Name: Preparación de muestras para espectrometría de masas unicelular Estudios metabolómicos: lavado, enfriamiento, secado y almacenamiento combinados de células (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Aprende a preparar muestras para espectrometría de masas unicelular mediante lavado, enfriamiento con nitrógeno líquido y secado al vacío. Estos protocolos preservan metabolitos celulares y mejoran la precisión en estudios metabolómicos.

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<table><tbody><tr><td>-80 &grados; Congelador C</td><td>Eppendorf Nuevo Brunswick</td><td>U700</td><td>Preparación de muestras </td></tr><tr><td>Acetontrilo</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>240744</td><td>Configuración del experimento SCMS</td></tr><tr><td>Formiato de amonio </td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>401152500</td><td>Preparación de muestras </td></tr><tr><td>Cubreobjetos 18 mm</td><td>Vidrio de micro cubierta VMR</td><td>48380046</td><td>Cultivo celular </td></tr><tr><td>Microscopio estereoscópico digital</td><td>Shenzhen D& F Co.</td><td>Superojos T004</td><td>Análisis</td></tr><tr><td>Tubería de cuarzo de doble orificio, 1.120"x0.005"x12"</td><td>Friedrich & Dimmock, Inc.</td><td>MBT-005-020-2Q</td><td>Fabricación de una sola sonda</td></tr><tr><td>Resina epoxi</td><td>Devcon</td><td>N.º de pieza 20945</td><td>Fabricación de una sola sonda</td></tr><tr><td>Ácido fórmico</td><td>La ciencia de Ward </td><td>470301-120 500 ml</td><td>Configuración del experimento SCMS</td></tr><tr><td>Capilar de sílice fundida, ID: 40 &micro; m, OD: 100 &micro; m</td><td>Tecnologías Polymicro</td><td>TSP040105</td><td>Fabricación de una sola sonda</td></tr><tr><td>Capilar de sílice fundida, ID: 50 &micro; m, OD: 150 &micro; m</td><td>Tecnologías Polymicro</td><td>1068150015</td><td>Configuración del experimento SCMS</td></tr><tr><td>Cubreobjetos de cristal, 18 mm</td><td>VWR </td><td>48380046</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>HyClone Suero sintético (FBS)</td><td>Hyclone</td><td>SH3006603</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Incubadora </td><td>HeraCell (Heraeus)</td><td></td><td>Cultivo celular </td></tr><tr><td>Extractor láser</td><td>Instrumento Sutter Co.</td><td>Modelo P-2000</td><td>Fabricación de una sola sonda</td></tr><tr><td>Lámpara LED UV</td><td>Equipo dental Foshan Liang Ya</td><td>LY-C240</td><td>Fabricación de una sola sonda</td></tr><tr><td>El 5A de McCoy </td><td>Gibco </td><td>2537128</td><td>Cultivo celular </td></tr><tr><td>Microunión</td><td>IDEX Salud & Ciencia LLC</td><td>M-539</td><td>Configuración del experimento SCMS</td></tr><tr><td>Interfaz FAIMS pro modificada </td><td>Termo Fisher </td><td>98100-20046</td><td>Análisis </td></tr><tr><td>Kit de detección de micoplasma MycoAlert PLUS</td><td>Lonza</td><td>LT07-703</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Placa óptica </td><td>Thorlabs Inc., Newton</td><td></td><td>Análisis </td></tr><tr><td>Agua de grado Optima LC/MS (Fisher Chemical, EE. UU.)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>W6500</td><td>Preparación de muestras </td></tr><tr><td>Espectrómetro de masas Orbitrap Exploris 240 </td><td>ThermoFisher Scientific</td><td></td><td>Configuración del experimento SCMS</td></tr><tr><td>Penicilina/Estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>VWR</td><td>0780-50L</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Concentrador SpeedVac (Savant)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td> SPD111 V</td><td>Preparación de muestras </td></tr><tr><td>Bomba de jeringa (SKE10)</td><td>Chemyx Inc.</td><td>80561</td><td>Configuración del experimento SCMS</td></tr><tr><td>Jeringa, 250 &micro; L</td><td>Hamilton</td><td>1725LTN250UL</td><td>Configuración del experimento SCMS</td></tr><tr><td>Contador de células automatizado TC20</td><td>Laboratorios Bio-Rad </td><td>1450102EDU</td><td>Recuento de células</td></tr><tr><td>Placa de cultivo de tejidos, 100 mm</td><td>Fisher científico </td><td>FB012924</td><td>Cultivo celular </td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25200-072</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Microscopio digital USB (Zoom "Scorpio" 500)</td><td>Chinavasion, Mayorista Ltd.</td><td></td><td>Análisis </td></tr><tr><td>Resina de curado UV</td><td>Dental principal</td><td>N.º de artículo 006.030</td><td>Fabricación de una sola sonda</td></tr><tr><td>Software Xcalibur</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etapa XYZ (CONEX- MFACC)</td><td>Corporación de Newport</td><td></td><td>Análisis </td></tr></tbody></table>

preparación de muestras para espectrometría de masas unicelular estudios metabolómicos: lavado, enfriamiento, secado y almacenamiento combinados de células

Sample Preparation for Single Cell Mass Spectrometry Metabolomics Studies: Combined Cell Washing, Quenching, Drying, and Storage

Este informe describe una metodología que integra el lavado celular, el enfriamiento celular rápido, el secado al vacío y el almacenamiento a -80 °C (Figura 1). Específicamente, este enfoque está diseñado para preservar el estado metabolómico de las células antes del análisis de SCMS. La eficacia de este protocolo se probó preparando células en dos condiciones diferentes: células recién templadas y secas (Grupo 1, que sirve como control), y células templadas, secas y almacenadas a -80 °C (Grupo 2). Cada grupo se analizó utilizando el método SCMS de sonda única en modos de iones positivos y negativos. Se utilizó el análisis de componentes principales (PCA) y la visualización de mapas de calor para evaluar las diferencias en los perfiles metabolómicos entre los grupos.
Los resultados de PCA en el modo de iones positivos (Figura 2A) revelaron que los Grupos 1 y 2 tenían perfiles de metabolitos generales similares. Los perfiles casi idénticos del Grupo 1 y el Grupo 2 demuestran que el almacenamiento a -80 °C durante 48 h no altera significativamente el metaboloma si las células se enfrían adecuadamente antes del secado. En el modo de iones negativos (Figura 2B), se observa un patrón comparable, aunque el Grupo 2 aparece ligeramente más distinto, potencialmente debido a las diferencias de ionización entre clases específicas de metabolitos, por ejemplo, las fosfatidilcolinas se detectan mejor en modo positivo, mientras que los ácidos grasos se ionizan de manera más eficiente en modo negativo60. A pesar de esta variación, la agrupación constante entre los grupos 1 y 2 en ambos modos respalda la conclusión de que el protocolo integrado de enfriamiento-secado-almacenamiento mantiene la integridad metabólica.
El análisis del mapa de calor validó aún más los hallazgos de PCA al representar abundancias relativas de los 100 metabolitos principales en dos grupos. Como se muestra en la Figura 3, los 100 metabolitos principales muestran patrones de abundancia altamente consistentes entre el Grupo 1 y el Grupo 2 en ambos modos iónicos. No se observan cambios importantes ni agrupamientos específicos de grupos, aunque las variaciones menores en algunos grupos de metabolitos pueden reflejar diferencias en la eficiencia de ionización o la estabilidad de los metabolitos. Estos resultados demuestran colectivamente que el flujo de trabajo de enfriamiento-secado-almacenamiento conserva los perfiles metabolómicos celulares con alta fidelidad, lo que lo hace muy adecuado para aplicaciones de SCMS ambientales.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68995/68995fig1.jpg"> 
Figura 1: Flujo de trabajo general para el análisis de espectrometría de masas unicelular (SCMS) que investiga cómo la extinción de LN2 y el almacenamiento de 48 h a -80 °C afectan los perfiles de metabolitos en células individuales. (A) Las células se sembraron, incubaron y enjuagaron con una solución de formato de amonio (AF). (B) Se prepararon dos grupos de células: Grupo 1: las células se lavaron, enfriaron y liofilizaron para experimentos inmediatos de SCMS sin almacenamiento; Grupo 2: las células se lavaron, enfriaron, liofilizaron y almacenaron a -80 °C. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68995/68995fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68995/68995fig2.jpg"> 
Figura 2: Análisis de componentes principales (PCA) de datos de SCMS de células HCT-116 en grupos experimentales en (A) modo de iones positivos y (B) modo de iones negativos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68995/68995fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68995/68995fig3.jpg"> 
Figura 3: Mapas de calor que muestran los niveles relativos de los 100 metabolitos principales detectados en células individuales de HCT-116 preparadas en diversas condiciones, presentadas para (A) modo de iones positivos y (B) modo de iones negativos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68995/68995fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

Preparación de muestras para espectrometría de masas unicelular Estudios metabolómicos: lavado, enfriamiento, secado y almacenamiento combinados de células

Single-cell mass spectrometry (SCMS) has become an indispensable tool for studying cellular metabolism. Owing to advancements in modern mass spectrometry ...

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Investigación

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Aprende a preparar muestras para espectrometría de masas unicelular mediante lavado, enfriamiento con nitrógeno líquido y secado al vacío. Estos protocolos preservan metabolitos celulares y mejoran la precisión en estudios metabolómicos.

Preparación de muestras para espectrometría de masas unicelular Estudios metabolómicos: lavado, enfriamiento, secado y almacenamiento combinados de células (Video) | JoVE Journal

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