Name: In Vitro Diferenciación residente de células T CD8 con memoria usando el sistema de cocultivo organoide-célula T epitelial (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: Aprende a diferenciar células T CD8 residentes con memoria mediante un sistema de cocultivo organoide-célula T epitelial. Este método permite estudiar respuestas inmunitarias in vitro sin depender de modelos animales.

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<ol><li>Rosato, P. C., Beura, L. K., Masopust, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+resident+memory+T+cells+and+viral+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Virol%22%5BJournal%5D)">Tissue resident memory T cells and viral immunity.</a> Curr Opin Virol. 22, 44-50 (2017).</li>
<li>Park, C. O., Kupper, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emerging+role+of+resident+memory+T+cells+in+protective+immunity+and+inflammatory+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">The emerging role of resident memory T cells in protective immunity and inflammatory disease.</a> Nat Med. 21, 688-697 (2015).</li>
<li>Schenkel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resident+memory+CD8+T+cells+trigger+protective+innate+and+adaptive+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Resident memory CD8 T cells trigger protective innate and adaptive immune responses.</a> Science. 346 (6205), 98-101 (2014).</li>
<li>Ariotti, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin-resident+memory+CD8+%2B+T+cells+trigger+a+state+of+tissue-wide+pathogen+alert%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Skin-resident memory CD8 + T cells trigger a state of tissue-wide pathogen alert.</a> Science. 346 (6205), 101-105 (2014).</li>
<li>Christo, S. N., Park, S. L., Mueller, S. N., Mackay, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Multifaceted+Role+of+Tissue-Resident+Memory+T+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">The Multifaceted Role of Tissue-Resident Memory T Cells.</a> Annu Rev Immunol. 42 (1), 317-345 (2024).</li>
<li>Gavil, N. V., Cheng, K., Masopust, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resident+memory+T+cells+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Resident memory T cells and cancer.</a> Immunity. 57 (8), 1734-1751 (2024).</li>
<li>Christo, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrete+tissue+microenvironments+instruct+diversity+in+resident+memory+T+cell+function+and+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Discrete tissue microenvironments instruct diversity in resident memory T cell function and plasticity.</a> Nat Immunol. 22 (9), 1140-1151 (2021).</li>
<li>Pan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+tissue-resident+memory+T+cells+requires+exogenous+lipid+uptake+and+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Survival of tissue-resident memory T cells requires exogenous lipid uptake and metabolism.</a> Nature. 543, 252-256 (2017).</li>
<li>Hasan, M. H., Beura, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+interactions+in+resident+memory+T+cell+establishment+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cellular interactions in resident memory T cell establishment and function.</a> Curr Opin Immunol. 74, 68-75 (2022).</li>
<li>Ulibarri, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+organoid+supports+resident+memory+CD8+T+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Epithelial organoid supports resident memory CD8 T cell differentiation.</a> Cell Rep. 43 (8), 114621(2024).</li>
<li>Evrard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+protein+expression+profiling+resolves+circulating+and+resident+memory+T+cell+diversity+across+tissues+and+infection+contexts%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Single-cell protein expression profiling resolves circulating and resident memory T cell diversity across tissues and infection contexts.</a> Immunity. 56 (7), 1664-1680.e9 (2023).</li>
<li>Borges da Silva, H., Wang, H., Qian, L. J., Hogquist, K. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ARTC2.2%2FP2RX7+Signaling+during+Cell+Isolation+Distorts+Function+and+Quantification+of+Tissue-Resident+CD8%2B+T+Cell+and+Invariant+NKT+Subsets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">ARTC2.2/P2RX7 Signaling during Cell Isolation Distorts Function and Quantification of Tissue-Resident CD8+ T Cell and Invariant NKT Subsets.</a> J Immunol. 202 (7), 2153-2163 (2019).</li>
<li>Künzli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lived+T+follicular+helper+cells+retain+plasticity+and+help+sustain+humoral+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Long-lived T follicular helper cells retain plasticity and help sustain humoral immunity.</a> Sci Immunol. 5 (45), eaay5552(2020).</li>
<li>Kang, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+induced+alveolar+assembloids+with+functional+alveolar-like+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Generation of induced alveolar assembloids with functional alveolar-like macrophages.</a> Nat Commun. 16, 3346(2025).</li>
<li>Lin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+gastrointestinal+assembloids+to+study+the+interplay+between+epithelial+crypts+and+their+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Establishment of gastrointestinal assembloids to study the interplay between epithelial crypts and their mesenchymal niche.</a> Nat Commun. 14, 3025(2023).</li>
<li>Park, S. E., Georgescu, A., Huh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids-on-a-chip%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Organoids-on-a-chip.</a> Science. 364 (6444), 960-965 (2019).</li>
<li>Quintard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microfluidic+platform+integrating+functional+vascularized+organoids-on-chip%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A microfluidic platform integrating functional vascularized organoids-on-chip.</a> Nat Commun. 15, 1452(2024).</li>
<li>Vincenti, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+memory+CD8%2B+T+cells+cooperate+with+CD4%2B+T+cells+to+drive+compartmentalized+immunopathology+in+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident memory CD8+ T cells cooperate with CD4+ T cells to drive compartmentalized immunopathology in the CNS.</a> Sci Transl Med. 14 (640), eabl6058(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Solución acuosa de paraformaldehído al 16%</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>15710-S</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultivo de poliestireno no tratadas de múltiples pozos de 24 pozos</td><td>VWR Internacional</td><td>10861-558</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoetanol</td><td>Gibco</td><td>21985023</td><td></td></tr><tr><td>3 mL de jeringuillas estériles</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-457</td><td></td></tr><tr><td>5 mL, y nbsp; Snap Cap, &nbsp; Tubos de ensayo de poliestireno estériles y con fondo redondeado</td><td>Halcón</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri de 60 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713A&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>70 y mu; Filtros celulares estériles</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>Microplacas de fondo redondeado de poliestireno no tratado de 96 pozos</td><td>Greiner Bio-One</td><td>650101</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultivo de tejido múltiple de pozo no tratadas de poliestireno de 96 pozos</td><td>VWR Internacional</td><td>10861-562</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina bovina/fracción V</td><td>Química Termocientífica</td><td>J6465518</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de amonio</td><td>Fisher Scientific</td><td>A661-500</td><td></td></tr><tr><td>Anfotericina B&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9528-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento B-27</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Lector multimodo de imagen de celdas ioTek Cytation 5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 1:1 Medium</td><td>Cytiva</td><td>SH30271. FS</td><td></td></tr><tr><td>Solución de sal tamponada con fosfato de Dulbecco 1x</td><td>Corning</td><td>21031CV</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilendediaminético tetraacético (solución 0,5 M/pH 8,0)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2482-500</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras Micro Disecadoras Extra Finas</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Suero bovino fetal - Tratado con carbón vegetal/Dextrán</td><td>R& Sistemas D</td><td>S11650</td><td></td></tr><tr><td>Software Flowjo v10</td><td>Becton, Dickinson y Compañía</td><td>FlowJo (RRID:SCR_008520)</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas Graefe</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>Solución HEPES</td><td>Cytiva</td><td>SH30237.01</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamina (200 mM)</td><td>Gibco</td><td>A2916801</td><td></td></tr><tr><td>Magnet 5mL</td><td>Bioleyenda</td><td>480019</td><td></td></tr><tr><td>Mouse CD8 Na&iuml; Kit de aislamiento de células T ve</td><td>Bioleyenda</td><td>480044</td><td></td></tr><tr><td>Proteína recombinante EGF del ratón</td><td>Gibco</td><td>315091MG</td><td></td></tr><tr><td>Solución de aminoácidos no esenciales (100 veces)</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Solución de penicilina-estreptomicina</td><td>Cytiva</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato de potasio</td><td>MP Biomedicina</td><td>0215255780</td><td></td></tr><tr><td>CD3 y epsilón antiratón purificado; Anticuerpo</td><td>Bioleyenda</td><td>100360</td><td></td></tr><tr><td>Ratón recombinante B7.1 (CD80)-Fc Chimera (sin portadora)</td><td>Bioleyenda</td><td>555406</td><td></td></tr><tr><td>Ratón recombinante IL-12 (p70) (sin portador)</td><td>Bioleyenda</td><td>577004</td><td></td></tr><tr><td>Ratón recombinante IL-2 (sin portador)</td><td>Bioleyenda</td><td>575406</td><td></td></tr><tr><td>Extracto de membrana basal con factor de crecimiento reducido</td><td>R& Sistemas D</td><td>BME001-10</td><td></td></tr><tr><td>Medios RPMI 1640</td><td>Cytiva</td><td>SH30027.LS</td><td></td></tr><tr><td>Azida de sodio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S227I-25</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato de sodio (100 mM)</td><td>Gibco</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina 0,25% proteasa con tripsina porcina</td><td>Cytiva</td><td>SH30042.02</td><td></td></tr><tr><td>Tinte de viabilidad (Rojo 780)</td><td>Cytek Biosciences</td><td>13-0865-T100</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro diferenciación residente de células t cd8 con memoria usando el sistema de cocultivo organoide-célula t epitelial

In Vitro Resident Memory CD8 T Cell Differentiation Using Epithelial Organoid-T Cell Co-culture System

In Vitro Diferenciación residente de células T CD8 con memoria usando el sistema de cocultivo organoide-célula T epitelial

Barrier mucosal tissues play an important role in the differentiation and function of resident T cells. Among the diverse cell populations within these ...

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Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Este protocolo explica cultura organoid-Lgr5 positve primaria y la posterior ejecución de la transducción retroviral. Esto permite la sobreexpresión Cre-inducible o caída del transgén entregado y permite estudios funcionales que se llevarán a cabo en la novela en organotípico vitro   sistema modelo.

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Las células madre embrionarias de ratón pueden diferenciarse a células T in vitro utilizando el sistema de cocultivo OP9-DL1. El éxito en este procedimiento requiere una atención cuidadosa al mantenimiento del reactivo/célula y a los pasos sensibles de la técnica clave. Aquí discutimos estos parámetros críticos y proporcionamos un protocolo detallado para fomentar la adopción de esta tecnología.

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3D organotípicos Co-cultura de apoyo medular tímica epitelial proliferación celular, la diferenciación y la Expresión Génica Promiscuo Modelo

Este artículo describe un método novedoso para generar antígenos tumorales inducidos por células madre pluripotentes inducidas por antígenos timáticos (iTE) por un sistema de cultivo timico tridimensional (3D). iTE son un subconjunto homogéneo de células T estrechamente relacionadas con células T ingenuas con la capacidad de proliferación, formación de la memoria y supresión tumoral.

Un sistema de cultivo timático tridimensional para generar emigrantes timémicos específicos de células madre pluripotentes inducidos por la murino

Utilizando sistemas de cultivo de múltiples pasos, Divulgamos un in vitro células B al modelo de diferenciación de la célula de plasma.

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Aquí, describimos la preparación de monocapas epiteliales intestinales derivadas de organoides humanos para estudiar la función de barrera intestinal, la permeabilidad y el transporte. Como los organoides representan la respuesta original del tejido epitelial a los estímulos externos, estos modelos combinan las ventajas de la capacidad de expansión de las líneas celulares y la relevancia y complejidad del tejido primario.

Monocapa epitelial derivada de organoides: un modelo in vitro clínicamente relevante para la función de barrera intestinal

Este protocolo ofrece instrucciones detalladas para establecer organoides murinos del intestino delgado, aislar las células linfoides innatas tipo 1 de la lámina propia del intestino delgado murino y establecer cocultivos tridimensionales (3D) entre ambos tipos de células para estudiar las interacciones bidireccionales entre las células epiteliales intestinales y las células linfoides innatas tipo 1.

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Establecimiento de un sistema de cocultivo de organoides tumorales colorrectales derivados de pacientes y linfocitos infiltrantes de tumores (TIL)

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Aprende a diferenciar células T CD8 residentes con memoria mediante un sistema de cocultivo organoide-célula T epitelial. Este método permite estudiar respuestas inmunitarias in vitro sin depender de modelos animales.

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