Name: Modelado de la reparación alveolar pulmonar displásica y funcional después de la infección por influenza (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T14:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Aprende a administrar virus influenza A por vía intranasal en ratones anestesiados para estudiar daño pulmonar y respuestas celulares. Este método permite analizar cambios transcripcionales en células endoteliales y macrófagos alveolares mediante citometría de flujo y secuenciación de células únicas.

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<ol><li>Mammoto, A., Mammoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+niche+in+lung+alveolar+development%2C+homeostasis%2C+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Vascular niche in lung alveolar development, homeostasis, and regeneration.</a> Front Bioeng Biotechnol. 7, 318(2019).</li>
<li>Tsikis, S. T., Hirsch, T. I., Fligor, S. C., Quigley, M., Puder, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+lung+endothelial+niche+to+promote+angiogenesis+and+regeneration%3A+a+review+of+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Targeting the lung endothelial niche to promote angiogenesis and regeneration: a review of applications.</a> Front Mol Biosci. 9, 1093369(2022).</li>
<li>Torrego, A., Pajares, V., Mola, A., Lerma, E., Franquet, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+%28H1N1%29+organising+pneumonia%3A+figure+1%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ+Case+Rep%22%5BJournal%5D)">Influenza A (H1N1) organising pneumonia: figure 1.</a> BMJ Case Rep. 2010, bcr1220092531(2010).</li>
<li>Murota, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+H1N1+virus-associated+pneumonia+often+resembles+rapidly+progressive+interstitial+lung+disease+seen+in+collagen+vascular+diseases+and+COVID-19+pneumonia%3B+CT-pathologic+correlation+in+24+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Radiol+Open%22%5BJournal%5D)">Influenza H1N1 virus-associated pneumonia often resembles rapidly progressive interstitial lung disease seen in collagen vascular diseases and COVID-19 pneumonia; CT-pathologic correlation in 24 patients.</a> Eur J Radiol Open. 7, 100297(2020).</li>
<li>Niethamer, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+role+of+pulmonary+endothelial+cell+heterogeneity+in+the+response+to+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Defining the role of pulmonary endothelial cell heterogeneity in the response to acute lung injury.</a> eLife. 9, e53072(2020).</li>
<li>Klomp, M., Ghosh, S., Mohammed, S., Khan, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+virus+to+inflammation%2C+how+influenza+promotes+lung+damage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">From virus to inflammation, how influenza promotes lung damage.</a> J Leukoc Biol. 110 (1), 115-122 (2021).</li>
<li>Newton, A. H., Cardani, A., Braciale, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+host+immune+response+in+respiratory+virus+infection%3A+balancing+virus+clearance+and+immunopathology%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">The host immune response in respiratory virus infection: balancing virus clearance and immunopathology.</a> Semin Immunopathol. 38 (4), 471-482 (2016).</li>
<li>Jones, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+injury-induced+mesenchymal-epithelial+cell+niche+coordinates+regenerative+responses+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">An injury-induced mesenchymal-epithelial cell niche coordinates regenerative responses in the lung.</a> Science. 386 (6727), eado5561(2024).</li>
<li>Niethamer, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+single-cell+profiles+of+lung+regeneration+after+viral+infection+reveal+persistent+injury-associated+cell+states%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Longitudinal single-cell profiles of lung regeneration after viral infection reveal persistent injury-associated cell states.</a> Cell Stem Cell. 32 (2), 302-321.e6 (2025).</li>
<li>Belser, J. A., Gustin, K. M., Katz, J. M., Maines, T. R., Tumpey, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+traditional+intranasal+and+aerosol+inhalation+inoculation+of+mice+with+influenza+A+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Comparison of traditional intranasal and aerosol inhalation inoculation of mice with influenza A viruses.</a> Virology. 481, 107-112 (2015).</li>
<li>Oltean, T., Maelfait, J., Saelens, X., Vandenabeele, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Need+for+standardization+of+influenza+A+virus-induced+cell+death+in+vivo+to+improve+consistency+of+inter-laboratory+research+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Discov%22%5BJournal%5D)">Need for standardization of influenza A virus-induced cell death in vivo to improve consistency of inter-laboratory research findings.</a> Cell Death Discov. 10 (1), 247(2024).</li>
<li>Nguyen, T. -Q., Rollon, R., Choi, Y. -K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+influenza+research%3A+strengths+and+weaknesses%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Animal models for influenza research: strengths and weaknesses.</a> Viruses. 13 (6), 1011(2021).</li>
<li>Jin, X. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+pathogenicity+of+influenza+virus-induced+pneumonia+mouse+model+following+intranasal+and+aerosolized+intratracheal+inoculation%5BTitle%5D)+AND+%22Virol+J%22%5BJournal%5D)">Comparative pathogenicity of influenza virus-induced pneumonia mouse model following intranasal and aerosolized intratracheal inoculation.</a> Virol J. 21 (1), 240(2024).</li>
<li>Revelli, D. A., Boylan, J. A., Gherardini, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-invasive+intratracheal+inoculation+method+for+the+study+of+pulmonary+melioidosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A non-invasive intratracheal inoculation method for the study of pulmonary melioidosis.</a> Front Cell Infect Microbiol. 2, 164(2012).</li>
<li>Cantu, A., Gutierrez, M. C., Dong, X., Leek, C., Anguera, M., Lingappan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+recovery+from+neonatal+hyperoxic+lung+injury+by+sex+as+a+biological+variable%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Modulation of recovery from neonatal hyperoxic lung injury by sex as a biological variable.</a> Redox Biol. 68, 102933(2023).</li>
<li>Sunagar, R., Kumar, S., Namjoshi, P., Rosa, S. J., Hazlett, K. R. O., Gosselin, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+an+outbred+mouse+model+for+Francisella+tularensis+vaccine+development+and+testing%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of an outbred mouse model for Francisella tularensis vaccine development and testing.</a> PLoS One. 13 (12), e0207587(2018).</li>
<li>Cowley, P. M., Roberts, C. R., Baker, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+health+status+of+mice+with+bleomycin-induced+lung+injury+by+using+body+condition+scoring%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Monitoring the health status of mice with bleomycin-induced lung injury by using body condition scoring.</a> Comp Med. 69 (2), 95-102 (2019).</li>
<li>Gonzalez, A. J., Ijezie, E. C., Balemba, O. B., Miura, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuation+of+influenza+A+virus+disease+severity+by+viral+coinfection+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Attenuation of influenza A virus disease severity by viral coinfection in a mouse model.</a> J Virol. 92 (23), e00881-e00918 (2018).</li>
<li>Lv, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+pulmonary+immune+cells%2C+antibody+responses+and+their+correlations+with+the+viral+clearance+of+influenza+A+fatal+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Virol+J%22%5BJournal%5D)">Kinetics of pulmonary immune cells, antibody responses and their correlations with the viral clearance of influenza A fatal infection in mice.</a> Virol J. 11, 57(2014).</li>
<li>Liberti, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+epithelial+cell+fate+is+maintained+in+a+spatially+restricted+manner+to+promote+lung+regeneration+after+acute+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Alveolar epithelial cell fate is maintained in a spatially restricted manner to promote lung regeneration after acute injury.</a> Cell Rep. 35 (6), 109092(2021).</li>
<li>Cipolla, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhalable+and+nasal+biologics%3A+analytical%2C+formulation%2C+development%2C+and+regulatory+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Aerosol+Med+Pulm+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Inhalable and nasal biologics: analytical, formulation, development, and regulatory considerations.</a> J Aerosol Med Pulm Drug Deliv. 2024, (2025).</li>
<li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), (2014).</li>
<li>Bouvier, N. M., Lowen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+influenza+virus+pathogenesis+and+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Animal models for influenza virus pathogenesis and transmission.</a> Viruses. 2 (8), 1530-1563 (2010).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,5 mL de tubo y nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-682-557</td><td></td></tr><tr><td>100 & micro; Colador de células M</td><td>Halcón</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cónico de 15 mL</td><td>Halcón</td><td>352196</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibc0</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>40 y micro; Colador de células M</td><td>Halcón</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de 5 mL</td><td>Globo</td><td>6101C</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cónico de 50 mL</td><td>Halcón</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Material del virus de la gripe A/PR/8/34</td><td>ATCC&nbsp;</td><td>VR-95PQ</td><td>Cada lote tiene distintos títulos virales</td></tr><tr><td>Búfer de lisis ACK</td><td>Calidad Biológico</td><td>118-156-101</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-TRKB</td><td>R& Sistemas D</td><td>AF1494</td><td></td></tr><tr><td>Lejía</td><td>Clorox</td><td></td><td>Lejía al 10%</td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A8022</td><td></td></tr><tr><td>Cámara de inducción de anestesia por CO2</td><td>Cualquiera</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Colagenasa Tipo I</td><td>Gibco</td><td>17100017</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Milipore Sigma</td><td>28718-90-3</td><td></td></tr><tr><td>Dispasa</td><td>Corning</td><td>CB-40235</td><td></td></tr><tr><td>Herramientas de disección: tijeras, pinzas curvas, pinzas rectas</td><td>Cualquiera</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dnase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>4716728001</td><td></td></tr><tr><td>D-PBS</td><td>Corning</td><td>21-031-CM</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Pharmco</td><td>111000200</td><td></td></tr><tr><td>Frascos de vidrio</td><td>DWK Ciencias de la Vida</td><td>986562</td><td></td></tr><tr><td>Cubo de hielo</td><td>Cualquiera</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Covetrus</td><td>29404</td><td></td></tr><tr><td>Agujas, 21 y guion; 23 G</td><td>Cualquiera</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>pipeta P20/P200 & nbsp;</td><td>Pipetman</td><td>F144056M/F144058M,</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de pipeta P20/P200</td><td>Thomas Scientific</td><td>1159M43/1159M40</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído (PFA) y nbsp;</td><td>Termo Científica</td><td>J19943-k2</td><td>2%PFA</td></tr><tr><td>Pipetman</td><td>Cualquiera</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cajas de congelador de plástico o cartón</td><td>Cualquiera</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cuchilla de afeitar</td><td>Cualquiera</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ring Stand</td><td>Cualquiera</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas serológicas, 5 mL</td><td>Halcón</td><td>357543</td><td></td></tr><tr><td>Cámara de isoflurano para ratones de inducción con tapa deslizante</td><td>Somni Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9422522</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de jeringuilla y luer-locks</td><td>Cualquiera</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Jeringuilla, 10 mL</td><td>Cualquiera</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Máquina de anestesia de mesa Isoflurano</td><td>Ohmeda</td><td>Ohmeda Isotec- 4</td><td>El caudal debería ser 2,5 y guiño; 3%</td></tr><tr><td>Agarosa de fusión ultrabaja</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5030-1G</td><td></td></tr><tr><td>Balanza</td><td>OHAUS</td><td>CS200</td><td></td></tr></tbody></table>

modelado de la reparación alveolar pulmonar displásica y funcional después de la infección por influenza

Modeling Dysplastic and Functional Lung Alveolar Repair after Influenza Infection

Modelado de la reparación alveolar pulmonar displásica y funcional después de la infección por influenza

Viral infection causes both acute and long-term damage to the lung alveolus, the specialized tissue structure responsible for gas exchange between the ...

modeling-dysplastic-functional-lung-alveolar-repair-after-influenza

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Se describe el aislamiento rápido de células primarias de murino de tipo II alveolares epiteliales (AECII) por citometría de flujo negativo de selección. Estos AECII mostrar una alta viabilidad y pureza, y son adecuados para una amplia gama de estudios funcionales y molecular respecto a su función en condiciones respiratorias tales como enfermedades autoinmunes o infecciosas.

Citometría de flujo El aislamiento de células primarias murino tipo II alveolares epiteliales de Estudios funcionales y moleculares

Hemos desarrollado un modelo de lesión pulmonar en ratón mediante inyección intratraqueal de la bacteria Pseudomonas aeruginosa. Este modelo imita la lesión pulmonar durante la neumonía y es clínicamente relevante.

Pseudomonas aeruginosa inducida por la lesión pulmonar Modelo

Describimos un medio para medir de forma rápida y sencilla la capacidad de difusión pulmonar en ratones y demostramos que es suficientemente sensible a los cambios fenotípicos en múltiples patologías pulmonares comunes.  Por lo tanto, esta métrica aporta relevancia traslacional directa a los modelos de ratón, ya que la capacidad de difusión también se mide fácilmente en humanos.

Función Fenotipificación ratón pulmonar En Vivo Con la capacidad de difusión pulmonar

La neumonectomía en ratón es un modelo comúnmente empleado de crecimiento pulmonar compensatorio. Este procedimiento se puede utilizar junto con el rastreo de linaje o modelos de ratones transgénicos para dilucidar los mecanismos subyacentes.

Ratón neumonectomía Modelo de Compensatoria crecimiento pulmonar

El área de superficie pulmonar interna (ISA) es un criterio crítico para evaluar la morfología pulmonar y la fisiología en las enfermedades pulmonares y la regeneración alveolar inducida por lesiones. Describimos aquí un método estandarizado que puede minimizar el sesgo de medición para ISA tanto en neumonectomía pulmonar como en modelos de ratón de implantación de prótesis.

Un método estandarizado para medir el área de la superficie pulmonar interna mediante neumonectomía y prótesis de ratón

Aquí, presentamos métodos para mejorar los estudios secundarios de neumonía bacteriana proporcionando una vía no invasiva de instilización en el tracto respiratorio inferior seguida de recuperación de patógenos y análisis de transcripción. Estos procedimientos son reproducibles y se pueden realizar sin equipos especializados como cánulas, cables guía o cables de fibra óptica.

Un sistema preciso de entrega y recuperación de patógenos para modelos murinos de neumonía bacteriana secundaria

Este manuscrito describe el establecimiento de un modelo infeccioso de neumonía en ratones y la respectiva caracterización de la resolución de lesiones junto con métodos para el crecimiento de bacterias y la instilación intratraqueal. También se describe un enfoque novedoso que utiliza citometría de flujo de alta dimensión para evaluar el panorama inmunitario.

Modelo experimental para evaluar la resolución de la neumonía

Los modelos de pulmón en chip superan a los cultivos 2D tradicionales al imitar la interfaz aire-líquido y la perfusión de células endoteliales, simulando el flujo sanguíneo y el intercambio de nutrientes cruciales para los estudios de fisiología pulmonar. Esto aumenta la relevancia de la investigación pulmonar, ya que ofrece un entorno dinámico y fisiológicamente preciso para avanzar en la comprensión y el tratamiento de las infecciones respiratorias.

Modelo de alvéolo en chip inmunocompetente para el estudio de las respuestas inmunitarias de la mucosa alveolar

Este protocolo demuestra la técnica de aspiración orofaríngea para su uso en el modelo murino de fibrosis pulmonar con bleomicina.

Administración orofaríngea de bleomicina en el modelo murino de fibrosis pulmonar

Este protocolo describe un método para inducir fibrosis pulmonar en ratones a través de la administración orofaríngea repetida de bleomicina, produciendo características patológicas muy parecidas a las de la fibrosis pulmonar idiopática.

Modelo murino refinado de fibrosis pulmonar idiopática

Aprende a administrar virus influenza A por vía intranasal en ratones anestesiados para estudiar daño pulmonar y respuestas celulares. Este método permite analizar cambios transcripcionales en células endoteliales y macrófagos alveolares mediante citometría de flujo y secuenciación de células únicas.

Modelado de la reparación alveolar pulmonar displásica y funcional después de la infección por influenza

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