Modelos murinos de epididimitis inducidos por patrones moleculares asociados a patógenos

Investigamos el impacto de la inflamación en la fisiología del epidídimo en la fertilidad masculina. Inyección precisa y compartimentada de inductores inflamatorios sin daños. El conducto epididimal en modelos murinos requiere una combinación avanzada de habilidades quirúrgicas y formación.

Para empezar, coloca al animal anestesiado en posición supina en el campo quirúrgico. Utilizando un recortador eléctrico, realiza una tricotomía del abdomen del ratón para eliminar completamente el pelo. Luego, usa algodón estéril empapado en una solución de clorhexidina al 0,25%.

Y luego con alcohol para realizar la ápsia abdominal. Con un bisturí tamaño 15, haz una incisión vertical de aproximadamente cuatro milímetros en el lado derecho de la pared abdominal. Ahora, separa suavemente la piel con pinzas quirúrgicas angulares de extremo romo.

Luego, usando el mismo bisturí, hacer otra incisión vertical de aproximadamente cuatro milímetros en el peritoneo al lado de la primera incisión. Levanta con cuidado el epidídimo en testículos desde la cavidad abdominal empujando suavemente el lado derecho del escroto. Utilizando pinzas quirúrgicas curvas, tira suavemente del tejido adiposo blanco del epidídimo para localizar el segmento inicial del epidídimo.

Con la ayuda del tejido adiposo blanco del epidídimo, expone el segmento inicial en el lugar de la incisión. A continuación, coloca la jeringuilla Hamilton precargada con la solución de inyección en un ángulo de aproximadamente 90 grados paralelo al segmento número uno del segmento inicial. Inserta cuidadosamente la aguja en el espacio intersticial con el bisel orientado hacia abajo.

Después, coloca las pinzas quirúrgicas curvas en el lugar de inserción de la aguja y pellizca suavemente la cápsula epididimal y la aguja. Presiona lentamente el émbolo de la jeringuilla hasta que se haya inyectado toda la solución del estímulo. Manteniendo las pinzas quirúrgicas curvas en su sitio, retira cuidadosamente la aguja y suelta la pinza quirúrgica curva tras aproximadamente 30 segundos.

A continuación, utilizando el tejido adiposo blanco epididimario, devuelve suavemente el tejido testicular a la cavidad abdominal. Identifica el peritoneo y ciérralo haciendo dos puntos de sutura usando un soporte de aguja y una sutura quirúrgica de talla cinco, y cierra la incisión cutánea con dos puntos de sutura. Tras la cirugía, observa al ratón para asegurar una recuperación postoperatoria adecuada.

Tras administrar anestesia, coloque al ratón en posición supina sobre el campo quirúrgico. Coloca el dedo índice y el pulgar debajo del escroto para palpar y confirmar la posición de los testículos y el epidídimo. Si es necesario, masajea suavemente los laterales del abdomen hacia el escroto para guiar los testículos y el epidídimo a su posición.

Con un recortador eléctrico, realiza una tricotomía del escroto para eliminar completamente el vello y desinfecta la zona con algodón estéril remojado en una solución de clorhexidina al 0,25% y luego con alcohol. Con el dedo índice y el pulgar por debajo del escroto, estira suavemente la piel escrotal. Utilizando un bisturí tamaño 15, realiza una incisión vertical de aproximadamente dos milímetros en la porción medial del escroto.

Ahora, mueve suavemente el testículo y el epidídimo izquierdos hacia la cavidad abdominal, manteniendo el testículo y el epidídimo derechos en el escroto. Con el índice y el pulgar situados debajo del testículo derecho y el epidídimo, mantén la piel escrotal suavemente estirada. Luego, utilizando pinzas quirúrgicas angulares de extremo romo, abre y cierra cuidadosamente las puntas sobre la fascia espermática interna para romper la fascia espermática interna y la túnica vaginal.

A continuación, alivia la presión en el dedo índice y el pulgar e inserta las pinzas quirúrgicas inclinadas a través de la abertura de la túnica vaginal hacia la base del escroto. Utilizando las pinzas, tira cuidadosamente de la grasa epidídima distal para localizar el epidídimo de la cauda. Ahora localiza el conducto deferente y coloca las pinzas quirúrgicas rectas debajo de él.

Coloca la pinza de pinza bulldog en el conducto deferente, asegurando suficiente espacio entre el epidídimo de la cauda y la pinza. Luego, coloca la jeringuilla Hamilton precargada con la solución de inyección en un ángulo de aproximadamente 10 a 15 grados paralelo al conducto deferente, e inserta la aguja en el conducto deferente con el bisel orientado hacia arriba. Apriete suavemente las pinzas quirúrgicas rectas para liberar el conducto deferente y presione lentamente el émbolo de la jeringuilla para inyectar toda la solución del estímulo.

Ahora, retira las pinzas quirúrgicas directas. Con las pinzas quirúrgicas curvas, pellizca suavemente la zona alrededor del sitio de inserción de la aguja y luego retira cuidadosamente la aguja de la jeringuilla. Tras aproximadamente 30 segundos, retira las pinzas quirúrgicas curvas y la pinza bulldog y devuelve suavemente el conducto deferente al escroto.

A continuación, identifica la túnica vaginal y ciérrala con una sutura usando un soporte de agujas y una sutura quirúrgica talla cinco-cero. Con el dedo índice, empuja suavemente el testículo y el epidídimo derecho hacia el abdomen y mueve el testículo y el epidídimo izquierdos hacia el escroto. Finalmente, cierra la incisión cutánea escrotal con dos puntos de sutura usando un soporte de agujas y suturas quirúrgicas de talla cinco-0, y observa al ratón para asegurar una recuperación postoperatoria adecuada.

La inyección intersticial en el segmento inicial hizo que el tinte azul Evans inyectado se restringiera principalmente al segmento uno durante hasta 30 minutos después de la inyección y luego se difundiera en segmentos vecinos del segmento inicial y del epidídimo capular. La inyección intravasal en el conducto deferente confinó el tinte azul de Evans dentro del lumen del segmento 10 durante hasta 30 minutos tras la inyección. Las fotomicrografías histológicas confirmaron que las inyecciones de control salino no alteraron la morfología epididimal 72 horas después del tratamiento.

La inyección intersticial de LPS en el segmento inicial indujo edema intersticial e infiltraciones intensas de células inmunitarias intersticiales, intraepiteliales e intraluminales 72 horas después del tratamiento. La inyección intervasal de LPS o LTA en el epidídimo de la cauda produjo edema intersticial y infiltraciones de células inmunitarias en los compartimentos intersticial e intraluminal 72 horas después del tratamiento. Falta de modelos animales reproducibles que estudien la inflamación epididimal localizada y su impacto en la fertilidad masculina.

La inyección regional directa de sustancias químicas inflamatorias permite un análisis preciso de las respuestas inmunitarias específicas de cada región en los resultados del epidídimo.