Ultrasonografía Doppler para imágenes en vivo y cuantificación de la función vascular ovárica en ratones

Esta investigación tiene como objetivo caracterizar el flujo sanguíneo ovulatorio ovárico en orina mediante un método in vivo no invasivo. El campo carece de métodos no invasivos para estudiar la remodelación vascular ovárica en tiempo real sin alterar la fisiología normal en ratones. Para empezar, encienda la corriente principal situada en la parte trasera del sistema de imagen.

Después de que el sistema arranque, activa el interruptor de espera del ordenador en el lado izquierdo del cartucho para activar el monitor y el ordenador. Conecta el transductor MS700 al puerto transductor activo de la unidad de imagen situada en el puerto más a la derecha. Alinea el pasador de bloqueo del conector del transductor con la muesca del puerto.

Empuja el conector completamente y gira la palanca de bloqueo en posición vertical para asegurarlo. Inicia el software de análisis haciendo clic en el icono del software. Haz clic en Nuevo para crear un nuevo estudio y elige el nombre adecuado en el menú desplegable.

En la ventana de Información de Estudio, introduzca el nombre del estudio y nombre de la serie. El paquete de aplicación es ovario y el paquete de medición es vascular. Una vez que el programa se abre y el transductor se detecta automáticamente, selecciona el paquete de aplicación de ovarios.

Después, aplica una pequeña cantidad de crema para electrodos en cada uno de los electrodos para asegurar el contacto adecuado y monitorizar la frecuencia cardíaca. Una vez que el animal está completamente sedado, redirije el flujo de gas abriendo la llave de paso hacia el cono nariz de la plataforma de imagen y cerrando la llave de la cámara de inducción. Transfiere suavemente el ratón a la plataforma de imagen calefactada.

Coloca al ratón en posición prona con el lado dorsal hacia arriba y asegura el cono nasale sobre su nariz para mantener la anestesia. Pega cada pie de la crema de electrodos en la almohadilla correspondiente para monitorización fisiológica. Aplica pomada oftálmica en los ojos para evitar el sequeo corneal durante la anestesia.

Confirma la profundidad adecuada de anestesia usando el método del reflejo de pellizco en los dedos. Controla los signos vitales del animal, como la frecuencia de respiración y el latido cardíaco, los movimientos que indican molestias y la temperatura de la plataforma cada cinco minutos. A continuación, afeita el cuadrante inferior derecho de la espalda usando una afeitadora eléctrica desde la extremidad trasera derecha hasta la línea media, manteniéndose lateral a la columna.

Aplica una capa fina de crema depilante corporal. Al cabo de un minuto, limpia bien la crema con gasas húmedas. Luego, aplica una capa generosa y uniforme de gel de ultrasonido en la zona afeitada.

Coloca la sonda transductora en modo transversal respecto al ratón sobre el soporte mecánico con la muesca de orientación orientada hacia la izquierda del operador. Fija la sonda en su sitio usando la abrazadera. Pulsa la tecla Modo B en el panel de control para activar la ventana estándar de imagen en escala de grises.

Asegúrate de que el ratón y la plataforma estén planos y que el transductor esté perpendicular a la superficie. Luego, tira de la piel hacia la izquierda y coloca el transductor cerca de la parte superior afeitada, más cerca de la línea media de la espalda. Baja el transductor suavemente sobre la zona afeitada recubierta con gel de ultrasonidos.

Alinea el borde izquierdo de la sonda con la columna vertebral y el borde derecho sobre el flanco derecho. Para identificar el ovario, primero se identifica el riñón, una gran estructura ovalada gris claro con corteza y médula. Empuja ligeramente la plataforma de imagen hacia la cabeza del ratón para revelar el ovario y el tejido adiposo periovárico.

Pulsa el botón de Cine Store para capturar el vídeo en Modo B. Ahora, pulsa la tecla de Modo Doppler de Potencia en el panel de control para visualizar vasos sanguíneos con alta sensibilidad a flujos a baja velocidad. Ajusta la ganancia Doppler a 32 a 55 decibelios, la sensibilidad a 5, el rango dinámico a 15 DR y la velocidad a un kilohercio.

Mueve la plataforma suavemente hacia adelante y hacia atrás para obtener la mejor vista de la vasculatura ovárica e identificar la arteria ovárica que entra en el hilo ovárico, los vasos medulares en la médula central y los vasos corticales alrededor de los folículos en desarrollo. Pulsa Cine Store para guardar el vídeo mostrado del ovario y la vasculatura en modo Power Doppler. Para distinguir el flujo arterial del venoso, pulse Modo Doppler de color.

El rojo muestra el flujo hacia el transductor y el azul fluye hacia el exterior. El vaso con mayor velocidad media es la arteria ovárica. Pulsa el botón Doppler de Pulsed Wave PW para mostrar las líneas de fecha de muestra.

Pulsa de nuevo para activar la Forma de Onda Espectral Doppler. Después de posicionar la compuerta de muestra en el centro del lumen del recipiente, ajusta el ángulo de insonación para que sea menor o igual a 60 grados y paralelo al flujo usando el mando de ángulo. Para la arteria ovárica, coloca la compuerta justo antes de que entre en el ovario.

Para el vaso medular, colócalo en la bifurcación central. Para los vasos corticales, colócalo en la base de un folículo en crecimiento. Pulsa Cine Store para guardar tanto la imagen de ultrasonido como la forma de onda espectral.

Cuando termines la imagen, limpia el gel de ecografía de la parte trasera y retira suavemente el ratón de la plataforma. Y coloca el ratón en una almohadilla térmica hasta que esté completamente despierto. La imagen Doppler de potencia reveló un aumento visible en la profusión dentro de los vasos medulares una hora después de la inyección humana de gonadotropina coriónica, seguido de un regreso a la línea base a las ocho horas y una disminución adicional a las 12 horas tras la inyección.

La imagen Doppler en color permitió diferenciar claramente la arteria ovárica y la vena ovárica y mejoró la visualización de la dirección del flujo dentro de los vasos ováricos. Las formas de onda Doppler PW representativas mostraron ciclos distintos con velocidades sistólicas máximas y diastólicas terminales medibles en la arteria ovárica de un ratón hormonalmente responsivo, mientras que un ratón no responsivo mostró trazas de señal bajas sin forma de onda detectable. Una hora después de la inyección humana de gonadotropina coriónica, la velocidad del flujo sanguíneo aumentó en la arteria ovárica, los vasos medulares y los vasos corticales en ratones que respondieron a la estimulación, pero no se observó ningún aumento en el ratón no responsivo.

En ratones no responsivos, la velocidad en los vasos corticales descendió por debajo del umbral de detección en puntos temporales seleccionados indicados por valores provisionales asignados. Mediante ecografía Doppler, determinamos que la velocidad del flujo sanguíneo ovárico aumenta rápidamente tras el aumento de DLH en ratones. La ecografía Doppler permite una evaluación repetida y no invasiva de la hemodinámica ovárica durante el periodo preovulatorio, algo que otros métodos no pueden lograr.

Tras caracterizar la hemodinámica preovulatoria normal, estudios futuros pueden ahora utilizar este protocolo para examinar las alteraciones del flujo sanguíneo en modelos de trastornos ováricos como el SOP.