Name: Aislamiento y cultivo de células marginales primarias de la Stria vascularis en ratones neonatales (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-20T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: Aprenda a aislar y cultivar células marginales primarias de la stria vascularis en ratones neonatos. Este modelo in vitro permite estudiar la disfunción de la stria vascularis y sus mecanismos en la pérdida auditiva.

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<ol><li>Raphael, Y., Altschuler, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+innervation+of+the+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Structure and innervation of the cochlea.</a> Brain Res Bull. 60 (5-6), 397-422 (2003).</li>
<li>Bovee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+stria+vascularis%3A+Renewed+attention+on+a+key+player+in+age-related+hearing+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">The stria vascularis: Renewed attention on a key player in age-related hearing loss.</a> Int J Mol Sci. 25 (10), 5391(2024).</li>
<li>Schulte, B. A., Schmiedt, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lateral+wall+Na%2CK-ATPase+and+endocochlear+potentials+decline+with+age+in+quiet-reared+gerbils%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Lateral wall Na,K-ATPase and endocochlear potentials decline with age in quiet-reared gerbils.</a> Hear Res. 61 (1-2), 35-46 (1992).</li>
<li>Hibino, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+is+the+highly+positive+endocochlear+potential+formed%3F+The+specific+architecture+of+the+stria+vascularis+and+the+roles+of+the+ion-transport+apparatus%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">How is the highly positive endocochlear potential formed? The specific architecture of the stria vascularis and the roles of the ion-transport apparatus.</a> Pflugers Arch. 459 (4), 521-533 (2010).</li>
<li>Johns, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+stria+vascularis+in+neglected+otologic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">The role of the stria vascularis in neglected otologic disease.</a> Hear Res. 428, 108682(2023).</li>
<li>Yu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+stria+vascularis+in+the+pathogenesis+of+sensorineural+hearing+loss%3A+A+narrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Role of the stria vascularis in the pathogenesis of sensorineural hearing loss: A narrative review.</a> Front Neurosci. 15, 774585(2021).</li>
<li>Ohlemiller, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+correlates+of+age-related+endocochlear+potential+reduction+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular correlates of age-related endocochlear potential reduction in a mouse model.</a> Hear Res. 220 (1-2), 10-26 (2006).</li>
<li>Mahendrasingam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+time+course+of+degeneration+of+different+cochlear+structures+in+the+CD%2F1+mouse+model+of+accelerated+aging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Assoc+Res+Otolaryngol%22%5BJournal%5D)">Relative time course of degeneration of different cochlear structures in the CD/1 mouse model of accelerated aging.</a> J Assoc Res Otolaryngol. 12 (4), 437-453 (2011).</li>
<li>Lee, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+apoptosis+induced+by+cisplatin+in+marginal+cells+in+mouse+stria+vascularis%5BTitle%5D)+AND+%22ORL+J+Otorhinolaryngol+Relat+Spec%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of apoptosis induced by cisplatin in marginal cells in mouse stria vascularis.</a> ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec. 66 (3), 111-118 (2004).</li>
<li>Ohlemiller, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endocochlear+potential+as+an+indicator+of+reticular+lamina+integrity+after+noise+exposure+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">The endocochlear potential as an indicator of reticular lamina integrity after noise exposure in mice.</a> Hear Res. 361, 138-151 (2018).</li>
<li>Liberman, M. C., Kujawa, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cochlear+synaptopathy+in+acquired+sensorineural+hearing+loss%3A+Manifestations+and+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Cochlear synaptopathy in acquired sensorineural hearing loss: Manifestations and mechanisms.</a> Hear Res. 349, 138-147 (2017).</li>
<li>Levano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+neonatal+cochlear+explants+as+an+in+vitro+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Whole neonatal cochlear explants as an in vitro model.</a> J Vis Exp. (197), e65160(2023).</li>
<li>Wu, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+primary+cochlear+hair+cells+from+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of primary cochlear hair cells from neonatal mice.</a> J Vis Exp. (199), e65687(2023).</li>
<li>Schmiedt, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+furosemide+applied+chronically+to+the+round+window%3A+A+model+of+metabolic+presbyacusis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Effects of furosemide applied chronically to the round window: A model of metabolic presbyacusis.</a> J Neurosci. 22 (21), 9643-9650 (2002).</li>
<li>Kurata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathologic+evaluation+of+vascular+findings+in+the+cochlea+in+patients+with+presbycusis%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">Histopathologic evaluation of vascular findings in the cochlea in patients with presbycusis.</a> JAMA Otolaryngol Head Neck Surg. 142 (2), 173-178 (2016).</li>
<li>Wangemann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+KCNJ10+protein+expression+abolishes+endocochlear+potential+and+causes+deafness+in+Pendred+syndrome+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Med%22%5BJournal%5D)">Loss of KCNJ10 protein expression abolishes endocochlear potential and causes deafness in Pendred syndrome mouse model.</a> BMC Med. 2, 30(2004).</li>
<li>Ding, L., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-106a+facilitates+the+sensorineural+hearing+loss+induced+by+oxidative+stress+by+targeting+connexin-43%5BTitle%5D)+AND+%22Bioengineered%22%5BJournal%5D)">miR-106a facilitates the sensorineural hearing loss induced by oxidative stress by targeting connexin-43.</a> Bioengineered. 13 (6), 14080-14093 (2022).</li>
<li>Wan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PARP1+inhibition+prevents+oxidative+stress+in+age-related+hearing+loss+via+PAR-Ca%282%2B%29-AIF+axis+in+cochlear+strial+marginal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">PARP1 inhibition prevents oxidative stress in age-related hearing loss via PAR-Ca(2+)-AIF axis in cochlear strial marginal cells.</a> Free Radic Biol Med. 220, 222-235 (2024).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+poly%28ADP-ribose%29+polymerase+1+expression+attenuates+glucose+oxidase-induced+damage+in+rat+cochlear+marginal+strial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Decreased poly(ADP-ribose) polymerase 1 expression attenuates glucose oxidase-induced damage in rat cochlear marginal strial cells.</a> Mol Neurobiol. 53 (9), 5971-5984 (2016).</li>
<li>Fetoni, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+presbycusis+in+animal+models%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of presbycusis in animal models: A review.</a> Exp Gerontol. 46 (6), 413-425 (2011).</li>
<li>Marie, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-accelerated+mouse+prone+8+%28SAMP8%29+as+a+model+of+age-related+hearing+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Senescence-accelerated mouse prone 8 (SAMP8) as a model of age-related hearing loss.</a> Neurosci Lett. 656, 138-143 (2017).</li>
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<li>Bommakanti, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cochlear+histopathology+in+human+genetic+hearing+loss%3A+State+of+the+science+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Cochlear histopathology in human genetic hearing loss: State of the science and future prospects.</a> Hear Res. 382, 107785(2019).</li>
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<li>Liu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+and+challenges+of+CRISPR-Cas+gene-editing+to+disease+treatment+in+clinics%5BTitle%5D)+AND+%22Precis+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Applications and challenges of CRISPR-Cas gene-editing to disease treatment in clinics.</a> Precis Clin Med. 4 (3), 179-191 (2021).</li>
<li>Guo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+methods+and+research+progress+of+livestock+and+poultry+immortalized+cell+lines%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Vet+Sci%22%5BJournal%5D)">Establishment methods and research progress of livestock and poultry immortalized cell lines: A review.</a> Front Vet Sci. 9, 956357(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubo centrífuga de 15 mL</td><td>Servicebio</td><td>EP-1501-J</td><td>Uso para la cultura</td></tr><tr><td>Plato de cultivo celular de 35 mm</td><td>NIDO</td><td>706001</td><td>Uso para disección</td></tr><tr><td>4% de paraformaldehído</td><td>Servicebio</td><td>G1101</td><td>Tinción inmunofluorescente</td></tr><tr><td>Placa de 6 pozos</td><td>Servicebio</td><td>CCP-6H</td><td>Uso para la cultura</td></tr><tr><td>Anticuerpo anticonejo conjugado Alexa Fluor 488</td><td>Proteintech</td><td>SA00013-2</td><td>Tinción inmunofluorescente</td></tr><tr><td>Medio de montaje antifade con DAPI</td><td>Absenta</td><td>abs9235</td><td>Tinción inmunofluorescente</td></tr><tr><td>Kit de Conteo de Células-8</td><td>Beyotime</td><td>C0037</td><td>Uso para el recuento de celdas</td></tr><tr><td>Colagenasa Tipo II</td><td>Biosharp</td><td>BS164</td><td>Uso para la cultura</td></tr><tr><td>Sistema de escaneo láser confocal</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>FV1200</td><td>Tinción inmunofluorescente</td></tr><tr><td>DCFH-DA</td><td>Invitrogen</td><td>C2938</td><td>Tinción ROS</td></tr><tr><td>D-gal</td><td>Solarbio</td><td>D8310</td><td>Uso para modelado celular</td></tr><tr><td>EpiCM-a Medium</td><td>Sciencell</td><td>4131</td><td>Uso para la cultura</td></tr><tr><td>Pinzas finas</td><td>RWD</td><td>F11020-11</td><td>Uso para disección</td></tr><tr><td>Suero de cabra</td><td>Beyotime</td><td>C0265</td><td>Tinción inmunofluorescente</td></tr><tr><td>H2O2</td><td>Mkbio</td><td>MM0707</td><td>Uso para modelado celular</td></tr><tr><td>La solución salina equilibrada de Hank (HBSS)</td><td>Biosharp</td><td>BL561A</td><td>Uso para la cultura</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>RWD</td><td>R510-22-10</td><td>Uso para disección</td></tr><tr><td>Anticuerpo KCNQ1 (G-8)</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-365186</td><td>Tinción inmunofluorescente</td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>SZX7-1063</td><td>Uso para disección</td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>IX71</td><td>Utilizado para observar los resultados de la tinción por inmunofluorescencia</td></tr><tr><td>MitoTracker Red CMXRos</td><td>Invitrogen</td><td>M7512</td><td>Tinción ROS</td></tr><tr><td>Cachorros de ratón neonatal (P0-P3)</td><td></td><td></td><td>proporcionado por BIONT</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Servicebio</td><td>G4202</td><td>Tinción inmunofluorescente</td></tr><tr><td>Anticuerpo monoclonal anti-ratón CK18 del conejo</td><td>Proteintech</td><td>10830-1-AP</td><td>Tinción inmunofluorescente</td></tr><tr><td>Kit de tinción de senescencia &beta;-Galactosidasa</td><td>Beyotime</td><td>C0602</td><td>Tinción por envejecimiento</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100</td><td>Tinción inmunofluorescente</td></tr></tbody></table>

aislamiento y cultivo de células marginales primarias de la stria vascularis en ratones neonatales

Isolation and Culture of Primary Marginal Cells of the Stria Vascularis from Neonatal Mice

Aislamiento y cultivo de células marginales primarias de la Stria vascularis en ratones neonatales

The stria vascularis is a key structure in the inner ear responsible for generating and maintaining the endocochlear potential (EP), and its dysfunction ...

isolation-culture-primary-marginal-cells-stria-vascularis-from

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Aquí se describe un protocolo para el aislamiento y cultivo de las células endoteliales murinas pulmonar. Este método consiste en la disociación mecánica y enzimática del tejido pulmonar, así como un proceso de purificación de 2 pasos con anti-PECAM-1 y anti-ICAM-2 anticuerpos conjugados a perlas magnéticas, lo que produce una población pura de células endoteliales microvasculares su mayoría de origen.

Aislamiento y cultivo de células endoteliales pulmonares de ratones recién nacidos

Los cultivos primarios de cardiomiocitos de ratón son una de las herramientas fundamentales para la investigación de la organización miofibrilar y la función. El siguiente protocolo describe el aislamiento y cultivo de cardiomiocitos primarios de corazones de ratón neonatales. Los cultivos de cardiomiocitos resultantes pueden usarse posteriormente para una variedad de ensayos biomecánicos, bioquímicos y de células biológica.

Aislamiento y cultivo de cardiomiocitos neonatales Ratón

Una clave para el éxito de la investigación de la biología microglial es la preservación de immunofunction microglial ex vivo durante el aislamiento del tejido del SNC. Aislar microglia mediante agitación rotatoria resultados en cultivos de células de alta pureza y inmunofuncional según la evaluación de imágenes fluorescentes, inmunocitoquímica y ELISA después de la activación microglia con el lipopolisacárido estímulos proinflamatorias (LPS) y Pam 3 CSK 4 (Pam).

Aislamiento de cortical Microglia con Inmunofenotipo Conservas y funcionalidad de murinos Neonatos

Las células endoteliales microvasculares cerebrales (BMEC) están interconectadas por proteínas de unión específicas que forman una barrera altamente regulada que separa la sangre y el sistema nervioso central (SNC), la llamada barrera hematoencefálica (BBB). El aislamiento de las células endoteliales microvasculares primarias del cerebro murino, como se discute en este protocolo, permite estudios detallados in vitro de la BHE.

Aislamiento de células primaria murino cerebro endoteliales microvasculares

Los queratinocitos epidérmicos forman una barrera cutánea funcional y se sitúan en la línea de frente de la defensa del huésped contra insultos ambientales externos. Aquí se describen métodos de aislamiento y cultivo primario de queratinocitos epidérmicos de piel de ratón neonatal y adulto, e inducción de diferenciación terminal y respuesta inflamatoria desencadenada por UVB a partir de queratinocitos.

Aislamiento y cultivo de queratinocitos de ratón primario de piel de ratón neonatal y adulto

Los cultivos primarios de microglía se utilizan comúnmente para evaluar nuevas moléculas antiinflamatorias. El presente protocolo describe un método reproducible y relevante para aislar magnéticamente la microglía de cachorros neonatos.

Aislamiento magnético de células microgliales de ratones neonatos para cultivos celulares primarios

En este artículo, las células endoteliales pulmonares primarias se aislaron y cultivaron de ratones neonatos.

Aislamiento de células endoteliales pulmonares primarias de ratón

Los cultivos primarios de Müller glia obtenidos a partir de retinas de ratón representan una herramienta muy robusta y fiable para estudiar la conversión glial en células progenitoras de la retina tras el tratamiento con microARN. Las moléculas individuales o combinaciones pueden ser probadas antes de su posterior aplicación de enfoques in vivo .

Cultivos celulares primarios para estudiar el potencial de regeneración de la glía murina de Müller después del tratamiento con microARN

La estría vascular es vital para la generación de potencial endococlear. Aquí, presentamos la disección de la estría vascular del ratón adulto para la secuenciación de un solo núcleo o inmunotinción.

Disección de estrías vasculares de ratón adulto para secuenciación de un solo núcleo o inmunotinción

Este manuscrito describe un protocolo detallado para aislar células de Müller gliales de la retina de ojos de ratón. El protocolo comienza con la enucleación y disección de los ojos de los ratones, seguida del aislamiento, la siembra y el cultivo de las células de Müller.

Aislamiento de células Müller gliales retinianas primarias de ratón

Este artículo presenta un protocolo detallado para aislar células de Müller de retina primaria de ratas Sprague-Dawley (SD) neonatales. El procedimiento incluye la enucleación de los globos oculares, la disección del tejido de la retina, la extracción e identificación de las células, y consideraciones clave para el cultivo celular posterior.

Aislamiento y cultivo de células primarias de Müller en la retina de ratas Sprague-Dawley (SD)

Aprenda a aislar y cultivar células marginales primarias de la stria vascularis en ratones neonatos. Este modelo in vitro permite estudiar la disfunción de la stria vascularis y sus mecanismos en la pérdida auditiva.

Aislamiento y cultivo de células marginales primarias de la Stria vascularis en ratones neonatales

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