Name: Un enfoque comparativo para estudios cuantitativos de recuento celular en cerebros de mamíferos muy diferentes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-16T13:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: Aprende un enfoque comparativo para el recuento celular cerebral en mamíferos de distintos tamaños. Este método permite estudiar variaciones neuronales entre especies y revelar patrones evolutivos en neurociencia.

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<ol><li>Brenowitz, E. A., Zakon, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+from+the+bottleneck%3A+benefits+of+the+comparative+approach+to+modern+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Emerging from the bottleneck: benefits of the comparative approach to modern neuroscience.</a> Trends Neurosci. 38 (5), 273-278 (2015).</li>
<li>Bolker, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+translational+research%3A+rosetta+stone+or+stumbling+block%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">Animal models in translational research: rosetta stone or stumbling block.</a> Bioessays. 39 (12), 1-8 (2017).</li>
<li>Moreno-Jiménez, E. P., Terreros-Roncal, J., Flor-García, M., Rábano, A., Llorens-Martín, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidences+for+adult+hippocampal+neurogenesis+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Evidences for adult hippocampal neurogenesis in humans.</a> J Neurosci. 41 (12), 2541-2553 (2021).</li>
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<li>Simard, S., Matosin, N., Mechawar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+hippocampal+neurogenesis+in+the+human+brain%3A+updates%2C+challenges%2C+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscientist%22%5BJournal%5D)">Adult hippocampal neurogenesis in the human brain: updates, challenges, and perspectives.</a> Neuroscientist. 31 (4), 141-158 (2024).</li>
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<li>Bonfanti, L., La Rosa, C., Ghibaudi, M., Sherwood, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+neurogenesis+and+%26%2334%3Bimmature%26%2334%3B+neurons+in+mammals%3A+an+evolutionary+tradeoff+in+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Adult neurogenesis and &#34;immature&#34; neurons in mammals: an evolutionary tradeoff in plasticity.</a> Brain Struct Funct. 229 (8), 1775-1793 (2024).</li>
<li>Paredes, M. F., Sorrells, S. F., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+size+and+limits+to+adult+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Brain size and limits to adult neurogenesis.</a> J Comp Neurol. 524 (3), 646-664 (2016).</li>
<li>Parolisi, R., Cozzi, B., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humans+and+dolphins%3A+decline+and+fall+of+adult+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Humans and dolphins: decline and fall of adult neurogenesis.</a> Front Neurosci. 12, 497(2018).</li>
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<li>Bonfanti, L., Charvet, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+plasticity+in+humans+and+model+systems%3A+advances%2C+challenges%2C+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Brain plasticity in humans and model systems: advances, challenges, and future directions.</a> Int J Mol Sci. 22 (17), 9358(2021).</li>
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<li>Rotheneichner, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+plasticity+in+the+adult+murine+piriform+cortex%3A+continuous+maturation+of+dormant+precursors+into+excitatory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Cellular plasticity in the adult murine piriform cortex: continuous maturation of dormant precursors into excitatory neurons.</a> Cereb Cortex. 28 (7), 2610-2621 (2018).</li>
<li>Sorrells, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immature+excitatory+neurons+develop+during+adolescence+in+the+human+amygdala%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Immature excitatory neurons develop during adolescence in the human amygdala.</a> Nat Commun. 10 (1), 2748(2019).</li>
<li>La Rosa, C., Parolisi, R., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((structural+plasticity%3A+from+adult+neurogenesis+to+immature+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">structural plasticity: from adult neurogenesis to immature neurons.</a> Front Neurosci. 14, 75(2020).</li>
<li>Bonfanti, L., Seki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+PSA-NCAM-positive+%26%2334%3Bimmature%26%2334%3B+neurons%3A+an+old+discovery+providing+new+vistas+on+brain+structural+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">The PSA-NCAM-positive &#34;immature&#34; neurons: an old discovery providing new vistas on brain structural plasticity.</a> Cells. 10 (10), 2542(2021).</li>
<li>Benedetti, B., Couillard-Després, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+would+the+brain+need+dormant+neuronal+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Why would the brain need dormant neuronal precursors.</a> Front Neurosci. 16, 877167(2022).</li>
<li>Luzzati, F., Bonfanti, L., Fasolo, A., Peretto, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DCX+and+PSA-NCAM+expression+identifies+a+population+of+neurons+preferentially+distributed+in+associative+areas+of+different+pallial+derivatives+and+vertebrate+species%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">DCX and PSA-NCAM expression identifies a population of neurons preferentially distributed in associative areas of different pallial derivatives and vertebrate species.</a> Cereb Cortex. 19 (5), 1028-1041 (2009).</li>
<li>Palazzo, O., La Rosa, C., Piumatti, M., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+large+brains+of+long-living+mammals+prefer+non-newly+generated%2C+immature+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Do large brains of long-living mammals prefer non-newly generated, immature neurons.</a> Neural Regen Res. 13 (4), 633-634 (2018).</li>
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<li>Pattaro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenetic+variation+of+layer+II+cortical+immature+neurons+in+dog+and+horse+confirms+covariance+with+brain+size+and+neocortical+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Phylogenetic variation of layer II cortical immature neurons in dog and horse confirms covariance with brain size and neocortical surface.</a> Brain Struct Funct. 230 (6), 115(2025).</li>
<li>Ghibaudi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consistency+and+variation+in+doublecortin+and+Ki67+antigen+detection+in+the+brain+tissue+of+different+mammals%2C+including+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Consistency and variation in doublecortin and Ki67 antigen detection in the brain tissue of different mammals, including humans.</a> Int J Mol Sci. 24 (3), 2514(2023).</li>
<li>Ben Abdallah, N. M., Slomianka, L., Vyssotski, A. L., Lipp, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+age-related+changes+in+adult+hippocampal+neurogenesis+in+C57+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Early age-related changes in adult hippocampal neurogenesis in C57 mice.</a> Neurobiol Aging. 31, 151-161 (2010).</li>
<li>Ghibaudi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+in+layer+II+immature+neurons+of+the+murine+piriform+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Age-related changes in layer II immature neurons of the murine piriform cortex.</a> Front Cell Neurosci. 17, 1205173(2023).</li>
<li>Workman, A. D., Charvet, C. J., Clancy, B., Darlington, R. B., Finlay, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+transformations+of+neurodevelopmental+sequences+across+mammalian+species%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Modeling transformations of neurodevelopmental sequences across mammalian species.</a> J Neurosci. 33 (17), 7368-7383 (2013).</li>
<li>Charvet, C. J., de Sousa, A. A., Vassilopoulos, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translating+time%3A+challenges%2C+progress%2C+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Translating time: challenges, progress, and future directions.</a> Brain Res Bull. 221, 111212(2025).</li>
<li>Bartges, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAHA+canine+life+stage+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Anim+Hosp+Assoc%22%5BJournal%5D)">AAHA canine life stage guidelines.</a> J Am Anim Hosp Assoc. 48, 1-11 (2012).</li>
<li>Ghibaudi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multispecies+characterization+of+immature+neurons+in+the+mammalian+amygdala+reveals+their+expansion+in+primates%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Multispecies characterization of immature neurons in the mammalian amygdala reveals their expansion in primates.</a> PLoS Biol. 23 (8), e3003322(2025).</li>
<li>Ghibaudi, M., Boda, E., Bonfanti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+mice+to+humans%3A+a+need+for+comparable+results+in+mammalian+neuroplasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">From mice to humans: a need for comparable results in mammalian neuroplasticity.</a> Neural Regen Res. 20 (2), 464-466 (2025).</li>
<li>Smulders, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relevance+of+brain+evolution+for+the+biomedical+sciences%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Lett%22%5BJournal%5D)">The relevance of brain evolution for the biomedical sciences.</a> Biol Lett. 5, 138-140 (2009).</li>
<li>Keck, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bridging+theory+and+experiment+in+%28statistical%29+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Bridging theory and experiment in (statistical) learning.</a> Curr Opin Neurobiol. 94, 103106(2025).</li>
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La investigación en neurociencia utiliza principalmente ratones y ratas endogámicos para trasladar los resultados a los humanos. A pesar de las numerosas similitudes moleculares, celulares e incluso anatómicas, también existen importantes diferencias entre especies, que pueden ser engañosas para la interpretación de los datospreclínicos 1,2. Aunque se necesitan estudios comparativos, se ven obstaculizados por dificultades técnicas y prácticas cuando se involucran cerebros de gran tamaño (por ejemplo, desde una media de 0,5 g en ratones hasta 1300 g en humanos; Figura 1A). Además, los enfoques experimentales heterogéneos de diferentes laboratorios pueden limitar la comparación de resultados, especialmente los análisis cuantitativos, generando a veces controversias. Este es el caso de la plasticidad estructural cerebral, con especial referencia a los procesosneurogénicos 3,4,5, un tema de interés para comprender la neuroplasticidad del desarrollo y la reparacióncerebral 6,7.
Descubrimientos recientes en el campo de la plasticidad cerebral sugieren fuertemente que durante la evolución surgieron diferencias sustanciales en la ocurrencia, tasa y localización anatómica de diferentes tipos de procesosneurogénicos. Un ejemplo es la evidente disminución de la neurogénesis impulsada por células madre que ocurre en mamíferos adultos de cerebro grande en comparación con roedoresde laboratorio 5,9,10, probablemente vinculada a diferentes expansiones de regiones cerebrales y funciones como adaptación a presionesecológicas 7,8, así como a diferentes cursos temporales delneurodesarrollo 11,12. La tasa de neurogénesis parece diferir notablemente entre ratones y humanos, lo que plantea la cuestión de la traducción13.
Por otro lado, se ha hipotetizado un tipo novedoso de "neurogénesis sin división" representado por neuronas bloqueadas en la maduración detenida (las llamadas neuronas inmaduraso latentes 14,15,16,17,18,19) que aumentará de especies de cerebro pequeño a especies de cerebro grande 20,21. Curiosamente, la población de neuronas inmaduras independiente de células madre se aloja en la corteza cerebral (un sitio de cognición de alto orden en las especies girocefálicas22,23) y lejos de los sitios neurogénicos canónicos, que están mayormente vinculados a la olfacción y la navegación espacial, que mantienen gran importancia en las especies lisencefálicas 7,8. Estas diferencias entre estructuras cerebrales y especies de mamíferos van más allá del mero interés comparativo, ya que pueden ser relevantes en la traducción al desplazar el potencial de plasticidad en ratones y humanos. Por estas razones, es crucial evaluar de manera "comparable" hasta qué punto las diferencias representan una variación filogenética entre mamíferos muy distintos, con especial referencia a roedores y primates de laboratorio.
Se describe un enfoque recientemente establecido para estudiar la variación interespecie de una población de neuronas corticales inmaduras de capa II (cINs) en mamíferos que difieren ampliamente en tamaño cerebral, girencefalia y nichosocioecológico 22,24,25. Este método se basa en tres principios: i) considerar varias especies (diversas) de mamíferos para ser procesadas en paralelo usando los mismos procedimientos; ii) minimizar variables que no pueden estandarizarse completamente en cerebros muy diferentes (procedimiento de fijación, intervalo postmortem, edad) y abordar la especificidad de los anticuerpos para inmunocitoquímica utilizando características ampliamente compartidas de la población celular estudiada como controles positivos internos; y iii) establecer estructuras anatómicas correspondientes como puntos de referencia para realizar el recuento celular sobre los niveles cerebrales correspondientes de diferentes especies (Figura 1B y Figura 2). Los datos obtenidos (por ejemplo, densidades celulares) contando células identificadas con el marcador bien establecido doublecortin (DCX 15,17,26) pueden mapearse en árboles filogenéticos para revelar patrones evolutivos y analizarse en cuanto a covarianza con diferentes parámetros, como el tamaño cerebral, la girencefalia y la superficie cortical.
<img alt="Figura 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69446/69446fig1.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 1"> 
Figura 1: Procesamiento de cerebros de mamíferos muy diferentes para evaluar la distribución y cantidad de cINs en el manto cortical. (A) Los mamíferos pertenecientes a diferentes especies y órdenes se caracterizan por tamaños cerebrales muy distintos y grados de expansión girencefálica y cortical. Iconos cerebrales reproducidos con licencia BioRender. (B) Secciones coronales representativas teñidas de azul Toluidina cortadas en cerebros de tamaños muy diferentes y extensión del manto cortical. Se utilizan secciones en serie teñidas histológicamente (corte criostatario, coronal, de 40 μm de espesor) para identificar las principales estructuras neuroanatómicas en cada especie animal (véase la Figura 3); Fíjate en las notables diferencias en el tamaño del cerebro y el perímetro cortical. Los iconos animales del panel A han sido reproducidos con permiso de La Rosa et al.22. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69446/69446fig1large.jpg" target="_blank">Por favor, haz clic aquí para ver una versión ampliada de esta figura.</a>
Finalmente, dado que todos los procesos plásticos generalmente sufren una reducción progresiva con el aumento de la edad27,28, otro problema en la neuroplasticidad comparativa es evaluar los diferentes cursos temporales de dicha reducción, que pueden estar relacionados con distintos procesos temporales de los procesos neurodesarrollativos enmamíferos 12,29,30. De hecho, la existencia de especies de maduración rápida (ratones) frente a especies de maduración lenta (primates) es otra razón por la que el sistema modelo más común, el ratón de laboratorio, está limitado a la hora de resolver desafíos en las ciencias biomédicas. El método descrito aquí también puede ser útil para considerar poblaciones celulares en diferentes edades a lo largo de la vida de cada especie y luego comparar las tendencias resultantes entre especies. Se encontraron variaciones filogenéticas en la densidad de cIN, así como diferencias en su persistencia a lo largo de las edades, entre mamíferos de cerebro pequeño y cerebrogrande 22,28.

<table><tbody><tr><td>10% formalina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>2-metilbutano y nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>320404</td><td>Isopentane</td></tr><tr><td>3,3&prime;-Diaminobenzidina tetrahidrocloruro hidratado</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5637</td><td></td></tr><tr><td>4% de paraformaldehído</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>441244</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>Ácido cítrico y nbsp;</td><td>Sigma</td><td>C0759</td><td></td></tr><tr><td>Montante DPX para histología</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; 06522</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Merck</td><td>1.00983</td><td></td></tr><tr><td>Etilenglicol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>102466</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7893</td><td></td></tr><tr><td>Solución de peróxido de hidrógeno</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Killik - Complejo O.C.T.</td><td>Bio-óptica</td><td>&nbsp; 05-9801</td><td></td></tr><tr><td>Software de mesquite</td><td>Proyecto Mesquite</td><td>Mesquite versión 3.81 (build 955)</td><td></td></tr><tr><td>Neo-mount</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.09016</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato tamponado (PB)</td><td>na</td><td>na</td><td>Hechos a medida</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>na</td><td>na</td><td>Hechos a medida</td></tr><tr><td>Hidróxido de sodio</td><td>Riedel-de Haen</td><td>6213</td><td></td></tr><tr><td>Dihidrato de fosfato sódico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71645</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de sodio monobásico dihidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71500</td><td></td></tr><tr><td>Sacarosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9378</td><td></td></tr><tr><td>Azul Toluidina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>89640</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Preadolescentes 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416</td><td></td></tr><tr><td>VECTASTAIN Elite ABC-HRP Peroxidasa (Estándar)</td><td>Laboratorios Vector</td><td>PK-6100</td><td></td></tr><tr><td>Xylol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>247642</td><td></td></tr></tbody></table>

un enfoque comparativo para estudios cuantitativos de recuento celular en cerebros de mamíferos muy diferentes

A Comparative Approach for Quantitative Cell Counting Studies in Widely Different Mammalian Brains

Las células DCX+ en la corteza cerebral de todas las especies estudiadas comparten consistentemente una serie de características que indican la existencia de una población bien conservada de neuronas indiferenciadas (Figura 4A). En resumen, están: (i) están dispuestos topográficamente para formar una monocapa a lo largo de la capa cortical II; (ii) mostrar los subtipos morfológicos descritos para diferentes etapas de maduración en neuronas inmaduras, (a) con una gran prevalencia de células p...

Un enfoque comparativo para estudios cuantitativos de recuento celular en cerebros de mamíferos muy diferentes

Most neurobiological studies are conducted on laboratory rodents. Despite many similarities across mammalian brains, important differences also exist, ...

Se descubrió que la plasticidad estructural cerebral puede ser notablemente diferente entre mamíferos. Por tanto, se requiere un análisis cuantitativo sistemático para ser revelado. Nuestro análisis sistemático de cerebros muy diferentes puede dar resultados comparables para situarlos en un contexto filogenético.Para empezar, toma un plato de 12 pozos del frigorífico de 20 grados Celsius que contiene las secciones de cerebro flotante y retira unas rodajas en una placa de Petri llena de solución PBS. Selecciona las secciones y colócalas en una diapositiva. Tras teñir histológicamente las secciones, identifica los niveles cerebrales basándose en características neuroanatómicas específicas.Defínyelo en niveles 1 a 4, usando el mismo número de secciones en serie de 40 micrómetros de grosor, y elige tres secciones coronales espaciadas de igual forma de cada nivel cerebral y realiza una tinción inmunohistoquímica. Abre el software Neurolucida en la estación de trabajo y coloca la lámina bajo el microscopio usando el objetivo seleccionado para contar células. A baja ampliación, delinea la capa cortical 2 usando la herramienta de contorno a mano libre en el menú Trazado del software.Traza el perímetro para obtener la longitud de la capa cortical 2, incluyendo tanto paleocorteza como neocorteza. Selecciona los símbolos preferidos para contar celdas desde la barra de herramientas Marcadores. Contar las células tipo 1 identificadas por un soma pequeño con forma bipolar y un diámetro soma que varía de 3 a 9 micrómetros en cada región de interés.Contar células tipo 2 identificadas por un soma más grande con arborización dendrítica compleja y un diámetro del soma que oscila entre 9 y 18 micrómetros. Ahora, recopila los datos para el análisis filogenético de la paleocorteza, la neocorteza y la corteza cerebral obtenidos combinando datos de la paleocorteza y la neocorteza. Recoge el perímetro de la capa cortical 2 medido en milímetros y visible en la barra de herramientas de mediciones de contorno en un archivo de hoja de cálculo.En la misma hoja de cálculo, recoge el número de celdas de Tipo 1 y de Tipo 2 visibles en la barra de herramientas de marcadores. Calcula y registra el número total de células añadiendo células de tipo 1 y tipo 2 para cada cerebro, región y nivel cerebral usando tres secciones por nivel, para un total de 12 secciones por muestra. Utiliza los valores recogidos para calcular la densidad lineal de celdas para cada sección de cada región dividiendo el número de celdas por el perímetro en milímetros.Calcula el porcentaje de celdas Tipo 1 y Tipo 2 dividiendo el número de celda Tipo 1 o Tipo 2 por el número total de celdas y multiplicando por 100. A continuación, calcula el porcentaje de células Tipo 1 y Tipo 2 en cada muestra usando la fórmula. Obtén el valor medio de estos porcentajes entre los cuatro especímenes considerados por especie usando la función media en la hoja de cálculo.Utilizar la densidad celular lineal para realizar análisis filogenéticos y emplear el total de células contadas en cada sección coronal para estimar el número total de neuronas inmaduras por hemisferio. Calcula el valor mediano de densidad de las 12 secciones consideradas por muestra usando la función mediana en la hoja de cálculo. Utiliza la mediana como medida central porque la muestra por grupo es relativamente pequeña y algunos grupos presentan distribuciones asimétricas.Utiliza la herramienta de contorno a mano alzada en el software Neurolucida para trazar una línea a lo largo del diámetro del soma perpendicular al eje principal. Mide al menos 100 células DCX positivas seleccionadas al azar de ambos tipos en cada especie utilizando 25 células por muestra en cada región cerebral para obtener el rango de diámetro del soma para células tipo 1 y tipo 2. Ahora, crea una lista de las especies analizadas en el bloc de notas usando sus nombres científicos.Sube la lista al árbol temporal de la web. org y exportar como un archivo NWK. En Mesquite Project Software, sube el archivo NWK, integra los datos y guarda el archivo resultante como PDF.Finalmente, en la hoja de datos creada anteriormente, añade una columna que contenga el tamaño cerebral de cada especie. Calcula el logaritmo natural de las densidades celulares positivas del DCX y el logaritmo natural del tamaño del cerebro. Realiza un análisis estadístico en el software estadístico elegido y descarga los archivos obtenidos.Introduce los residuos en una nueva columna de la hoja de datos para que se pueda crear un gráfico residual. Las células DCX positivas en la corteza cerebral de todas las especies estudiadas mostraron consistentemente una disposición topográfica que forma una monocapa a lo largo de la capa cortical 2, incluyendo predominantemente células pequeñas, unipolares o bipolares, y una fracción menor de células complejas grandes. Las células coexpresaban PSAN-NCAM y DCX sin expresión de Ki67.Y contenía una subpoblación de células complejas que expresaban NeuN. La densidad lineal de las neuronas corticales inmaduras variaba mucho entre especies. Los análisis comparativos filogenéticos mostraron que el grupo de Laurasiatheria tenía una mayor densidad de neuronas corticales inmaduras que los Euarchontoglires.Se observó una fuerte covarianza entre la densidad neuronal cortical inmadura y el volumen cerebral. Y entre la densidad neuronal inmadura cortical y el perímetro de la capa neocortical 2. Nuestros hallazgos pueden revelar compensaciones evolutivas entre diferentes tipos de plasticidad y también entre distintas regiones cerebrales.

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