Separación HPLC automatizada usando LC-mate: un automuestreador repetitivo integrado y colector de fracciones para la purificación a microescala

Nuestra investigación se centra en diseñar un instrumento que se conecte directamente a los sistemas HPLC para automatizar todos esos pasos manuales repetitivos. La inyección manual de muestras y la recogida de fracciones son muy tediosas. LC-Mate ofrece una solución automatizada multiplataforma para la purificación de muestras HPLC.

Para empezar, verifica las conexiones de fontanería con disolvente entre el sistema HPLC, el LC-Mate y la columna cromatográfica para asegurar los caminos de flujo adecuados. Para comprobar la conexión de la línea de transmisión de señal entre el detector UV y el LC-Mate, conecta el cable negro al terminal rojo y el cable blanco al terminal negro para que coincida con la polaridad de la señal analógica de salida. Observa la pantalla LC-Mate para confirmar que aparece la forma de onda de la señal analógica.

Si no se ve ninguna forma de onda, invierte las conexiones del cable conectando el cable negro al terminal negro y el cable blanco al terminal rojo. Para comprobar la conexión de disparo entre el detector ultravioleta y el LC-Mate, conecte el extremo único del cable de datos al puerto de salida del detector ultravioleta. Conecta los cables negro y blanco del otro extremo del cable a los terminales negro y azul del gatillo LC-Mate respectivamente. Aprieta los terminales para asegurar una conexión firme del gatillo.

A continuación, asegúrate del arranque adecuado del sistema HPLC y del LC-Mate. Haz clic en el icono LC Mate en la interfaz para ejecutar automáticamente el programa de autoprueba del sistema e inicializar los módulos clave de hardware. Espera el breve tono de aviso y la desaparición del mensaje de autoevaluación para confirmar que la inicialización está completa.

Configura las condiciones de separación del HPLC y comienza la elución para equilibrar la columna. En la interfaz de prueba, introduce el volumen de inyección, el tiempo de elución y los tiempos de repetición, luego pulsa el icono de Inicio para iniciar el auto-muestreador, el colector de fracciones y la operación HPLC. Identificar condiciones de separación factibles, incluyendo resolución, tiempo de funcionamiento, tiempo de retención, volumen de inyección y longitud de onda ultravioleta.

Selecciona el módulo de función Threshold en el lado izquierdo de la interfaz para abrir la pantalla de configuración de parámetros. Introduce el volumen de inyección, los tiempos de repetición, el umbral y el tiempo de elución, y pulsa Start para iniciar la operación automatizada. Monitoriza los indicadores de estado.

Observa la inyección en curso para confirmar la introducción de la muestra. Revisa el indicador de Separación en curso para comprobar que la separación cromatográfica está en curso. Tenga en cuenta el indicador de vaciado de la jeringuilla para identificar cuándo la jeringuilla purga líquido residual.

Para realizar la recogida de fracciones basada en el tiempo, selecciona el módulo de recogida de temporización desde el lado izquierdo de la interfaz para abrir el menú de parámetros. Volumen de inyección de entrada, tiempos de repetición, tiempo de elución y los tiempos de recogida requeridos. Pulsa el botón Start para iniciar la secuencia automática repetida.

A continuación, selecciona el módulo de función Collect All en el lado izquierdo de la interfaz. Establece un umbral de valor de recogida para recoger todos los picos cromatográficos por separado. Para la limpieza de la tubería, inserta la tubería de inyección del auto-muestreador en una pequeña botella que contenga disolvente limpio.

Selecciona el módulo de Purificación desde el lado izquierdo de la interfaz para abrir el menú de parámetros. Luego ajusta el volumen de inyección entre cero y 1000, y los tiempos de repetición para la limpieza de la tubería del inyector. Haz clic en Limpieza abajo Limpieza Completada para comenzar la limpieza de la tubería del inyector.

Controla el recuento de ciclos para registrar los ciclos de lavado completados. Establece la hora de limpieza para la limpieza de la tubería de recogida. Haz clic en Limpieza debajo de Tubería Actual para comenzar la limpieza de la tubería de recogida.

Monitoriza la pantalla actual de la tubería para confirmar la limpieza secuencial desde la tubería 0 hasta la tubería 10. Activar el guardado automático para que el sistema pueda guardar cromatogramas tras cada ciclo de elución. Alternativamente, haz clic en el botón de guardar después de la elución para guardar manualmente los datos.

Después de introducir los metadatos en el cuadro de diálogo, elige la ubicación de almacenamiento entre almacenamiento local, una tarjeta SD o una unidad universal externa de bus serial. La separación semi-preparativa de HPLC con LC-Mate logró la inyección continua y estable de muestras y la recogida de fracciones durante la purificación del hiperósido de 2"O-galloyl. Las impurezas menores se eliminaban eficazmente para obtener hiperósido purificado de 2"O-galloyl usando el sistema LC-Mate.

También se logró con éxito la inyección continua y estable de muestras y la recogida de fracciones durante la purificación de floridzina y trilobatina. Demostrando que el sistema LC-Mate mejora significativamente la eficiencia operativa al reducir considerablemente la intervención manual. La desviación estándar relativa del área máxima de inyección en anillo completa fue del 0,813%, lo que indica una excelente estabilidad y reproducibilidad de las inyecciones de LC-Mate.

Este sistema facilita la purificación automatizada respectiva y la recogida precisa de fracciones para flujos de trabajo HPLC a escala macro eficientes. La variante correcta de señal, la selección correcta de modos y la configuración de parámetros son fundamentales para la aplicación exitosa del instrumento LC-Mate. Planeamos aumentar la capacidad del canal e integrar nuevos detectores para una mejor compatibilidad multiplataforma.