Name: In Vitro Diferenciación residente de células T CD8 con memoria usando el sistema de cocultivo organoide-célula T epitelial (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: Aprende a diferenciar células T CD8 residentes con memoria mediante un sistema de cocultivo organoide-célula T epitelial. Este método permite estudiar respuestas inmunitarias in vitro sin depender de modelos animales.

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<ol><li>Rosato, P. C., Beura, L. K., Masopust, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+resident+memory+T+cells+and+viral+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Virol%22%5BJournal%5D)">Tissue resident memory T cells and viral immunity.</a> Curr Opin Virol. 22, 44-50 (2017).</li>
<li>Park, C. O., Kupper, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emerging+role+of+resident+memory+T+cells+in+protective+immunity+and+inflammatory+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">The emerging role of resident memory T cells in protective immunity and inflammatory disease.</a> Nat Med. 21, 688-697 (2015).</li>
<li>Schenkel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resident+memory+CD8+T+cells+trigger+protective+innate+and+adaptive+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Resident memory CD8 T cells trigger protective innate and adaptive immune responses.</a> Science. 346 (6205), 98-101 (2014).</li>
<li>Ariotti, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin-resident+memory+CD8+%2B+T+cells+trigger+a+state+of+tissue-wide+pathogen+alert%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Skin-resident memory CD8 + T cells trigger a state of tissue-wide pathogen alert.</a> Science. 346 (6205), 101-105 (2014).</li>
<li>Christo, S. N., Park, S. L., Mueller, S. N., Mackay, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Multifaceted+Role+of+Tissue-Resident+Memory+T+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">The Multifaceted Role of Tissue-Resident Memory T Cells.</a> Annu Rev Immunol. 42 (1), 317-345 (2024).</li>
<li>Gavil, N. V., Cheng, K., Masopust, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resident+memory+T+cells+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Resident memory T cells and cancer.</a> Immunity. 57 (8), 1734-1751 (2024).</li>
<li>Christo, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrete+tissue+microenvironments+instruct+diversity+in+resident+memory+T+cell+function+and+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Discrete tissue microenvironments instruct diversity in resident memory T cell function and plasticity.</a> Nat Immunol. 22 (9), 1140-1151 (2021).</li>
<li>Pan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+tissue-resident+memory+T+cells+requires+exogenous+lipid+uptake+and+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Survival of tissue-resident memory T cells requires exogenous lipid uptake and metabolism.</a> Nature. 543, 252-256 (2017).</li>
<li>Hasan, M. H., Beura, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+interactions+in+resident+memory+T+cell+establishment+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cellular interactions in resident memory T cell establishment and function.</a> Curr Opin Immunol. 74, 68-75 (2022).</li>
<li>Ulibarri, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+organoid+supports+resident+memory+CD8+T+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Epithelial organoid supports resident memory CD8 T cell differentiation.</a> Cell Rep. 43 (8), 114621(2024).</li>
<li>Evrard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+protein+expression+profiling+resolves+circulating+and+resident+memory+T+cell+diversity+across+tissues+and+infection+contexts%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Single-cell protein expression profiling resolves circulating and resident memory T cell diversity across tissues and infection contexts.</a> Immunity. 56 (7), 1664-1680.e9 (2023).</li>
<li>Borges da Silva, H., Wang, H., Qian, L. J., Hogquist, K. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ARTC2.2%2FP2RX7+Signaling+during+Cell+Isolation+Distorts+Function+and+Quantification+of+Tissue-Resident+CD8%2B+T+Cell+and+Invariant+NKT+Subsets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">ARTC2.2/P2RX7 Signaling during Cell Isolation Distorts Function and Quantification of Tissue-Resident CD8+ T Cell and Invariant NKT Subsets.</a> J Immunol. 202 (7), 2153-2163 (2019).</li>
<li>Künzli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lived+T+follicular+helper+cells+retain+plasticity+and+help+sustain+humoral+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Long-lived T follicular helper cells retain plasticity and help sustain humoral immunity.</a> Sci Immunol. 5 (45), eaay5552(2020).</li>
<li>Kang, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+induced+alveolar+assembloids+with+functional+alveolar-like+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Generation of induced alveolar assembloids with functional alveolar-like macrophages.</a> Nat Commun. 16, 3346(2025).</li>
<li>Lin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+gastrointestinal+assembloids+to+study+the+interplay+between+epithelial+crypts+and+their+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Establishment of gastrointestinal assembloids to study the interplay between epithelial crypts and their mesenchymal niche.</a> Nat Commun. 14, 3025(2023).</li>
<li>Park, S. E., Georgescu, A., Huh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids-on-a-chip%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Organoids-on-a-chip.</a> Science. 364 (6444), 960-965 (2019).</li>
<li>Quintard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microfluidic+platform+integrating+functional+vascularized+organoids-on-chip%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A microfluidic platform integrating functional vascularized organoids-on-chip.</a> Nat Commun. 15, 1452(2024).</li>
<li>Vincenti, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+memory+CD8%2B+T+cells+cooperate+with+CD4%2B+T+cells+to+drive+compartmentalized+immunopathology+in+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident memory CD8+ T cells cooperate with CD4+ T cells to drive compartmentalized immunopathology in the CNS.</a> Sci Transl Med. 14 (640), eabl6058(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Solución acuosa de paraformaldehído al 16%</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>15710-S</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultivo de poliestireno no tratadas de múltiples pozos de 24 pozos</td><td>VWR Internacional</td><td>10861-558</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoetanol</td><td>Gibco</td><td>21985023</td><td></td></tr><tr><td>3 mL de jeringuillas estériles</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-457</td><td></td></tr><tr><td>5 mL, y nbsp; Snap Cap, &nbsp; Tubos de ensayo de poliestireno estériles y con fondo redondeado</td><td>Halcón</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri de 60 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713A&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>70 y mu; Filtros celulares estériles</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>Microplacas de fondo redondeado de poliestireno no tratado de 96 pozos</td><td>Greiner Bio-One</td><td>650101</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultivo de tejido múltiple de pozo no tratadas de poliestireno de 96 pozos</td><td>VWR Internacional</td><td>10861-562</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina bovina/fracción V</td><td>Química Termocientífica</td><td>J6465518</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de amonio</td><td>Fisher Scientific</td><td>A661-500</td><td></td></tr><tr><td>Anfotericina B&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9528-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento B-27</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Lector multimodo de imagen de celdas ioTek Cytation 5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 1:1 Medium</td><td>Cytiva</td><td>SH30271. FS</td><td></td></tr><tr><td>Solución de sal tamponada con fosfato de Dulbecco 1x</td><td>Corning</td><td>21031CV</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilendediaminético tetraacético (solución 0,5 M/pH 8,0)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2482-500</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras Micro Disecadoras Extra Finas</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Suero bovino fetal - Tratado con carbón vegetal/Dextrán</td><td>R& Sistemas D</td><td>S11650</td><td></td></tr><tr><td>Software Flowjo v10</td><td>Becton, Dickinson y Compañía</td><td>FlowJo (RRID:SCR_008520)</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas Graefe</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>Solución HEPES</td><td>Cytiva</td><td>SH30237.01</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamina (200 mM)</td><td>Gibco</td><td>A2916801</td><td></td></tr><tr><td>Magnet 5mL</td><td>Bioleyenda</td><td>480019</td><td></td></tr><tr><td>Mouse CD8 Na&iuml; Kit de aislamiento de células T ve</td><td>Bioleyenda</td><td>480044</td><td></td></tr><tr><td>Proteína recombinante EGF del ratón</td><td>Gibco</td><td>315091MG</td><td></td></tr><tr><td>Solución de aminoácidos no esenciales (100 veces)</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Solución de penicilina-estreptomicina</td><td>Cytiva</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato de potasio</td><td>MP Biomedicina</td><td>0215255780</td><td></td></tr><tr><td>CD3 y epsilón antiratón purificado; Anticuerpo</td><td>Bioleyenda</td><td>100360</td><td></td></tr><tr><td>Ratón recombinante B7.1 (CD80)-Fc Chimera (sin portadora)</td><td>Bioleyenda</td><td>555406</td><td></td></tr><tr><td>Ratón recombinante IL-12 (p70) (sin portador)</td><td>Bioleyenda</td><td>577004</td><td></td></tr><tr><td>Ratón recombinante IL-2 (sin portador)</td><td>Bioleyenda</td><td>575406</td><td></td></tr><tr><td>Extracto de membrana basal con factor de crecimiento reducido</td><td>R& Sistemas D</td><td>BME001-10</td><td></td></tr><tr><td>Medios RPMI 1640</td><td>Cytiva</td><td>SH30027.LS</td><td></td></tr><tr><td>Azida de sodio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S227I-25</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato de sodio (100 mM)</td><td>Gibco</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina 0,25% proteasa con tripsina porcina</td><td>Cytiva</td><td>SH30042.02</td><td></td></tr><tr><td>Tinte de viabilidad (Rojo 780)</td><td>Cytek Biosciences</td><td>13-0865-T100</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro diferenciación residente de células t cd8 con memoria usando el sistema de cocultivo organoide-célula t epitelial

In Vitro Resident Memory CD8 T Cell Differentiation Using Epithelial Organoid-T Cell Co-culture System

In Vitro Diferenciación residente de células T CD8 con memoria usando el sistema de cocultivo organoide-célula T epitelial

Barrier mucosal tissues play an important role in the differentiation and function of resident T cells. Among the diverse cell populations within these ...

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Investigación

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Este protocolo explica cultura organoid-Lgr5 positve primaria y la posterior ejecución de la transducción retroviral. Esto permite la sobreexpresión Cre-inducible o caída del transgén entregado y permite estudios funcionales que se llevarán a cabo en la novela en organotípico vitro   sistema modelo.

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3D organotípicos Co-cultura de apoyo medular tímica epitelial proliferación celular, la diferenciación y la Expresión Génica Promiscuo Modelo

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