Name: Aislamiento de células epiteliales alveolares tipo II de pulmones murenos neonatales, juveniles y adultos adaptables a entornos experimentales infecciosos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-19T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Aprenda a aislar células epiteliales alveolares tipo II de pulmones murenos mediante citometría de flujo. Este método permite obtener altos rendimientos de células viables para estudios de infección respiratoria.

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<ol><li>Stegemann-Koniszewski, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+type+II+epithelial+cells+contribute+to+the+anti-influenza+A+virus+response+in+the+lung+by+integrating+pathogen-+and+microenvironment-derived+signals%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Alveolar type II epithelial cells contribute to the anti-influenza A virus response in the lung by integrating pathogen- and microenvironment-derived signals.</a> mBio. 7 (3), (2016).</li>
<li>Kumova, O. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severity+of+neonatal+influenza+infection+is+driven+by+type+I+interferon+and+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Severity of neonatal influenza infection is driven by type I interferon and oxidative stress.</a> Mucosal Immunol. 15 (6), 1309-1320 (2022).</li>
<li>Angelidis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+atlas+of+the+aging+lung+mapped+by+single-cell+transcriptomics+and+deep+tissue+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">An atlas of the aging lung mapped by single-cell transcriptomics and deep tissue proteomics.</a> Nat Commun. 10 (1), 963(2019).</li>
<li>Cleaver, J. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+epithelial+cells+are+essential+effectors+of+inducible+resistance+to+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lung epithelial cells are essential effectors of inducible resistance to pneumonia.</a> Mucosal Immunol. 7 (1), 78-88 (2014).</li>
<li>Boehme, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+changes+and+serotype-specific+responses+of+alveolar+type+II+epithelial+cells+to+Streptococcus+pneumoniae+in+resolving+influenza+A+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">Epigenetic changes and serotype-specific responses of alveolar type II epithelial cells to Streptococcus pneumoniae in resolving influenza A virus infection.</a> Cell Commun Signal. 23 (1), 278(2025).</li>
<li>Worrell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+structural+cells+are+altered+by+influenza+virus+leading+to+rapid+immune+protection+following+re-challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Lung structural cells are altered by influenza virus leading to rapid immune protection following re-challenge.</a> Nat Commun. 16 (1), 7061(2025).</li>
<li>Sinha, M., Lowell, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+highly+pure+primary+mouse+alveolar+epithelial+type+II+cells+by+flow+cytometric+cell+sorting%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of highly pure primary mouse alveolar epithelial type II cells by flow cytometric cell sorting.</a> Bio Protoc. 6 (22), (2016).</li>
<li>Chen, Q., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+mouse+alveolar+type+II+cells+to+study+type+II+to+type+I+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of mouse alveolar type II cells to study type II to type I cell differentiation.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100241(2021).</li>
<li>Gereke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+isolation+of+primary+murine+type+II+alveolar+epithelial+cells+for+functional+and+molecular+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric isolation of primary murine type II alveolar epithelial cells for functional and molecular studies.</a> J Vis Exp. (70), e4322(2012).</li>
<li>Avelin, V., Sissonen, S., Julkunen, I., Österlund, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+efficacy+of+H5N1+avian+influenza+virus+by+commonly+used+sample+preparation+reagents+for+safe+laboratory+practices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Inactivation efficacy of H5N1 avian influenza virus by commonly used sample preparation reagents for safe laboratory practices.</a> J Virol Methods. 304, 114527(2022).</li>
<li>Jureka, A. S., Silvas, J. A., Basler, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propagation%2C+inactivation%2C+and+safety+testing+of+SARS-CoV-2%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Propagation, inactivation, and safety testing of SARS-CoV-2.</a> Viruses. 12 (6), (2020).</li>
<li>Fukuyama, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-spectral+fluorescent+reporter+influenza+viruses+%28Color-flu%29+as+powerful+tools+for+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Multi-spectral fluorescent reporter influenza viruses (Color-flu) as powerful tools for in vivo studies.</a> Nat Commun. 6, 6600(2015).</li>
<li>Hanssen, A., Loges, S., Pantel, K., Wikman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+circulating+tumor+cells+in+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Detection of circulating tumor cells in non-small cell lung cancer.</a> Front Oncol. 5, 207(2015).</li>
<li>Autengruber, A., Gereke, M., Hansen, G., Hennig, C., Bruder, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+enzymatic+tissue+disintegration+on+the+level+of+surface+molecule+expression+and+immune+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Microbiol+Immunol+%28Bp%29%22%5BJournal%5D)">Impact of enzymatic tissue disintegration on the level of surface molecule expression and immune cell function.</a> Eur J Microbiol Immunol (Bp). 2 (2), 112-120 (2012).</li>
<li>Soutiere, S. E., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+postnatal+lung+growth+and+development+between+C3H%2FHeJ+and+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of postnatal lung growth and development between C3H/HeJ and C57BL/6J mice.</a> J Appl Physiol. 100 (5), 1577-1583 (2006).</li>
<li>Alberts, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+changes+in+the+host+response+between+resistant+and+susceptible+inbred+mouse+strains+after+influenza+A+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Gene expression changes in the host response between resistant and susceptible inbred mouse strains after influenza A infection.</a> Microbes Infect. 12 (4), 309-318 (2010).</li>
<li>Kida, K., Fujino, Y., Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+lung+structure+in+male+DBA+and+C57+black+mice+and+their+F1+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">A comparison of lung structure in male DBA and C57 black mice and their F1 offspring.</a> Am Rev Respir Dis. 139 (5), 1238-1243 (1989).</li>
<li>Reinhard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inbred+strain+variation+in+lung+function%5BTitle%5D)+AND+%22Mamm+Genome%22%5BJournal%5D)">Inbred strain variation in lung function.</a> Mamm Genome. 13 (8), 429-437 (2002).</li>
<li>Soutiere, S. E., Tankersley, C. G., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+alveolar+size+in+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Physiol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Differences in alveolar size in inbred mouse strains.</a> Respir Physiol Neurobiol. 140 (3), 283-291 (2004).</li>
<li>Koerner, I., Matrosovich, M. N., Haller, O., Staeheli, P., Kochs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+receptor+specificity+and+fusion+activity+of+the+haemagglutinin+contribute+to+high+virulence+of+a+mouse-adapted+influenza+A+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Altered receptor specificity and fusion activity of the haemagglutinin contribute to high virulence of a mouse-adapted influenza A virus.</a> J Gen Virol. 93 (Pt 5), 970-979 (2012).</li>
<li>Weinheimer, V. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+viruses+target+type+II+pneumocytes+in+the+human+lung%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Influenza A viruses target type II pneumocytes in the human lung.</a> J Infect Dis. 206 (11), 1685-1694 (2012).</li>
<li>Youk, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+human+alveolar+stem+cell+culture+models+reveal+infection+response+to+SARS-CoV-2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional human alveolar stem cell culture models reveal infection response to SARS-CoV-2.</a> Cell Stem Cell. 27 (6), 905-919.e10 (2020).</li>
<li>Ziegler, C. G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SARS-CoV-2+receptor+ACE2+is+an+interferon-stimulated+gene+in+human+airway+epithelial+cells+and+is+detected+in+specific+cell+subsets+across+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">SARS-CoV-2 receptor ACE2 is an interferon-stimulated gene in human airway epithelial cells and is detected in specific cell subsets across tissues.</a> Cell. 181 (5), 1016-1035.e19 (2020).</li>
<li>Katsura, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+lung+stem+cell-based+alveolospheres+provide+insights+into+SARS-CoV-2-mediated+interferon+responses+and+pneumocyte+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Human lung stem cell-based alveolospheres provide insights into SARS-CoV-2-mediated interferon responses and pneumocyte dysfunction.</a> Cell Stem Cell. 27 (6), 890-904.e8 (2020).</li>
<li>Fehrenbach, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+epithelial+type+II+cell%3A+Defender+of+the+alveolus+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Res%22%5BJournal%5D)">Alveolar epithelial type II cell: Defender of the alveolus revisited.</a> Respiratory Res. 2 (1), 33(2001).</li>
<li>Mason, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+alveolar+type+II+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Respirology%22%5BJournal%5D)">Biology of alveolar type II cells.</a> Respirology. 11 (Suppl), S12-S15 (2006).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Búfer ACK</td><td>-</td><td>-</td><td>8,29 g NH4Cl, 1 g KHCO3, 200 y micro; L de 0. 5 M EDTA, añade 1000 mL de Milli-Q, ajusta el pH a 7,2 a 7,4</td></tr><tr><td>CD11b anti-ratón</td><td>eBiociencia</td><td>12-0112-83</td><td>clon M1/70; PE acoplado</td></tr><tr><td>anti-ratón CD11c</td><td>Bioleyenda</td><td>117310</td><td>clon N418; APC acoplado</td></tr><tr><td>antiratón CD16/32</td><td>BD Biociencias</td><td>553141</td><td>clon 93; purificado</td></tr><tr><td>antiratón CD16/32</td><td>BD Biociencias</td><td>561727</td><td>clon 2.4G2; PE acoplado</td></tr><tr><td>antiratón CD19</td><td>Bioleyenda</td><td>115508</td><td>clon 6D5; PE acoplado</td></tr><tr><td>anti-ratón CD24</td><td>Bioleyenda</td><td>101808</td><td>clon M1/69; PE acoplado</td></tr><tr><td>anti-ratón CD31</td><td>Bioleyenda</td><td>102408</td><td>clon 390; PE acoplado</td></tr><tr><td>anti-ratón CD326</td><td>Bioleyenda</td><td>118245</td><td>clon G8.8; BV785 acoplado</td></tr><tr><td>CD45 antiratón</td><td>BD Biociencias</td><td>553081</td><td>clon 30-F11; PE acoplado</td></tr><tr><td>anti-ratón CD93</td><td>eBiociencia</td><td>17-5892-82</td><td>clon AA4-1; APC acoplado</td></tr><tr><td>F4/80 antiratón</td><td>Bioleyenda</td><td>123116</td><td>clon BM8; APC acoplado</td></tr><tr><td>anti-ratón SPC&nbsp;</td><td>ABCAM</td><td>ab211326</td><td>Especie hospedadora: conejo; Clon: EPR19839; purificado</td></tr><tr><td>Aria-Fusión</td><td>BD Biociencias</td><td></td><td>Clasificador de celdas</td></tr><tr><td>Aria-II SORP</td><td>BD Biociencias</td><td></td><td>Clasificador de celdas</td></tr><tr><td>Placa Biozym Agarosa</td><td>Biozym</td><td>840101</td><td>1 % (v/v) en H2O</td></tr><tr><td>Colador celular (100 y micro; M, 70 y Micro; M, 40 y micro; m)</td><td>BD Falcon</td><td>352360, 352350, 352340</td><td></td></tr><tr><td>CellTrics (50 & micro; m)</td><td>Sysmex</td><td>04-004-2327</td><td></td></tr><tr><td>Desoxirribonucleasa I del páncreas bovino, 2000 unidades de Kunitz/vial</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4263</td><td>Contenido de disolución fresca de 1 vial en 330 & micro; L DMEM</td></tr><tr><td>Dispase, 100 mL (5000 unidades caseinolíticas)</td><td>Corning</td><td>354235</td><td>realizar filtración estéril (tamaño de poro 0,22 & micro; m), preparar 4 mL de alicotas en tubos de 15 mL, almacenarlas a -20 y grado; C</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>31885-049</td><td>Glucosa baja, con piruvanato, añadir HEPES (concentración final de 25 mM)</td></tr><tr><td>FACS Diva</td><td>BD Biociencias</td><td></td><td>Software de clasificación</td></tr><tr><td>FlowJo</td><td></td><td></td><td>Software de evaluación para datos FACS</td></tr><tr><td>Anti-Conejo de la Cabra</td><td></td><td></td><td>Alexa 594 acoplada</td></tr><tr><td>Cánula permanente Introcan 22G</td><td>Braun</td><td>4252098B</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy FFPE Kit</td><td>Qiagen</td><td>73504</td><td></td></tr><tr><td>Sinfonía S6 SE</td><td>BD Biociencias</td><td></td><td>Clasificador de celdas</td></tr></tbody></table>

aislamiento de células epiteliales alveolares tipo ii de pulmones murenos neonatales, juveniles y adultos adaptables a entornos experimentales infecciosos

Isolation of Alveolar Type II Epithelial Cells from Neonatal, Juvenile, and Adult Murine Lungs Adaptable to Infectious Experimental Settings

Aislamiento de células epiteliales alveolares tipo II de pulmones murenos neonatales, juveniles y adultos adaptables a entornos experimentales infecciosos

Alveolar type II epithelial cells (AECII) critically contribute to immune regulation in the lung and thus are key elements orchestrating pulmonary ...

isolation-alveolar-type-ii-epithelial-cells-from-neonatal-juvenile

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Aquí se describe un protocolo para el aislamiento y cultivo de las células endoteliales murinas pulmonar. Este método consiste en la disociación mecánica y enzimática del tejido pulmonar, así como un proceso de purificación de 2 pasos con anti-PECAM-1 y anti-ICAM-2 anticuerpos conjugados a perlas magnéticas, lo que produce una población pura de células endoteliales microvasculares su mayoría de origen.

Aislamiento y cultivo de células endoteliales pulmonares de ratones recién nacidos

Células epiteliales pulmonares pueden ser aislados de las vías respiratorias de los ratones y se cultivan en la interfaz aire-líquido como un modelo de epitelio respiratorio diferenciados. Un protocolo es descrito para el aislamiento, el cultivo y la exposición de estas células al humo del cigarrillo convencional, con el fin de estudiar la respuesta molecular a esta toxina ambiental.

Aislamiento de ratón las células epiteliales respiratorias y la exposición al humo del cigarrillo Experimental de la interfaz de aire líquido

Una preparación altamente purificada de células dendríticas del pulmón del ratón se describe. Especial énfasis se da al aislamiento de subgrupo de células dendríticas convencionales.

Aislamiento de células dendríticas del pulmón de ratón

Se describe el aislamiento rápido de células primarias de murino de tipo II alveolares epiteliales (AECII) por citometría de flujo negativo de selección. Estos AECII mostrar una alta viabilidad y pureza, y son adecuados para una amplia gama de estudios funcionales y molecular respecto a su función en condiciones respiratorias tales como enfermedades autoinmunes o infecciosas.

Citometría de flujo El aislamiento de células primarias murino tipo II alveolares epiteliales de Estudios funcionales y moleculares

Este video muestra una técnica in vitro para identificar células inmunitarias que residen en pulmones murinos. Después de aislar las células inmunitarias diana del tejido pulmonar murino, se marcan en la superficie utilizando un cóctel de anticuerpos marcados con fluoróforos contra marcadores específicos en las células inmunitarias innatas y adaptativas. Además, los monocitos, macrófagos y células dendríticas se marcan mediante un marcador intracelular. A continuación, se identifican los...

Un método in vitro para identificar células inmunitarias innatas y adaptativas que residen en pulmones murinos

Esta comunicación describe modelos murinos para los propósitos experimentales y metodologías para el aislamiento y cultivo de macrófagos alveolares de los seres humanos.

Aislamiento y cultivo In Vitro de los macrófagos alveolares murinos y humanos

Aquí se presenta un protocolo para el aislamiento primario de monocitos de sangre humana, así como su diferenciación en macrófagos y células dendríticas y el montaje con células epiteliales en un modelo pulmonar humano multicelular. Se comparan las respuestas biológicas de las cocultivos compuestas de células inmunitarias diferenciadas de los monocitos recién aislados o descongelados, tras la exposición a estímulos proinflamatorios.

Modelo alveolar humano multicelular compuesto por células epiteliales y células inmunes primarias para la evaluación de riesgos

En este artículo, las células endoteliales pulmonares primarias se aislaron y cultivaron de ratones neonatos.

Aislamiento de células endoteliales pulmonares primarias de ratón

El presente protocolo describe células alveoidales alveoidales pluripotentes derivadas de células madre pluripotentes inducidas por humanos (iAT2). Estas células pueden cultivarse como esferas autorrenovadoras en cultivo 3D o adaptarse al cultivo de interfaz aire-líquido (ALI).

Generación de esferas 3D y cultivos de interfaz aire-líquido 2D de células epiteliales alveolares pluripotentes inducidas por humanos derivadas de células madre pluripotentes de tipo 2

Aquí se presenta un método reproducible, asequible y robusto para el aislamiento y la expansión de células epiteliales bronquiales primarias para biobancos a largo plazo y la generación de células epiteliales diferenciadas por cultivo en la interfaz aire-líquido.

Aislar células epiteliales bronquiales del tejido pulmonar resecado para biobancos y establecer cultivos de interfaz aire-líquido bien diferenciados

Este protocolo detalla el aislamiento de poblaciones vivas inmunes y no inmunes del pulmón de ratón en un estado estacionario y después de la infección por influenza. También proporciona estrategias de activación para identificar subconjuntos de células epiteliales y mieloides.

Aislamiento de poblaciones vivas de células mieloides y epiteliales del pulmón de ratón

Aprenda a aislar células epiteliales alveolares tipo II de pulmones murenos mediante citometría de flujo. Este método permite obtener altos rendimientos de células viables para estudios de infección respiratoria.

Aislamiento de células epiteliales alveolares tipo II de pulmones murenos neonatales, juveniles y adultos adaptables a entornos experimentales infecciosos (Video) | JoVE Journal

Aislamiento de células epiteliales alveolares tipo II de pulmones murenos neonatales, juveniles y adultos adaptables a entornos experimentales infecciosos

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