de la capacidad de eflujo de colesterol in vitro en suero o plasma en modelos celulares de macrófagos es una herramienta prometedora como un biomarcador para la ateroesclerosis. En el presente estudio, optimizar y estandarizar un método fluorescente de eflujo de NBD-colesterol y desarrollar un análisis de alto rendimiento con placas de 96 pocillos.

Ensayo de eflujo de colesterol marcado con Nitrobenzoxadiazole de alto rendimiento

Aquí, describimos protocolos que utilizan sensores de lípidos fluorescentes y liposomas para determinar si una proteína extrae y transporta fosfatidilserina o fosfatidilinositol 4-fosfato in vitro.

Mediciones basadas en fluorescencia del intercambio de fosfatidilserina/fosfatidilinositol 4-fosfato entre membranas

En este documento, demostramos un protocolo optimizado basado en fluorescencia BODIPY 493/503 para la caracterización de gotas de lípidos en el tejido hepático. Mediante el uso de proyecciones ortogonales y reconstrucciones 3D, el fluoróforo permite una discriminación exitosa entre esteatosis microvesicular y macrovesicular y puede representar un enfoque complementario a los protocolos histológicos clásicos para la evaluación de esteatosis hepática.

Análisis de gotitas de lípidos teñidas con fluorescencia con reconstrucción 3D para la evaluación de la esteatosis hepática

Presentamos un método rentable para evaluar la permeabilidad de la membrana liposomal con una sensibilidad y resolución superiores a las técnicas convencionales. Utilizando una novedosa reacción de sustitución de ligandos encapsulados, esta técnica detecta cambios inducidos por fosfolipasa A2 en las membranas del modelo. Este enfoque accesible, que se integra fácilmente con los análisis estándar, mejora la resolución para estudiar la biofísica de las membranas y las interacciones de toxinas.

Un ensayo de permeabilidad de la membrana liposomal para investigar los efectos de los grupos fosfato de fosfatidilinositol sobre la acción membranotrópica del veneno PLA2

Aprende a medir la función de la HDL mediante un ensayo de salida de fosfolípidos en plasma humano. Este método simple y rápido predice el riesgo de enfermedad cardiovascular en aplicaciones de investigación y clínica.

Ensayo de salida de fosfolípidos específicos de lipoproteínas de alta densidad

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