Name: Tinción con peroxisomas en células de mamíferos utilizando sondas específicas de peroxisomas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-19T13:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Aprende a teñir peroxisomas en células de mamíferos utilizando sondas fluorescentes PeroxiSPY. Este protocolo permite visualizar estos orgánulos en células vivas y fijadas para estudiar su dinámica.

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<ol><li>Kassmann, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+peroxisomes+-+essential+organelles+for+the+maintenance+of+white+matter+in+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Myelin peroxisomes - essential organelles for the maintenance of white matter in the nervous system.</a> Biochimie. 98, 111-118 (2014).</li>
<li>van den Bosch, H., Schutgens, R. B., Wanders, R. J., Tager, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemistry+of+peroxisomes%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biochem%22%5BJournal%5D)">Biochemistry of peroxisomes.</a> Annu Rev Biochem. 61, 157-197 (1992).</li>
<li>Aubourg, P., Wanders, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peroxisomal+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Handb+Clin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Peroxisomal disorders.</a> Handb Clin Neurol. 113, 1593-1609 (2013).</li>
<li>Honsho, M., Okumoto, K., Tamura, S., Fujiki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peroxisome+biogenesis+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Peroxisome biogenesis disorders.</a> Adv Exp Med Biol. 1299, 45-54 (2020).</li>
<li>Korotkova, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+fatty+acid+conjugates+for+live+cell+imaging+of+peroxisomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Fluorescent fatty acid conjugates for live cell imaging of peroxisomes.</a> Nat Commun. 15, 4314(2024).</li>
<li>Bezman, L., Moser, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+X-linked+adrenoleukodystrophy+and+the+relative+frequency+of+its+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Genet%22%5BJournal%5D)">Incidence of X-linked adrenoleukodystrophy and the relative frequency of its phenotypes.</a> Am J Med Genet. 76 (5), 415-419 (1998).</li>
<li>Visser, W. F., van Roermund, C. W., Ijlst, L., Waterham, H. R., Wanders, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolite+transport+across+the+peroxisomal+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Metabolite transport across the peroxisomal membrane.</a> Biochem J. 401 (2), 365-375 (2007).</li>
<li>Matsuzono, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+PEX19%3A+cDNA+cloning+by+functional+complementation%2C+mutation+analysis+in+a+patient+with+Zellweger+syndrome%2C+and+potential+role+in+peroxisomal+membrane+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Human PEX19: cDNA cloning by functional complementation, mutation analysis in a patient with Zellweger syndrome, and potential role in peroxisomal membrane assembly.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (5), 2116-2121 (1999).</li>
<li>Borisyuk, A., Howman, C., Pattabiraman, S., Kaganovich, D., Amen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+Kinase+C+promotes+peroxisome+biogenesis+and+peroxisome-endoplasmic+reticulum+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Protein Kinase C promotes peroxisome biogenesis and peroxisome-endoplasmic reticulum interaction.</a> J Cell Biol. 224 (9), e202505040(2025).</li>
<li>Gould, S. G., Keller, G. A., Subramani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+peroxisomal+targeting+signal+at+the+carboxy+terminus+of+firefly+luciferase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification of a peroxisomal targeting signal at the carboxy terminus of firefly luciferase.</a> J Cell Biol. 105 (6 Pt 2), 2923-2931 (1987).</li>
<li>Lukinavicius, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+near-infrared+fluorophore+for+live-cell+super-resolution+microscopy+of+cellular+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem%22%5BJournal%5D)">A near-infrared fluorophore for live-cell super-resolution microscopy of cellular proteins.</a> Nat Chem. 5 (2), 132-139 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Anticuerpo anti-PEX14</td><td>Proteintech</td><td>10594-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio Confocal</td><td>Nikon</td><td>A1r</td><td>Cualquier microscopio confocal con un objetivo de alto NA, por ejemplo, 60x aceite NA1.4</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Pan Biotech</td><td>&nbsp; P04-03590</td><td>Medios de cultivo celular</td></tr><tr><td>Placas de imagen con fondo de vidrio</td><td>Cellvis</td><td>D35C4-20-1.5-N</td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-Rabbit Alexa Fluor 488&nbsp;</td><td>ABCAM</td><td>AB150081</td><td></td></tr><tr><td>HEK293T</td><td>ATCC</td><td>CRL-3216&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PeroxiSPY555</td><td>Espirocromo</td><td>https://spirochrome.com/product/peroxi_spy555/</td><td>&nbsp; https://doi.org/10.1038/s41467-024-48679-2</td></tr><tr><td>PeroxisPY650</td><td>Espirocromo</td><td>https://spirochrome.com/product/peroxi_spy650/</td><td>&nbsp; https://doi.org/10.1038/s41467-024-48679-2</td></tr></tbody></table>

tinción con peroxisomas en células de mamíferos utilizando sondas específicas de peroxisomas

Peroxisome Staining in Mammalian Cells Using Peroxisome-Specific Probes

Tinción con peroxisomas en células de mamíferos utilizando sondas específicas de peroxisomas

Peroxisomes are ubiquitous organelles with essential roles in human health, and their dysfunction leads to a spectrum of genetic disorders. Visualization ...

peroxisome-staining-mammalian-cells-using-peroxisome-specific

Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

La dinámica de los glicosomas en los tripanosomas africanos es difícil de estudiar mediante técnicas tradicionales de biología celular como la microscopía electrónica y de fluorescencia.  Como medio para observar el comportamiento dinámico de los orgánulos, se ha utilizado un sistema reportero de orgánulos fluorescentes junto con la citometría de flujo para monitorear la dinámica de los glucosomas en tiempo real en parásitos vivos.

El uso de proteínas fluorescentes de Seguimiento glicosoma Dinámica en el tripanosoma africano

Presentamos un protocolo para estudiar la distribución de mitocondrias y retículo endoplasmático en células enteras después de la modificación genética utilizando microscopía electrónica correlativa de luz y volumen incluyendo ascorbato peroxidasa 2 y tinción de peroxidasa de rábano picante, seccionamiento en serie de células con y sin el gen objetivo en la misma sección, y la toma de imágenes en serie a través de microscopía electrónica.

Mitocondrias y endoplasmática retícula imagen por microscopía electrónica de luz y volumen correlativa

Este protocolo describe la evaluación del estado redox subcelular específico del compartimento dentro de la célula. Una sonda fluorescente sensible al redox permite un análisis ratiométrico conveniente en las células intactas.

Evaluación de la oxidación celular utilizando una proteína fluorescente verde sensible al redox específica del compartimento subcelular

El presente protocolo describe un método para detectar especies reactivas de oxígeno (ROS) en los organoides murinos intestinales utilizando imágenes cualitativas y ensayos de citometría cuantitativa. Este trabajo se puede extender potencialmente a otras sondas fluorescentes para probar el efecto de compuestos seleccionados en ROS.

Análisis del estrés oxidativo en organoides intestinales murinos utilizando una sonda fluorogénica sensible a las especies reactivas de oxígeno

La mitofagia es el principal mecanismo de control de calidad mitocondrial. Sin embargo, la evaluación de la mitofagia in vivo se ve obstaculizada por la falta de ensayos cuantitativos fiables. Aquí se presenta un protocolo para la observación de la mitofagia en células vivas utilizando un colorante mitocondrial verde-fluorescente permean celular y un colorante lisosómico rojo-fluorescente.

Visualización de la mitofagia con tintes fluorescentes para mitocondrias y lisosomas

Este protocolo proporciona instrucciones para desencadenar y monitorear la pexofagia mediada por Stub1 en células vivas.

Monitorización de la pexofagia mediada por Stub1

Explorar la mitofagia a través de microscopía electrónica, sensores genéticos e inmunofluorescencia requiere equipos costosos, personal calificado y una inversión de tiempo significativa. Aquí, demostramos la eficacia de un kit de colorante de fluorescencia comercial para cuantificar el proceso de mitofagia tanto en Caenorhabditis elegans como en una línea celular de cáncer de hígado.

Detección de mitofagia en Caenorhabditis elegans y células de mamíferos utilizando colorantes específicos de orgánulos

El peróxido de hidrógeno (H2O2) es tanto una fuente de daño oxidativo como una molécula de señalización. Este protocolo describe cómo medir el H 2 O2mitocondrial utilizando HyPer7 dirigido a mitocondrias (mtHyPer7), un biosensor radiométrico codificado genéticamente, en levaduras vivas. Detalla cómo optimizar las condiciones de obtención de imágenes y realizar análisis cuantitativos celulares y subcelulares utilizando software de libre acceso.

Obtención de imágenes de mtHyPer7, un biosensor radiométrico para el peróxido mitocondrial, en células vivas de levadura

Este protocolo presenta un flujo de trabajo para la propagación, diferenciación y tinción de células SH-SY5Y cultivadas y neuronas primarias del hipocampo de rata para la visualización y el análisis de la ultraestructura mitocondrial mediante microscopía de agotamiento de emisiones estimuladas (STED).

Uso de imágenes de células vivas de STED para visualizar la ultraestructura de la membrana interna mitocondrial en modelos de células neuronales

El contenido de hidroperóxido lipídico representa el indicador más comúnmente utilizado de la muerte celular ferroptótica. Este artículo demuestra el análisis paso a paso de la citometría de flujo del contenido de hidroperóxido lipídico en las células tras la inducción de ferroptosis.

Revelando el fenotipo ferroptótico del meduloblastoma

Aprende a teñir peroxisomas en células de mamíferos utilizando sondas fluorescentes PeroxiSPY. Este protocolo permite visualizar estos orgánulos en células vivas y fijadas para estudiar su dinámica.

Tinción con peroxisomas en células de mamíferos utilizando sondas específicas de peroxisomas

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