Name: Un método simplificado para la transformación mediada por agrobacterias de Phytophthora palmivora (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-20T13:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Aprende un método simplificado de transformación mediada por Agrobacterium para Phytophthora palmivora y P. capsici. Este protocolo reproducible facilita el estudio de funciones génicas y localización proteica en patógenos de plantas.

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<ol><li>Kamoun, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+top+10+oomycete+pathogens+in+molecular+plant+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">The top 10 oomycete pathogens in molecular plant pathology.</a> Mol Plant Pathol. 16 (4), 413-434 (2015).</li>
<li>Jones, J. D., Staskawicz, B. J., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plant+immune+system%3A+From+discovery+to+deployment%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The plant immune system: From discovery to deployment.</a> Cell. 187 (9), 2095-2116 (2024).</li>
<li>Tocafundo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+cross-pathogenicity+of+Phytophthora+palmivora+against+cacao%2C+papaya%2C+and+peach+palm%5BTitle%5D)+AND+%22Trop+Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">Direct and cross-pathogenicity of Phytophthora palmivora against cacao, papaya, and peach palm.</a> Trop Plant Pathol. 46 (6), 664-673 (2021).</li>
<li>Morales-Cruz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independent+whole-genome+duplications+define+the+architecture+of+the+genomes+of+the+devastating+West+African+cacao+black+pod+pathogen+Phytophthora+megakarya+and+its+close+relative+Phytophthora+palmivora%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Independent whole-genome duplications define the architecture of the genomes of the devastating West African cacao black pod pathogen Phytophthora megakarya and its close relative Phytophthora palmivora.</a> G3 (Bethesda). 10 (7), 2241-2255 (2020).</li>
<li>Ali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PCR-based+identification+of+cacao+black+pod+causal+agents+and+identification+of+biological+factors+possibly+contributing+to+Phytophthora+megakarya%27s+field+dominance+in+West+Africa%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">PCR-based identification of cacao black pod causal agents and identification of biological factors possibly contributing to Phytophthora megakarya's field dominance in West Africa.</a> Plant Pathol. 65 (7), 1095-1108 (2016).</li>
<li>Marelli, J. -P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chocolate+under+threat+from+old+and+new+cacao+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Chocolate under threat from old and new cacao diseases.</a> Phytopathology. 109 (8), 1331-1343 (2019).</li>
<li>Cvitanich, C., Judelson, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+transformation+of+the+oomycete%2C+Phytophthora+infestans%2C+using+microprojectile+bombardment%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Genet%22%5BJournal%5D)">Stable transformation of the oomycete, Phytophthora infestans, using microprojectile bombardment.</a> Curr Genet. 42 (4), 228-235 (2003).</li>
<li>Judelson, H. S., Tyler, B. M., Michelmore, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+the+oomycete+pathogen%2C+Phytophthora+infestans%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Microbe+Interact%22%5BJournal%5D)">Transformation of the oomycete pathogen, Phytophthora infestans.</a> Mol Plant Microbe Interact. 4 (6), 602-607 (1991).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((an+oxathiapiprolin-resistance+gene%2C+functions+as+a+novel+selection+marker+for+Phytophthora+transformation+and+CRISPR%2FCas9+mediated+genome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">an oxathiapiprolin-resistance gene, functions as a novel selection marker for Phytophthora transformation and CRISPR/Cas9 mediated genome editing.</a> Front Microbiol. 10, 2402(2019).</li>
<li>Dai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+transformation+system+for+Phytophthora+cinnamomi+using+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">An improved transformation system for Phytophthora cinnamomi using green fluorescent protein.</a> Front Microbiol. 12, 682754(2021).</li>
<li>Fang, Y., Cui, L., Gu, B., Arredondo, F., Tyler, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+genome+editing+in+the+oomycete+Phytophthora+sojae+using+CRISPR%2FCas9%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Efficient genome editing in the oomycete Phytophthora sojae using CRISPR/Cas9.</a> Curr Protoc Microbiol. 44 (1), 21A.1.1-21A.1.26 (2017).</li>
<li>Evangelisti, E., Yunusov, T., Shenhav, L., Schornack, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-acetyltransferase+AAC+%283%29-i+confers+gentamicin+resistance+to+Phytophthora+palmivora+and+Phytophthora+infestans%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiol%22%5BJournal%5D)">N-acetyltransferase AAC (3)-i confers gentamicin resistance to Phytophthora palmivora and Phytophthora infestans.</a> BMC Microbiol. 19 (1), 265(2019).</li>
<li>Dong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+the+straightforward+electro-transformation+system+for+Phytophthora+infestans+and+its+comparison+with+the+improved+PEG%2FCaCl2+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microbiol+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishment of the straightforward electro-transformation system for Phytophthora infestans and its comparison with the improved PEG/CaCl2 transformation.</a> J Microbiol Methods. 112, 83-86 (2015).</li>
<li>Huitema, E., Smoker, M., Kamoun, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+straightforward+protocol+for+electro-transformation+of+Phytophthora+capsici+zoospores%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">A straightforward protocol for electro-transformation of Phytophthora capsici zoospores.</a> Methods Mol Biol. 712, 129-135 (2011).</li>
<li>Vijn, I., Govers, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agrobacterium+tumefaciens+mediated+transformation+of+the+oomycete+plant+pathogen+Phytophthora+infestans%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">Agrobacterium tumefaciens mediated transformation of the oomycete plant pathogen Phytophthora infestans.</a> Mol Plant Pathol. 4 (6), 459-467 (2003).</li>
<li>Wu, D., Navet, N., Liu, Y., Uchida, J., Tian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+simple+and+efficient+Agrobacterium-mediated+transformation+system+for+Phytophthora+palmivora%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Establishment of a simple and efficient Agrobacterium-mediated transformation system for Phytophthora palmivora.</a> BMC Microbiol. 16 (1), 204(2016).</li>
<li>Gumtow, R., Wu, D., Uchida, J., Tian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Phytophthora+palmivora+extracellular+cystatin-like+protease+inhibitor+targets+papain+to+contribute+to+virulence+on+papaya%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Microbe+Interact%22%5BJournal%5D)">A Phytophthora palmivora extracellular cystatin-like protease inhibitor targets papain to contribute to virulence on papaya.</a> Mol Plant Microbe Interact. 31 (3), 363-373 (2018).</li>
<li>Pettongkhao, S., Navet, N., Schornack, S., Tian, M., Churngchow, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+secreted+protein+of+15+kDa+plays+an+important+role+in+Phytophthora+palmivora+development+and+pathogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A secreted protein of 15 kDa plays an important role in Phytophthora palmivora development and pathogenicity.</a> Sci Rep. 10 (1), 2319(2020).</li>
<li>Minz, A., Sharon, A. Electroporation and Agrobacterium-mediated spore transformation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMinz%2C+A+%22Molecular+and+Cell+Biology+Methods+for+Fungi%22">Molecular and Cell Biology Methods for Fungi</a>. Sharon, A. , Humana Press. Totowa, NJ. 21-32 (2010).</li>
<li>Bellemain, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ITS+as+an+environmental+DNA+barcode+for+fungi%3A+An+in+silico+approach+reveals+potential+PCR+biases%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiol%22%5BJournal%5D)">ITS as an environmental DNA barcode for fungi: An in silico approach reveals potential PCR biases.</a> BMC Microbiol. 10 (1), 189(2010).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+Agrobacterium-mediated+transformation+for+two+oomycete+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">A modified Agrobacterium-mediated transformation for two oomycete pathogens.</a> PLoS Pathog. 19 (4), e1011346(2023).</li>
<li>Wu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+Agrobacterium-mediated+sorghum+transformation+protocol+and+molecular+data+of+transgenic+sorghum+plants%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Plant%22%5BJournal%5D)">Optimized Agrobacterium-mediated sorghum transformation protocol and molecular data of transgenic sorghum plants.</a> In Vitro Cell Dev Biol Plant. 50 (1), 9-18 (2014).</li>
<li>Sun, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TDNAscan%3A+A+software+to+identify+complete+and+truncated+T-DNA+insertions%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genet%22%5BJournal%5D)">TDNAscan: A software to identify complete and truncated T-DNA insertions.</a> Front Genet. 10, 685(2019).</li>
<li>Navet, N., Tian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agrobacterium-mediated+transformation+of+sweet+basil+%28Ocimum+basilicum%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Agrobacterium-mediated transformation of sweet basil (Ocimum basilicum).</a> Bio Protoc. 10 (22), e3828-e3828 (2020).</li>
<li>Hasley, J., Dinulong, R. -J., Adhikari, A., Christopher, D., Tian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+editing+of+papaya+using+both+Cas9+and+Cas12a%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Genome editing of papaya using both Cas9 and Cas12a.</a> bioRxiv. , (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubos microcentrífugas de 1,5 mL</td><td>VWR</td><td>525-1126</td><td></td></tr><tr><td>4'-Hidroxi-3',5' dimetoxiacetofenona</td><td>TCI</td><td>D2666</td><td>Acetosiringona (AS)</td></tr><tr><td>Tubo de 50 mL</td><td>Greiner Bio-one</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Etanol absoluto</td><td>Biorreactivos de Fisher</td><td>BP28184</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Biorreactivos de Fisher</td><td>BP1423-500</td><td></td></tr><tr><td>Papel de aluminio</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Membrana Hybond-N+ (30 cm y 3 m)</td><td>Cytiva</td><td>RPN303B</td><td></td></tr><tr><td>Carbonato cálcico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>239216-500G</td><td>CaCO3</td></tr><tr><td>Cefotaxima sal sódica</td><td>Química Termocientífica</td><td>AAJ6269006</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-glucosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Kit microbiano DNeasy PowerLyzer</td><td>Qiagen</td><td>12255-50</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de fluorescencia</td><td>Zeiss</td><td></td><td>Microscopio de fluorescencia ZEISS Axioscope 5 con conjunto de filtro 38 HE</td></tr><tr><td>G418 sulfato</td><td>Química Termocientífica</td><td>AC329400010</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>911046-1L</td><td></td></tr><tr><td>Hemacitómetro (línea brillante)</td><td>Hausser Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de kanamicina</td><td>Santa Cruz Biotecnología</td><td>SC-257635</td><td></td></tr><tr><td>L-Asparagina anhidro</td><td>MP Biomedicina</td><td>ICN10079425</td><td></td></tr><tr><td>LB Broth, Miller</td><td>Biorreactivos de Fisher</td><td>BP1426-2</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de magnesio heptahidratado</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>63138-250G</td><td>MgSO4&middot; 7H2O</td></tr><tr><td>MES Hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2933-100G</td><td></td></tr><tr><td>Medio Basal Murashige y Skoog</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5519-50L</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri (100 mm x 15 mm)</td><td>VWR</td><td>25384-342</td><td></td></tr><tr><td>Dihidrógeno fosfato de potasio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1370391000</td><td>KH2PO4</td></tr><tr><td>Rifampicina</td><td>Santa Cruz Biotecnología</td><td>SC-200910</td><td></td></tr><tr><td>Taq 2X Master Mix</td><td>NEB</td><td>M0270L</td><td></td></tr><tr><td>Clorhidrato de tiamina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4625-5G</td><td></td></tr><tr><td>Espectrofotómetro UV-Visible</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-385-355</td><td></td></tr><tr><td>V8 Original 100% Zumo de Verduras</td><td>Compañía de Sopas Campbell</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vórtice</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-163</td><td></td></tr><tr><td>Agua</td><td></td><td></td><td>Grado de Biología Molecular, purificado mediante el sistema de purificación de agua Mill-Q</td></tr><tr><td>Extracto de levadura</td><td>ACROS</td><td>611805000</td><td>Actualmente disponible a través de Thermo Scientific Chemicals</td></tr><tr><td>&beta;-Sitosterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>85451-100G</td><td></td></tr></tbody></table>

un método simplificado para la transformación mediada por agrobacterias de phytophthora palmivora

A Simplified Method for Agrobacterium-mediated Transformation of Phytophthora palmivora

Un método simplificado para la transformación mediada por agrobacterias de Phytophthora palmivora

Phytophthora is an oomycete genus that contains numerous destructive plant pathogens, among which is the broad-host-range species P. palmivora. Functional ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Glicol eficiente de polietileno (PEG) de la transformación mediada por Moss Physcomitrella patens</em

En este video, demostramos la transformación genética del genoma del arroz utilizando un vector binario de Agrobacterium tumefaciens. Esta bacteria facilita la transferencia de un plásmido de ADN extraño utilizando proteínas de virulencia de Agrobacterium.

Transformación genética mediada por agrobacterias: un método para transformar genéticamente el genoma del arroz a través de Agrobacterium tumefaciens modificado genéticamente

Una metodología de alto rendimiento, la producción de protoplastos de tabaco automatizado y se describe la transformación. El sistema robótico permite la expresión de genes masivamente paralelo y el descubrimiento en el sistema modelo BY-2 que debe ser traducible a los cultivos no modelo.

Una plataforma robótica para de alto rendimiento de protoplastos aislamiento y Transformación

Planta las conexiones intercelulares, los plasmodesmos (Pd), juegan un papel central en la planta las interacciones planta-virus y fisiología. Crítica para el transporte de Pd son clasificación señales que dirigen las proteínas a Pd. Sin embargo, nuestro conocimiento acerca de estas secuencias es todavía en su infancia. Se describe una estrategia para identificar señales de localización de Pd en proteínas orientada a Pd.

Identificación de secuencias de localización Plasmodesmal en proteínas en Planta

Usando un vector binario pBIBAC-GW hace generar plantas transgénicas con inserciones intactas de solo-copia, un proceso fácil. Aquí, se presenta una serie de protocolos que guían al lector a través del proceso de generación de plantas transgénicas de Arabidopsis y prueba de las plantas para la integridad y copiar el número de los insertos.

Generación de plantas transgénicas con inserciones de la solo-copia usando Vector binario BIBAC-GW

Transformación mediada por Agrobacterium utilizando un método de inmersión floral puede ser empleado con éxito para crear líneas transgénicas estables del modelo extremophyte Schrenkiella parvula. Presentamos un protocolo modificado de eso para Arabidopsis thaliana, teniendo en cuenta los hábitos de crecimiento diferentes y características fisiológicas de la extremophyte.

Planta de crecimiento y transformación mediada por Agrobacterium de baño Floral de la Extremophyte Schrenkiella parvula

Aquí, presentamos dos protocolos para transformar plantas de patata. La transformación Agrobacterium tumefaciens conduce a una planta transgénica completa mientras que la Agrobacterium rhizogenes produce transgénicas raíces pilosas en una sesión de tipo salvaje que puede ser auto propagado. Entonces detectamos actividad de promotor por tinción de las raíces transformadas de GUS.

Tumefaciens de la agrobacteria y rhizogenes de la agrobacteria-transformación mediada de la patata y la actividad de promotor de un Gene del Suberin por GUS Staining

Los genes morfogénicos de las plantas se pueden utilizar para mejorar la transformación genética de los genotipos recalcitrantes. Aquí se describe un protocolo de transformación genética mediada por Agrobacterium(QuickCorn) para tres importantes líneas de maíz público endogámico.

Agrobacterium-Transformación de embriones inmaduros mediados de líneas endogámicas de maíz recalcitrante utilizando genes morfogénicos

Debido a su aplicación versátil como especie modelo en diversos campos de estudio, existe la necesidad de un conjunto de herramientas de transformación genética en plátano de hoja estrecha (Plantago lanceolata).  Aquí, utilizando la transformación mediada por Agrobacterium tumefaciens, se presenta un protocolo que da como resultado líneas transgénicas estables con una eficiencia de transformación del 20%.

Transformación genética mediada por Agrobacterium tumefaciens del plátano de hoja estrecha

Este protocolo describe la utilización de la transformación mediada por Agrobacterium tumefaciens (AMT) para integrar genes de interés en el genoma nuclear de la microalga verde Chlorella vulgaris, lo que conduce a la producción de transformantes estables.

Agrobacterium tumefaciens-Ingeniería genética mediada por microalgas verdes, Chlorella vulgaris

Aquí, proporcionamos el protocolo detallado de un método de transformación de un solo paso mediado por Agrobacterium tumefaciens para producir plantas compuestas.

Un método eficiente y reproducible para producir plantas compuestas mediante la transformación de raíces peludas basadas en Agrobacterium rhizogenes

Aprende un método simplificado de transformación mediada por Agrobacterium para Phytophthora palmivora y P. capsici. Este protocolo reproducible facilita el estudio de funciones génicas y localización proteica en patógenos de plantas.

Un método simplificado para la transformación mediada por agrobacterias de Phytophthora palmivora

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