Name: Modelado de la hipoxia/lesión por reoxigenación en células epiteliales tubulares proximales (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: Aprende a modelar daño por hipoxia/reoxigenación en células epiteliales tubulares proximales. Este método permite evaluar marcadores de lesión renal y función mitocondrial para identificar dianas terapéuticas.

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<table><tbody><tr><td>Placa qPCR de 384 pocillos</td><td>Biosistemas Aplicados</td><td>4309849</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugadora</td><td>Ortoalresa</td><td>Biocen22R</td><td></td></tr><tr><td>Cloroformo</td><td>VWR</td><td>0757-500ML</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>21331020</td><td></td></tr><tr><td>Factor de crecimiento epidérmico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>PanReac AppliChem</td><td>141086.1214</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>Biowest</td><td>S181B-500</td><td></td></tr><tr><td>Bloque calefactor</td><td>Eppendorf</td><td>Termomezclador C</td><td></td></tr><tr><td>Hidrocortisona</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0135</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora de hipoxia</td><td>Memmert</td><td>ICO 50med</td><td></td></tr><tr><td>IFN-&gamma;</td><td>ProspecBIo</td><td>CYT-358</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora</td><td>Memmert</td><td>ICO 105</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>VWR</td><td>0918-1L</td><td></td></tr><tr><td>ITSe</td><td>Gibco</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamina</td><td>Gibco</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta multicanal</td><td>Eppendorf</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora no <> COsub<></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cebadores de PCR</td><td>Genómica Eurofins</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penicilina - Estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Mezcla maestra qPCR</td><td>NZYTech</td><td>MB22303</td><td></td></tr><tr><td>Sistema qPCR en tiempo real</td><td>Biosistemas Aplicados</td><td>QuantStudio 5</td><td></td></tr><tr><td>Mezcla maestra de transcripción inversa</td><td>NZYTech</td><td>MB12502</td><td>Contiene mezcla enzimática</td></tr><tr><td>Agua libre de ARN</td><td>HyClone</td><td>SH3053802</td><td></td></tr><tr><td>Kit de prueba de estrés Mito para la célula XF Seahorse</td><td>Agilent</td><td>103015-100</td><td>Contiene oligomicina, FCCP, antimicina A y rotenona</td></tr><tr><td>Seahorse XF DMEM medio</td><td>Agilent</td><td>103575-100</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XF Glucosa</td><td>Agilent</td><td>03577-100</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XF Glutamina</td><td>Agilent</td><td>103579-100</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XF Piruvato</td><td>Agilent</td><td>103578-100</td><td></td></tr><tr><td>Analizador Seahorse XFe96</td><td>Agilent</td><td>S7800BR</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XFe96 FluxPak</td><td>Agilent</td><td>103792-100</td><td>Contiene microplaca de cultivo celular XFe96 y cartucho sensor XFe96</td></tr><tr><td>Ciclador térmico</td><td>BIO-RAD</td><td>Ciclador térmico T100</td><td></td></tr><tr><td>Triiodotironina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5516</td><td></td></tr><tr><td>Trizol</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>Espectrofotómetro UV-Vis</td><td>DeNovix</td><td>DS-11</td><td></td></tr></tbody></table>

modelado de la hipoxia/lesión por reoxigenación en células epiteliales tubulares proximales

Modeling Hypoxia/Reoxygenation Injury in Proximal Tubular Epithelial Cells

Modelado de la hipoxia/lesión por reoxigenación en células epiteliales tubulares proximales

Kidney transplantation accounts for approximately 60%-65% of all transplanted solid organs. Most donor kidneys are obtained from deceased individuals, ...

modeling-hypoxiareoxygenation-injury-proximal-tubular-epithelial

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Los efectos de la activación de la proteína quinasa C (PKC) las isoenzimas en las funciones mitocondriales asociadas con la respiración y la fosforilación oxidativa y en la viabilidad celular se describen. El enfoque se adapta técnica adenoviral para sobreexpresar selectivamente las isozimas de la PKC en cultivo de células primarias y una diversidad de ensayos para determinar las funciones mitocondriales y el estado de energía de la célula.

Evaluación de las funciones mitocondriales y la viabilidad celular renal de células que sobreexpresan la proteína quinasa C Isoenzimas

Fuente: Alluri, H., et.al. Privación y reoxigenación de oxígeno-glucosa como modelo de lesión in vitro por isquemia-reperfusión para el estudio de la disfunción de la barrera hematoencefálica. J. Vis. Exp. (2015).El video demuestra el impacto de la privación de oxígeno-glucosa y la posterior reoxigenación en las células endoteliales microvasculares del cerebro de rata (RBMEC) mediante la simulación de condiciones hipóxicas y de privación de nutrientes. Estas condiciones dan lugar a la depleción...

Impacto de la privación y reoxigenación de oxígeno-glucosa en las interacciones célula-célula

La lesión por isquemia-reperfusión (IR) se asocia con una alta tasa de morbilidad y mortalidad. El objetivo del modelo in vitro de privación y reoxigenación de oxígeno-glucosa (OGD-R) descrito aquí es evaluar los efectos de la lesión por isquemia-reperfusión en una variedad de células, particularmente en las células endoteliales de la barrera hematoencefálica (BBB).

Oxígeno-Glucosa Privación y Reoxigenación como<em&gt; In Vitro</em&gt; La isquemia-reperfusión modelo para el estudio de la disfunción barrera hematoencefálica

Este protocolo proporciona un enfoque rentable para aislar y caracterizar ratón primario células tubulares renales que posteriormente pueden cultivarse el evaluar funciones biológicas renal ex vivo, incluyendo bioenergética mitocondrial.

Aislamiento, caracterización y alto rendimiento análisis de flujo extracelular de ratón células epiteliales tubulares renales primarias

Este protocolo describe un modelo apical-out necrotizante enterocolitis (ECN) en un plato que utiliza enteroides del intestino delgado con polaridad invertida, lo que permite el acceso a la superficie apical. Proporcionamos un protocolo de tinción inmunofluorescente para detectar la disrupción epitelial relacionada con NEC y un método para determinar la viabilidad de enteroides apicales sometidos al protocolo NEC en un plato.

In vitro Modelo enteroide apical de enterocolitis necrosante

En este trabajo describimos los protocolos para la obtención de cultivos primarios de células epiteliales tubulares renales humanas (HRTEC) a partir de la corteza renal para desarrollar monocapas y cultivos tridimensionales en una matriz extracelular (3D-HRTEC).

Desarrollo de cultivos primarios de células epiteliales tubulares renales humanas en monocapas y condiciones tridimensionales

Presentamos un protocolo optimizado para el procesamiento de riñones humanos completos para aislar y cultivar células epiteliales primarias del túbulo proximal renal y la aplicación de estas células en una plataforma tridimensional, microfluídica y microfisiológica para recapitular el túbulo proximal renal.

Aislamiento de células epiteliales primarias del túbulo proximal humano y su uso en la creación de un modelo microfisiológico del túbulo proximal renal

Los organoides cardíacos humanos autoensamblantes (hCOs) son un sistema emergente para modelar el desarrollo y las enfermedades cardíacas humanas. Aquí se proporciona una metodología para generar y dañar hCOs mediante hipoxia-reoxigenación y detalles de los resultados histológicos y funcionales esperados tras la lesión.

Un modelo de lesión por hipoxia-reoxigenación en cardioides humanos autoensamblantes

A continuación se describe un método detallado para el cultivo de primaria células epiteliales bronquiales humanas a partir de explantes de tejido humano vías respiratorias bronquiales incluyendo el crecimiento diferenciado en una interfase aire-líquido. Este método proporciona una fuente abundante de células primarias para investigar el papel del epitelio de las vías respiratorias en la salud pulmonar y la enfermedad humanas.

Primaria células epiteliales bronquiales Cultivada a partir de explantes

Chirp es una técnica novedosa y rápida a los sitios de unión del Mapa del Genoma de los ARNs no codificantes de largo (lncRNAs). El método tiene la ventaja de la especificidad de los oligonucleótidos antisentido baldosas para permitir la enumeración de los sitios genómicos lncRNA enlazados.

Aislamiento de la cromatina mediante la purificación de ARN (chirp)

Aprende a modelar daño por hipoxia/reoxigenación en células epiteliales tubulares proximales. Este método permite evaluar marcadores de lesión renal y función mitocondrial para identificar dianas terapéuticas.

Modelado de la hipoxia/lesión por reoxigenación en células epiteliales tubulares proximales

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