Visualización de nectarios foliares y brácteos del algodón mediante microscopía digital para mejorar la precisión de la puntuación y la preservación de datos

El estudio actual se centra en el método que puntua con precisión la expresión del rasgo del nectario. Para ilustrar la expresión del rasgo nectário, se utilizaron tanto los nectarios de hojas de algodón como los brácteos como tejidos modelo. Este método supera la limitación de la puntuación tradicional, que es poco fiable e inprecisa para la puntuación de comercio nectario.

Para empezar, transporta una nevera y bolsas Ziploc etiquetadas al invernadero para la recogida de muestras, recoge tejido de hojas jóvenes de plantas de algodón cultivadas en invernadero de dos a tres meses y colócalo en las bolsas de muestra etiquetadas. Coloque al menos dos hojas por muestra de planta en la bolsa etiquetada correspondiente y selle bien la bolsa tras la recogida. Coloca cada bolsa de muestra sellada que contiene tejido foliar en la nevera.

Recolecta flores sanas de las ramas superiores cuando las plantas estén en la fase media de floración. Coloca al menos dos flores en una bolsa de muestras etiquetada y sérvela. Transfiere las bolsas de muestra selladas que contienen flores a la nevera para transportarlas al laboratorio.

Enciende un microscopio y completa los primeros pasos de arranque. Coloca una lámina blanca A4 medio doblada cortada para que coincida con el tamaño del escenario del microscopio sobre el escenario. Utiliza los pequeños botones de luz del mando de la consola para ajustar la luz en la etapa del microscopio a la máxima intensidad.

Luego gira el mando grande de brillo tres cuartos para ponerlo en alto-medio. En el ordenador, selecciona aumento 10x en el software del microscopio. Coloca el tejido foliar sobre la lámina blanca precortada en el escenario del microscopio con el lado abaxial hacia arriba y céntraslo en el escenario.

Gira suavemente los mandos de ajuste y de la fila fina para enfocar la parte central de la hoja. Sigue ajustando hasta que la imagen parezca clara y sin desenfoque. Coloca el extremo inferior de la costilla media donde se encuentra el nectario en el centro del campo visual, asegurando una visibilidad clara de las venas laterales divergentes.

Usar los perillas de ajuste finos y de la pista refina aún más el enfoque para mejorar la claridad de la imagen digital. Captura la imagen del nectario. Cuando el software lo solicite, guarda la imagen con el número de identificación de la muestra en la ubicación requerida y luego asigna una puntuación del uno al cuatro basada en el fenotipo observado del nectario foliar.

Usa pinzas o la mano para eliminar las brácteas de la flor. Coloca la flor sobre una tabla limpia. Usando una hoja estéril, corta el tallo de la flor y luego realiza una incisión recta a lo largo del borde de las brácteas extraídas.

Coloca el papel de tela floral preparado boca abajo sobre la lámina blanca precortada en el escenario del microscopio. Utiliza los mandos de ajuste de curso y finos para mejorar la claridad de la imagen que se muestra en pantalla. Guarda la imagen con el número de identificación de muestra correspondiente.

La puntuación digital de la superficie abaxial de la hoja en la parte inferior de la costilla media mostró dos fenotipos, uno de ellos sin nectarios en la costilla media. Y puntuación cuatro con un néctario completamente desarrollado y néctar. Cuando se analizaron muestras de flores para néctarios brácteos, se observaron dos fenotipos: la puntuación uno mostró ausencia de nectario y la puntuación cuatro mostró un néctar productor de nectar completamente formado.

Las imágenes digitales de las plantas nectarias mostraron claramente tanto las estructuras néctares foliares como las brácteas con ampliaciones de 10 x, 20 x y 40 x. Imágenes digitales seleccionadas de hojas correspondientes al formato estándar de puntuación mostraron una puntuación con ausencia de nectario, segunda con un nectario poco desarrollado, tercera con un néctar más pequeño y cuarta puntuación con un nectario completamente desarrollado. La puntuación precisa de las plantas sin nectario a partir de las poblaciones segregantes de cruces con nectarios y cruces sin nectario es esencial para la selección de plantas sin nectario que puedan reducir el daño por insectos vegetales y también disminuir las pérdidas de rendimiento.

Por tanto, la selección de este rasgo es importante para aplicaciones posteriores como los marcadores de ADN asociados al rasgo sin nectario, que son herramientas valiosas para la selección asistida por marcadores.