Name: Disección de los músculos de vuelo indirecto de Drosophila melanogaster para enfoques de microscopía (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-07T14:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Aprende a diseccionar músculos de vuelo indirecto de Drosophila melanogaster para microscopía confocal. Este protocolo optimizado preserva la estructura sarcomérica y permite analizar la localización proteica durante la miogénesis.

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<table><tbody><tr><td>Platos de cultivo de tejidos de 60 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012921</td><td>60 mm, poliestireno</td></tr><tr><td>Ácido acético, glacial (Certificado ACS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38S-212</td><td></td></tr><tr><td>Trifosfato de adenosina (ATP)</td><td>Millipore Sigma</td><td>A1852</td><td></td></tr><tr><td>Papel de aluminio, de alta resistencia</td><td>Amazon</td><td></td><td>12 pulgadas. x 1000 pies.</td></tr><tr><td>Platos de disección de silicio negro: polvo de carbón activado</td><td>Millipore Sigma</td><td>C9157</td><td>También disponible en la mayoría de las farmacias</td></tr><tr><td>Platos de disección de silicona negra: Sylgard 184</td><td>Millipore Sigma</td><td>761036</td><td>Para hacer platos de silicona para diseccionar, combina los componentes de Sylgard en una bolsa ziploc y mezcla bien. Añade carbón activado en polvo (~200 mg) a Sylgard (~50 g), mezcla bien, corta la esquina de la bolsa, llena platos de cultivo de 60 mm, elimina las burbujas con la punta de una pipeta y cura durante la noche.</td></tr><tr><td>Bandeja de diapositivas de cartón, Research Products International Corp</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-136-7558</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocal, confocal invertida Nikon AXR</td><td>Nikon</td><td></td><td><a href="http://www.microscope.healthcare.nikon.com/">www.microscope.healthcare.nikon.com/</a></td></tr><tr><td>Microscopio confocal, Zeiss LSM 780 confocal invertido</td><td>Zeiss</td><td></td><td><a href="http://www.zeiss.com/">www.zeiss.com</a></td></tr><tr><td>Cámara de Cría de Insectos Darwin (Incubadora)</td><td>Fisher Scientific/Cámaras de Darwin</td><td>IN034</td><td>Incubadora con control de luz, temperatura y humedad</td></tr><tr><td>plato de disección (vidrio negro)</td><td>Mikroskop Technik Diethelm</td><td>398011</td><td>Lymphbecken (cuencos para teñir/tanques linfáticos), vidrio negro, 4x4 cm, con cubierta de cristal transparente</td></tr><tr><td>Pinzas Dumont #3</td><td>Herramientas Científicas Fines</td><td>11231-30</td><td>Pinza Dumoxel con punta recta de 12 cm con punta de 0,17 x 0,1 mm;</td></tr><tr><td>Pinzas Dumont #5</td><td>Herramientas Científicas Fines</td><td>11252-20</td><td>Pinzas de punta recta Inox de 11 cm, grado biológico con punta de 0,05 x 0,02 mm y nbsp;</td></tr><tr><td>EGTA (Ácido Egtázico)</td><td>Millipore Sigma</td><td>324626</td><td></td></tr><tr><td>Etanol, absoluto (200 grados)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP28184</td><td>Grado de Biología Molecular</td></tr><tr><td>Vidrio de cubierta premium Fisherbrand (18 x 18 mm), cubiertas</td><td>Fisher Scientific</td><td>12548A</td><td>Vidrio cuadrado, grosor #1 (0,13 - 0,16 mm)</td></tr><tr><td>Vidrio de cubierta premium Fisherbrand (22 x 22 mm), cubiertas</td><td>Fisher Scientific</td><td>12548B</td><td>Vidrio cuadrado, grosor #1 (0,13 - 0,16 mm)</td></tr><tr><td>Placas de cultivo celular de fondo plano (24 pozos)</td><td>Fisher Scientific</td><td>7200740</td><td></td></tr><tr><td>cámara de microscopio fluorescente disecante, cámara Infinity8</td><td>Teledyne (Visual Dynamix)</td><td></td><td>6 megapíxeles, con poca luz, monocromático</td></tr><tr><td>Fly: Smn[E33]</td><td></td><td></td><td>Stock de mosca; donación de Gregorio Matera</td></tr><tr><td>Volar: w[1118]</td><td>Centro de Ganado de Bloomington</td><td>RRID:BDSC_3605</td><td>Material de mosca</td></tr><tr><td>glicerol</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP229-1</td><td>Grado de Biología Molecular</td></tr><tr><td>Solución glioxal (40 % en peso en H2O)</td><td>Millipore Sigma</td><td>128465</td><td>&nbsp; Esta es una solución estándar al 40%</td></tr><tr><td>Software de procesamiento de imágenes, Affinity Designer 2</td><td>Afinidad</td><td></td><td>https://affinity.serif.com/en-us/</td></tr><tr><td>Software de procesamiento de imágenes, Image J (Fiyi)</td><td>ImageJ2</td><td></td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td></tr><tr><td>Pins para insectos</td><td>Herramientas Científicas Fines</td><td>26002-10</td><td>Acero inoxidable, 0,1 mm de diámetro (pinos Minutien)</td></tr><tr><td>Cloruro de Magnesio (MgCl2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AA12315A1</td><td></td></tr><tr><td>Metanol (HPLC)</td><td>Fisher Chemical (Fisher Scientific)</td><td>A452-4</td><td>¿Relajarse a -20? Antes de su uso</td></tr><tr><td>Portaobjetos de microscopio, esmerilado</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-400</td><td>Área de escritura, sin carga, 75 mm x 25 mm x 1 mm</td></tr><tr><td>Láminas de microscopio, vidrio liso</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-4</td><td>Prelimpiada, 75 mm x 25 mm</td></tr><tr><td>Láminas microtome MX35 Ultra</td><td>epredia (Fisher Scientific)</td><td>3053835</td><td>Perfil bajo, 34 º ángulo de corte; Las cuchillas C35 feather de 80 mm funcionan bien</td></tr><tr><td>Esmalte de uñas, transparente (Sally Hansen Xtreme Wear Nail Polish)</td><td>Amazon</td><td></td><td>0,4 fl. oz.</td></tr><tr><td>Suero normal de cabra</td><td>Millipore Sigma</td><td>S26-LITROS</td><td></td></tr><tr><td>Nutator (Mini balancino nutante, benchmark)</td><td>Midwest Scientific</td><td>H3D1020</td><td>24 rpm, fija; 8 x 6 pulgadas. Plataforma con esterilla con hoyuelos</td></tr><tr><td>Pincel (Ronda nº 0)</td><td>Amazon</td><td></td><td>Pincel redondo nº 0 o similar de cualquier material artístico</td></tr><tr><td>Paraformaldehído (PFA)</td><td>Millipore Sigma</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS): KCl</td><td>Millipore Sigma</td><td>529552-250GM</td><td>Preparar PBS según el Protocolo de Cold Spring Harb; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS): KH2PO4</td><td>Millipore Sigma</td><td>P0662-500G</td><td>Preparar PBS según el Protocolo de Cold Spring Harb; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS): Na2HPO4</td><td>Millipore Sigma</td><td>S9763-500G</td><td>Preparar PBS según el Protocolo de Cold Spring Harb; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS): NaCl</td><td>Fisher Chemical (Fisher Scientific)</td><td>S271-1</td><td>Preparar PBS según el Protocolo de Cold Spring Harb; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Puntas de pipeta PR1MA (10 y micro; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR10XLRK-NS</td><td>Universal 10 y micro; Puntas de la pipeta en L</td></tr><tr><td>Puntas de pipeta PR1MA (1000 y micro; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR-1000RK-FL</td><td>Universal 1000 & micro; Puntas de la pipeta en L</td></tr><tr><td>Puntas de pipeta PR1MA (200 y micro; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR-200RK-NS</td><td>Universal 200 y micro; Puntas de la pipeta en L</td></tr><tr><td>Rodamina-Faloidina</td><td>Invitrogen, Sondas Moleculares</td><td>R415</td><td></td></tr><tr><td>Cinta adhesiva escocesa de doble cara</td><td>Scotch/3M (Grapas)</td><td>649280</td><td>Ambos lados recubiertos con adhesivo, 0,5" x 7 yardas, disponibles en la mayoría de los manipuladores de material de oficina</td></tr><tr><td>Dihidrógeno fosfato de sodio dihidratado (NaH2PO4)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAA1131636</td><td></td></tr><tr><td>Software: GraphPad Prism</td><td>GraphPad Prism</td><td></td><td><a href="http://www.graphpad.com/">www.graphpad.com</a></td></tr><tr><td>Software: Infinity Analysis 7</td><td>Teledyne (Visual Dynamix)</td><td></td><td><a href="https://www.teledynevisionsolutions.com/products/infinity-analyze/">https://www.teledynevisionsolutions.com/products/infinity-analyze/</a></td></tr><tr><td>Software: Microscoft Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td>https://www.microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel</td></tr><tr><td>Limpiaparabrisas delicados de tarea Kimtech Science Kimwipes, 1 capa</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666</td><td>Toallitas de pañuelo estándar</td></tr><tr><td>Pipeta de transferencia</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-9AMMD</td><td>Pipeta de plástico</td></tr><tr><td>Trition X-100</td><td>Millipore Sigma</td><td>T9284-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de muelle Vannas</td><td>Herramientas Científicas Fines</td><td>15000-00</td><td>Filo de corte de 3 mm, diámetro de punta 0,05 mm, longitud 8 cm</td></tr><tr><td>Vectashield con DAPI</td><td>Laboratorios Vector</td><td>H-2000</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield sin DAPI</td><td>Laboratorios Vector</td><td>H-1900</td><td></td></tr><tr><td>Papel Whatman</td><td>Millipore Sigma</td><td>WHA1004070</td><td>Círculos de papel de filtro, grado 4, 70 mm</td></tr><tr><td>Microscopio estéreo fluorescente de disección Z10</td><td>Visual Dynamix (Midwest Scientific)</td><td></td><td>http://www.visualdynamix.net/</td></tr><tr><td>Microscopio ergonómico de disección con zoom estéreo Z850</td><td>Visual Dynamix (Midwest Scientific)</td><td></td><td>http://www.visualdynamix.net/</td></tr></tbody></table>

disección de los músculos de vuelo indirecto de drosophila melanogaster para enfoques de microscopía

Dissection of Drosophila melanogaster Indirect Flight Muscles for Microscopy Approaches

Disección de los músculos de vuelo indirecto de Drosophila melanogaster para enfoques de microscopía

The indirect flight muscles (IFMs) of Drosophila melanogaster are a powerful genetic model to explore foundational principles of myogenesis. The ...

dissection-drosophila-melanogaster-indirect-flight-muscles-for

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Drosophila larval NMJ Disección

Identificación de los mecanismos que subyacen a daño muscular es crucial. Aquí se presenta la técnica histológica para la preparación de parafina y las secciones congeladas de los músculos torácicos Drosophila. Esto permite el análisis de la morfología del músculo y la localización de las proteínas y otros componentes de la célula muscular.

Las secciones incluidas en parafina y congeladas de Drosophila Los músculos de Adultos

La disección y la imagen de zonas activas en el Drosophila La unión neuromuscular

Los músculos de vuelo de Drosophila se utilizan como sistema modelo para el desarrollo muscular y la fisiología. Este video describe la musculatura de vuelo de los adultos y destaca un protocolo para diseccionar músculos de vuelo indirecto en desarrollo que son adecuados para la secuenciación de ARN de pupas.

Drosophila Disección del músculo de vuelo indirecto (IFM) de la pupa tardía: un método para la recolección de tejido de alto rendimiento

Este video muestra un protocolo para evaluar la integridad estructural de las uniones neuromusculares en los músculos longitudinales dorsales de Drosophila. El procedimiento consiste en teñir neuronas y músculos con dos anticuerpos distintos y comparar los patrones de fluorescencia entre moscas mutantes y salvajes. Una reducción en la tinción neuronal en moscas mutantes indica neurodegeneración, mientras que la estructura muscular permanece intacta.

Evaluación de la integridad estructural de las uniones neuromusculares del músculo longitudinal dorsal en Drosophila

Los estudios de la morfogénesis neuronal utilizando Drosophila arborización dendrítica larval (DA) se benefician de las neuronas en la visualización in situ de las proteínas neuronales y epidérmicas por inmunofluorescencia. Se describe un procedimiento que mejora el análisis de inmunofluorescencia de DA neuronas y las células epidérmicas que rodean mediante la eliminación de tejido muscular de la pared del cuerpo de la larva.

Eliminación de<em&gt; Drosophila</em&gt; Tejido muscular de larvas Filetes para el análisis de inmunofluorescencia de las neuronas sensoriales y las células epidérmicas

Se presenta un método para cuantificar el área del músculo, que es un método indirecto para determinar la masa muscular en adultos del Drosophila . Demostramos la aplicación de nuestra metodología, analizando el vuelo indirecto los músculos en un modelo de Drosophila de la enfermedad de la distrofia miotónica.

Determinación de zona óptica transversal muscular de los músculos de vuelo indirectos adultos de Drosophila Melanogaster

El músculo de vuelo drosofífia es un modelo potente para estudiar la regulación transcripcional, el empalme alternativo, el metabolismo y la mecanobiología. Presentamos un protocolo para la disección del músculo de vuelo con etiqueta fluorescente a partir de pupas vivas para generar muestras altamente enriquecidas ideales para la proteómica y la secuenciación profunda. Estas muestras pueden ofrecer importantes perspectivas mecanicistas sobre diversos aspectos del desarrollo muscular.

Disección de los músculos de vuelo de Drosophila melanogaster para los enfoques de Omics

Se presenta un protocolo que permite la visualización de Drosophila melanogaster intacta en cualquier etapa de desarrollo mediante tomografía microinformada.

Imágenes en animales enteros de Drosophila melanogaster mediante tomografía microcomputada

Este informe proporciona un nuevo procedimiento de preparación de muestras para visualizar las uniones neuromusculares en larvas de Drosophila . Este método es más eficaz para evitar el enroscamiento de las muestras en comparación con el método tradicional y es particularmente útil para el análisis ultraestructural de la unión neuromuscular de Drosophila .

Optimización del proceso de preparación de muestras para la microscopía electrónica de transmisión de uniones neuromusculares en larvas de Drosophila

Drosophila es un modelo bien establecido para estudiar moléculas clave que regulan la miogénesis. Sin embargo, los métodos actuales son insuficientes para determinar la dinámica transcripcional del ARNm y la distribución espacial dentro de los sincitios. Para abordar esta limitación, optimizamos un método de hibridación in situ de fluorescencia de ARN que permite la detección y cuantificación de ARNm a escala de una sola molécula.

Estudio de la dinámica transcripcional muscular a escalas de una sola molécula en Drosophila

Aprende a diseccionar músculos de vuelo indirecto de Drosophila melanogaster para microscopía confocal. Este protocolo optimizado preserva la estructura sarcomérica y permite analizar la localización proteica durante la miogénesis.

Disección de los músculos de vuelo indirecto de Drosophila melanogaster para enfoques de microscopía

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