Name: Investigación de la glucólisis en la microglía primaria mediante ensayo de flujo extracelular (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T12:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: Aprende a medir la glucólisis en microglía primaria mediante ensayo de flujo extracelular. Este protocolo permite evaluar la tasa de acidificación extracelular en tiempo real para estudiar la actividad metabólica en condiciones inflamatorias.

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<ol><li>Prinz, M., Jung, S., Priller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+biology%3A+One+century+of+evolving+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microglia biology: One century of evolving concepts.</a> Cell. 179, 292-311 (2019).</li>
<li>Tay, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+microglia+recovery+population+revealed+by+single-cell+RNAseq+following+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol.+Commun%22%5BJournal%5D)">Unique microglia recovery population revealed by single-cell RNAseq following neurodegeneration.</a> Acta Neuropathol. Commun. 6, 87(2018).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolysis+and+oxidative+phosphorylation+play+critical+roles+in+natural+killer+cell+receptor-mediated+natural+killer+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Glycolysis and oxidative phosphorylation play critical roles in natural killer cell receptor-mediated natural killer cell functions.</a> Front. Immunol. 11, 202(2020).</li>
<li>Soto-Heredero, G., Gómezde Las Heras, M. M., Gabandé-Rodríguez, E., Oller, J., Mittelbrunn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolysis-a+key+player+in+the+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Glycolysis-a key player in the inflammatory response.</a> FEBS J. 287, 3350-3369 (2020).</li>
<li>O'Neill, L. A., Kishton, R. J., Rathmell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+immunometabolism+for+immunologists%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A guide to immunometabolism for immunologists.</a> Nat. Rev. Immunol. 16, 553-565 (2016).</li>
<li>Bernier, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+metabolic+flexibility+supports+immune+surveillance+of+the+brain+parenchyma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Microglial metabolic flexibility supports immune surveillance of the brain parenchyma.</a> Nat. Commun. 11, 1559(2020).</li>
<li>Bernier, L. P., York, E. M., MacVicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunometabolism+in+the+brain%3A+How+metabolism+shapes+microglial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Immunometabolism in the brain: How metabolism shapes microglial function.</a> Trends Neurosci. 43, 854-869 (2020).</li>
<li>Geric, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+reprogramming+during+microglia+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunometabolism%22%5BJournal%5D)">Metabolic reprogramming during microglia activation.</a> Immunometabolism. 1, e190002(2019).</li>
<li>Yoo, I., Ahn, I., Lee, J., Lee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+flux+assay+%28Seahorse+assay%29%3A+Diverse+applications+in+metabolic+research+across+biological+disciplines%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cells%22%5BJournal%5D)">Extracellular flux assay (Seahorse assay): Diverse applications in metabolic research across biological disciplines.</a> Mol. Cells. 47, 100095(2024).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamine+metabolism+modulates+microglial+NLRP3+inflammasome+activity+through+mitophagy+in+Alzheimer%E2%80%99s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Glutamine metabolism modulates microglial NLRP3 inflammasome activity through mitophagy in Alzheimer’s disease.</a> J. Neuroinflammation. 21, 261(2024).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transporter+1+critically+controls+microglial+activation+through+facilitating+glycolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Glucose transporter 1 critically controls microglial activation through facilitating glycolysis.</a> Mol. Neurodegener. 14, 2(2019).</li>
<li>Lu, J., Zhou, W., Dou, F., Wang, C., Yu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+sustains+microglial+metabolic+reprogramming+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">TRPV1 sustains microglial metabolic reprogramming in Alzheimer's disease.</a> EMBO Rep. 22, e52013(2021).</li>
<li>Orihuela, R., McPherson, C. A., Harry, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+M1%2FM2+polarization+and+metabolic+states%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Microglial M1/M2 polarization and metabolic states.</a> Br. J. Pharmacol. 173, 649-665 (2016).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+glycolytic+reprogramming+controls+microglial+inflammatory+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Early glycolytic reprogramming controls microglial inflammatory activation.</a> J. Neuroinflammation. 18, 129(2021).</li>
<li>Kaushik, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+glycolytic+metabolism+supports+transmigration+of+brain-infiltrating+macrophages+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Enhanced glycolytic metabolism supports transmigration of brain-infiltrating macrophages in multiple sclerosis.</a> J. Clin. Invest. 129, 3277-3292 (2019).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR-mediated+metabolic+reprogramming+shapes+distinct+microglia+functions+in+response+to+lipopolysaccharide+and%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">mTOR-mediated metabolic reprogramming shapes distinct microglia functions in response to lipopolysaccharide and.</a> Glia. 68, 1031-1045 (2020).</li>
<li>Montilla, A., Zabala, A., Matute, C., Domercq, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+metabolic+characterization+of+microglia+culture+in+a+defined+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Functional and metabolic characterization of microglia culture in a defined medium.</a> Front. Cell. Neurosci. 14, 22(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Solución 1M HEPES</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>1X HBSS</td><td>Gibco y nbsp;</td><td>&nbsp; 14175-079</td><td></td></tr><tr><td>2,5% de tripsina</td><td>Gibco y nbsp;</td><td>&nbsp; 15090-046</td><td></td></tr><tr><td>2DG</td><td>Millipore sigma&nbsp;</td><td>D6134</td><td></td></tr><tr><td>Antibiótico/Antimicoóticos y nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>D y ndash; (+)Glucosa, anhidro y nbsp;</td><td>Termociencia&nbsp; &nbsp;</td><td>A16828.36</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>&nbsp; 11965-092</td><td></td></tr><tr><td>DNasa I</td><td>Millipore sigma&nbsp;</td><td>11284932001- Roche</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Fisherbrand</td><td>FB12999102</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco y nbsp;</td><td>&nbsp; 35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Kit de L-Lactato</td><td>Abcam</td><td>AB65330</td><td></td></tr><tr><td>LPS&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>&nbsp; L4391</td><td></td></tr><tr><td>MEM: NEAA&NBSP;</td><td>Gibco y nbsp;</td><td>&nbsp; 11140-050</td><td></td></tr><tr><td>Oligomicina A</td><td>Millipore sigma&nbsp;</td><td>495455</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina/Estreptomicina</td><td>Gibco y nbsp;</td><td>&nbsp; 15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Tiras indicadoras de pH</td><td>Fisherbrand</td><td>13-640-516</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XFe24</td><td>Agilent Technologies</td><td>N/A</td><td>Nombre genérico: Analizador de flujo extracelular</td></tr><tr><td>Microplacas de cultivo celular Seahorse 24 V7 PS</td><td>Caballito de Mar Agilent</td><td>100777-004</td><td>Nombre genérico: Microplacas de cultivo celular de flujo extracelular</td></tr><tr><td>Ensayo de caballito de mar XF Calibrant buffer (pH 7,4)</td><td>Agilent Seahorse & nbsp;</td><td>&nbsp; 100840-000</td><td>Nombre genérico: Buffer de calibración de flujo extracelular</td></tr><tr><td>Medio DMEM XF para ensayo de caballito de mar (pH 7,4)</td><td>Agilent Seahorse & nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; 103575-100</td><td>Nombre genérico: Medios de ensayo de flujo extracelular</td></tr><tr><td>Kit de ensayo de flujo extracelular para caballitos de mar</td><td>Agilent Seahorse & nbsp;</td><td>102342-100</td><td>Nombre genérico: Placa de calibración de flujo extracelular &nbsp;</td></tr><tr><td>Piruvato de sodio y nbsp;</td><td>Gibco y nbsp;</td><td>&nbsp; 11360-070</td><td></td></tr></tbody></table>

investigación de la glucólisis en la microglía primaria mediante ensayo de flujo extracelular

Investigating Glycolysis in Primary Microglia Using Extracellular Flux Assay

Investigación de la glucólisis en la microglía primaria mediante ensayo de flujo extracelular

Microglia, the resident macrophage cells of the central nervous system, dynamically alter their metabolic programs in response to physiological and ...

investigating-glycolysis-primary-microglia-using-extracellular-flux

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Aislamiento de la microglía primaria a partir de la heterogeneidad celular del cerebro es esencial para investigar su papel en las dos condiciones fisiológicas y patológicas. Este protocolo describe un aislamiento mecánico y técnica mixta de cultivo celular que proporciona un alto rendimiento y alta pureza, viables células primarias microgliales...

El aislamiento de la microglía Primaria cultivos mixtos de células gliales del tejido neonatal cerebro de rata

Este protocolo proporciona un enfoque bioquímico para medir la tasa de acidificación extracelular (ECAR) y la tasa de consumo de oxígeno (OCR) de células leucémicas primarias con ensayo de flujo extracelular. La evaluación del perfil metabólico de estas células ayuda a caracterizar sus demandas, lo que conduce a una terapia personalizada.

Ensayo de flujo extracelular: un método para medir el perfil metabólico de las células

La reprogramación metabólica es una característica y un requisito previo para la polarización de los macrófagos M1 y M2. Este manuscrito describe un ensayo para la medición de los parámetros fundamentales de la glucólisis y la función mitocondrial en macrófagos derivados de la médula ósea de ratón. Esta herramienta se puede aplicar para investigar cómo factores particulares afectan el metabolismo y el fenotipo del macrófago.

Caracterización metabólica de polarizado M1 y macrófagos derivados de Médula ósea M2 Uso del análisis extracelular Flux en tiempo real

La glucólisis es un marcador metabólico definitorio en múltiples sistemas biológicos. El monitoreo de la glucólisis mediante la medición del flujo extracelular de H+ es común, pero requiere una corrección para que sea cuantitativa e inequívoca. Aquí, demostramos cómo recopilar y corregir datos de flujo extracelular para distinguir entre las fuentes respiratorias y glucolíticas de acidificación extracelular.

Medición y Análisis de la producción de ácido extracelular para Determinar glicolítica Rate

El estudio del metabolismo es cada vez más relevante para la investigación inmunológica. Aquí, presentamos un método optimizado para medir la glucólisis y la respiración mitocondrial en esplenocitos de ratón y linfocitos T y B.

Un protocolo optimizado para analizar la glucólisis y respiración mitocondrial en los linfocitos

En este artículo, describimos un método para medir la glucólisis y la respiración mitocondrial en células humanas primarias de Asesino Natural (NK) aisladas de sangre periférica, en reposo o después de la activación inducida por IL15. El protocolo descrito podría extenderse fácilmente a las células NK humanas primarias activadas por otras citoquinas o estímulos solubles.

Análisis del metabolismo celular natural humano

Aquí presentamos dos protocolos para cuantificar el envolvimiento microglial de sinapsis positivas para vGLUT1 y sinaptosomas crudos marcados con pHRodo Red mediante citometría de flujo.

Cuantificación de la envolvimiento microglial de material sináptico mediante citometría de flujo

El abuso del alcohol perjudica la inmunidad de los macrófagos alveolares (AM) debido a la supresión de la respiración mitocondrial y la bioenergética. Recientemente demostramos que la exposición al etanol (EtOH) aumenta la dependencia de la glutamina para la respiración mitocondrial en los AM. En este artículo, se proporcionan métodos para determinar el uso de glutamina para la respiración mitocondrial en AM tratados con EtOH utilizando un bioanalizador de flujo extracelular.

Evaluación de la glutamina como fuente de combustible para macrófagos alveolares expuestos a etanol crónico utilizando un bioanalizador de flujo extracelular

Aquí, describimos en detalle los métodos para extraer macrófagos de la médula ósea, el bazo y el corazón infartado, y posteriormente evaluar el flujo metabólico en células vivas.

Análisis del flujo metabólico ex vivo en macrófagos esplénicos y cardíacos y monocitos de médula ósea

Se desarrolló un protocolo para la preparación de mitocondrias purificadas a partir de células microgliales, el aislamiento de proteínas mitocondriales para la liberación de N-glicanos y la detección rápida de glicanos mitocondriales subcelulares mediante ionización por electrospray de desorción láser asistida por matriz infrarroja acoplada a espectrometría de masas de analizador de masas precisa de alta resolución.

Preparación mitocondrial de la microglía para el análisis de glicanos

Aprende a medir la glucólisis en microglía primaria mediante ensayo de flujo extracelular. Este protocolo permite evaluar la tasa de acidificación extracelular en tiempo real para estudiar la actividad metabólica en condiciones inflamatorias.

Investigación de la glucólisis en la microglía primaria mediante ensayo de flujo extracelular

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