Name: Experimentos de inmunotinción y penetración de colorantes para definir proteínas de unión septata plisadas en el núcleo en epitelios embrionarios de Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Aprende a evaluar la organización y función barrera de uniones septata plisadas en embriones de Drosophila mediante inmunotinción y ensayos de permeabilidad con colorantes.

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<ol><li>Farquhar, M. G., Palade, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Junctional+complexes+in+various+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Junctional complexes in various epithelia.</a> J. Cell Biol. 17, 375-412 (1963).</li>
<li>Lord, B. A., DiBona, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+septate+junction+in+the+regulation+of+paracellular+transepithelial+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Role of the septate junction in the regulation of paracellular transepithelial flow.</a> J. Cell Biol. 71 (3), 967-972 (1976).</li>
<li>Noirot-Timothée, C., Smith, D. S., Cayer, M. L., Noirot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junctions+in+insects%3A+comparison+between+intercellular+and+intramembranous+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">Septate junctions in insects: comparison between intercellular and intramembranous structures.</a> Tissue Cell. 10 (1), 125-136 (1978).</li>
<li>Rouka, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+septate+junction+beyond+barrier+function%3A+review+of+the+literature%2C+prediction+of+human+orthologs+of+SJ-related+proteins+and+identification+of+protein+domain+families%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Drosophila septate junction beyond barrier function: review of the literature, prediction of human orthologs of SJ-related proteins and identification of protein domain families.</a> Acta Physiol. 231 (1), e13527(2021).</li>
<li>Poodry, C., Schneiderman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+the+developing+leg+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Roux+Arch.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of the developing leg of Drosophila melanogaster.</a> Roux Arch. Dev. Biol. 166, 1-44 (1970).</li>
<li>Tepass, U., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+cellular+junctions+in+the+Drosophila+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The development of cellular junctions in the Drosophila embryo.</a> Dev. Biol. 161 (2), 563-596 (1994).</li>
<li>Rice, C., De, O., Alhadyian, H., Hall, S., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+the+junction%3A+new+insights+into+non-occluding+roles+for+septate+junction+proteins+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Expanding the junction: new insights into non-occluding roles for septate junction proteins during development.</a> J. Dev. Biol. 9 (1), 11(2021).</li>
<li>Baumgartner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+neurexin+is+required+for+septate+junction+and+blood-nerve+barrier+formation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A Drosophila neurexin is required for septate junction and blood-nerve barrier formation and function.</a> Cell. 87 (6), 1059-1068 (1996).</li>
<li>Fehon, R. G., Dawson, I. A., Artavanis-Tsakonas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+homologue+of+membrane-skeleton+protein+4.1+is+associated+with+septate+junctions+and+is+encoded+by+the+coracle+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A Drosophila homologue of membrane-skeleton protein 4.1 is associated with septate junctions and is encoded by the coracle gene.</a> Development. 120 (3), 545-557 (1994).</li>
<li>Hall, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macroglobulin+complement-related+%28Mcr%29+encodes+a+protein+required+for+septate+junction+organization+and+paracellular+barrier+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Macroglobulin complement-related (Mcr) encodes a protein required for septate junction organization and paracellular barrier function in Drosophila.</a> Development. 141, 889-898 (2014).</li>
<li>Nelson, K. S., Furuse, M., Beitel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+claudin+Kune-kune+is+required+for+septate+junction+organization+and+tracheal+tube+size+control%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The Drosophila claudin Kune-kune is required for septate junction organization and tracheal tube size control.</a> Genetics. 185 (3), 831-839 (2010).</li>
<li>Paul, S. M., Ternet, M., Salvaterra, P. M., Beitel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+is+required+for+septate+junction+function+and+epithelial+tube-size+control+in+the+Drosophila+tracheal+system%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The Na⁺/K⁺-ATPase is required for septate junction function and epithelial tube-size control in the Drosophila tracheal system.</a> Development. 130 (20), 4963-4974 (2003).</li>
<li>Nilton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((coiled+and+crimpled+are+three+Ly6-like+proteins+required+for+proper+localization+of+septate+junction+components%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">coiled and crimpled are three Ly6-like proteins required for proper localization of septate junction components.</a> Development. 137 (14), 2427-2437 (2010).</li>
<li>Tiklova, K., Senti, K. A., Wang, S., Gräslund, A., Samakovlis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+septate+junction+assembly+relies+on+melanotransferrin+iron+binding+and+endocytosis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial septate junction assembly relies on melanotransferrin iron binding and endocytosis in Drosophila.</a> Nat. Cell Biol. 12 (11), 1071-1077 (2010).</li>
<li>Bilder, D., Schober, M., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+activity+of+PDZ+protein+complexes+regulates+epithelial+polarity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Integrated activity of PDZ protein complexes regulates epithelial polarity.</a> Nat. Cell Biol. 5 (1), 53-58 (2003).</li>
<li>Woods, D. F., Bryant, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discs-large+tumor+suppressor+gene+of+Drosophila+encodes+a+guanylate+kinase+homolog+localized+at+septate+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The discs-large tumor suppressor gene of Drosophila encodes a guanylate kinase homolog localized at septate junctions.</a> Cell. 66 (3), 451-464 (1991).</li>
<li>Hall, S., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junction+proteins+play+essential+roles+in+morphogenesis+throughout+embryonic+development+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Septate junction proteins play essential roles in morphogenesis throughout embryonic development in Drosophila.</a> G3 (Bethesda). 6 (8), 2375-2384 (2016).</li>
<li>Genova, J. L., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroglian%2C+Gliotactin%2C+and+the+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+are+essential+for+septate+junction+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Neuroglian, Gliotactin, and the Na⁺/K⁺-ATPase are essential for septate junction function in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 161 (5), 979-989 (2003).</li>
<li>Ward, R. E., Lamb, R. S., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conserved+functional+domain+of+Drosophila+coracle+is+required+for+localization+at+the+septate+junction+and+has+membrane-organizing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A conserved functional domain of Drosophila coracle is required for localization at the septate junction and has membrane-organizing activity.</a> J. Cell Biol. 140 (6), 1463-1473 (1998).</li>
<li>De, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junction+proteins+are+required+for+cell+shape+changes%2C+actomyosin+reorganization+and+cell+adhesion+during+dorsal+closure+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Septate junction proteins are required for cell shape changes, actomyosin reorganization and cell adhesion during dorsal closure in Drosophila.</a> Front. Cell Dev. Biol. 10, 947444(2022).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+FERM+protein+Yurt+is+a+negative+regulatory+component+of+the+Crumbs+complex+that+controls+epithelial+polarity+and+apical+membrane+size%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The FERM protein Yurt is a negative regulatory component of the Crumbs complex that controls epithelial polarity and apical membrane size.</a> Dev. Cell. 11 (3), 363-374 (2006).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurexin+IV+and+the+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+form+a+novel+group+of+epithelial+polarity+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neurexin IV and the Na⁺/K⁺-ATPase form a novel group of epithelial polarity proteins.</a> Nature. 459 (7250), 1141-1145 (2009).</li>
<li>Oshima, K., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+protein+dynamics+within+the+septate+junction+reveals+a+highly+stable+core+protein+complex+that+does+not+include+the+basolateral+polarity+protein+Discs+large%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Analysis of protein dynamics within the septate junction reveals a highly stable core protein complex that does not include the basolateral polarity protein Discs large.</a> J. Cell Sci. 124 (Pt 16), 2861-2871 (2011).</li>
<li>Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHartenstein%2C+V+%22Atlas+of+Drosophila+Development%22">Atlas of Drosophila Development</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1993).</li>
<li>Lamb, R. S., Ward, R. E., Schweizer, L., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+coracle%2C+a+member+of+the+protein+4.1+superfamily%2C+has+essential+structural+functions+in+septate+junctions+and+developmental+roles+in+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Drosophila coracle, a member of the protein 4.1 superfamily, has essential structural functions in septate junctions and developmental roles in epithelial cells.</a> Mol. Biol. Cell. 9 (12), 3505-3519 (1998).</li>
<li>Davis, M. J., Talbot, D., Jemc, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assay+for+blood-brain+barrier+integrity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assay for blood-brain barrier integrity in Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (151), e60233(2019).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+polarity+proteins+regulate+Drosophila+tracheal+tube+size+in+parallel+to+the+luminal+matrix+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial polarity proteins regulate Drosophila tracheal tube size in parallel to the luminal matrix pathway.</a> Curr. Biol. 20 (1), 55-61 (2010).</li>
<li>Batz, T., Förster, D., Luschnig, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transmembrane+protein+macroglobulin+complement-related+is+essential+for+septate+junction+formation+and+epithelial+barrier+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The transmembrane protein macroglobulin complement-related is essential for septate junction formation and epithelial barrier function in Drosophila.</a> Development. 141 (4), 899-908 (2014).</li>
<li>Behr, M., Riedel, D., Schuh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+claudin-like+Megatrachea+is+essential+in+septate+junctions+for+epithelial+barrier+function+in%C3%82%C2%A0Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The claudin-like Megatrachea is essential in septate junctions for epithelial barrier function inÂ Drosophila.</a> Dev. Cell. 5 (4), 611-620 (2003).</li>
<li>Wu, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sinuous+is+a+Drosophila+claudin+required+for+septate+junction+organization+and+epithelial+tube+size+control%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Sinuous is a Drosophila claudin required for septate junction organization and epithelial tube size control.</a> J. Cell Biol. 164 (2), 313-323 (2004).</li>
<li>Wu, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Varicose%2C+a+member+of+a+new+subgroup+of+basolateral+MAGUKs%2C+is+required+for+septate+junctions+and+tracheal+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Drosophila Varicose, a member of a new subgroup of basolateral MAGUKs, is required for septate junctions and tracheal morphogenesis.</a> Development. 134 (5), 999-1009 (2007).</li>
<li>Jaspers, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+claudin+Megatrachea+protein+complex%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The claudin Megatrachea protein complex.</a> J. Biol. Chem. 287 (44), 36756-36765 (2012).</li>
<li>Dietzl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li>
<li>Zirin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+transgenic+Drosophila+resource+collections+for+loss-+and+gain-of-function+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Large-scale transgenic Drosophila resource collections for loss- and gain-of-function studies.</a> Genetics. 214 (4), 755-767 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubo capilar para agujas (Boro 1 x 0,5/fibra)</td><td>FHC</td><td>30-30-1</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocal</td><td>Leica</td><td>Stellaris 5&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Cubre el vidrio de 22 x 22 2 de grosor para inyecciones</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-540-B</td><td></td></tr><tr><td>Tapa de vidrio 22 x 30 de grosor 1,5 para imagen</td><td>Corning</td><td>2980-233</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de cultivo para inmunotinción (6 x 50 mm) y nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-958-A</td><td></td></tr><tr><td>Jaula de recogida de embriones</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-100</td><td></td></tr><tr><td>Estereomicroscopio de fluorescencia</td><td>Leica</td><td>MZ10 F</td><td></td></tr><tr><td>Aceite de halocarbono (700)</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-131</td><td></td></tr><tr><td>Heptano</td><td>Fisher Scientific</td><td>H350-4</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de fluorescencia invertida</td><td>Leica</td><td>DMi8</td><td></td></tr><tr><td>Cestas de malla para embriones en descoriación</td><td>Genesee Scientific</td><td>46-101</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412-4</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulador</td><td>Narishige</td><td>MN151</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de microscopio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-2</td><td></td></tr><tr><td>Extractor de agujas</td><td>Instrumentos David Kopf</td><td>Modelo 720</td><td></td></tr><tr><td>Suero normal de burro</td><td>Jackson ImmunoRecherch</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Malla de nylon (120 um)</td><td>Genesee Scientific</td><td>57-102</td><td></td></tr><tr><td>Objetivo HC PL FLUOTR 10X/0.32 PH 1</td><td>Leica</td><td>11506537</td><td></td></tr><tr><td>Objetivo HC PL APO 10x/0.40 CS2</td><td>Leica</td><td>15506407</td><td></td></tr><tr><td>Objetivo HC PL APO 40x/1.30 CS2</td><td>Leica</td><td>15506358</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri 60 x 15 mm</td><td>Corning</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Balancín de plataforma</td><td>Globe Scientific</td><td>GTR-FS</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo primario (Coracle)</td><td>DSHB</td><td>C566.9</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo primario (Coracle)</td><td>DSHB</td><td>C615.16</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo primario (E. cadherina)</td><td>DSHB</td><td>DCAD2</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpos primarios (Mcr)</td><td>Laboratorio de sala, CWRU</td><td>Policlonal de conejillos de indias</td><td></td></tr><tr><td>Rodamina marcada como dextrano de 10 kDa</td><td>Sondas moleculares</td><td>D1824</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario (anti-conejillo de indias Cy3)</td><td>Jackson ImmunoRecherch</td><td>706-165-148</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario (Cy2 anti-ratón de burro)</td><td>Jackson ImmunoRecherch</td><td>715-225-151</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario (anti-rata Cy5 de burro)</td><td>Jackson ImmunoRecherch</td><td>712-175-150</td><td></td></tr><tr><td>Agitador de mesa</td><td>Científica de Nuevo Brunswick</td><td>Agitador de plataforma C2</td><td></td></tr><tr><td>Tegosept (metil 4-hidroxibenzoato)</td><td>TCI</td><td>H0216</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151500</td><td></td></tr><tr><td>Viales para fijación (20 ml de frascos de centelleo líquido WHEATON)</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-341-73C</td><td></td></tr><tr><td>Whatman 3MM&nbsp; Artículo sobre cromatografía</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-716-6H</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Acciones de mosca</fuerte></td><td><fuerte>Genotipo completo</fuerte></td><td><número > fuerte</fuerte></td><td><fuerte>Fuente</fuerte></td></tr><tr><td>cor4</td><td>w*; P{neoFRT}43D cora4/CyO</td><td>52232</td><td>BDSC</td></tr><tr><td>W1118</td><td>w[1118]</td><td>5905</td><td>BDSC</td></tr><tr><td><fuerte>Solución</fuerte></td><td><fuerte>Receta</fuerte></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 veces PBS</td><td>Mezcla 90 g de NaCl, 20 g de Na2HPO4 y 8,3 g de NaH2PO4.H2O y dH20 a 1L. Esteriliza con el filtro. Diluye a 1X con dH2O para los pasos de lavado en la inmunotinción.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución 10% Triton X-100</td><td>Mezcla 1 ml de Triton X-100 a 9 ml de dH2O en un balancín plataforma hasta que se disuelva. Guárdalo a temperatura ambiente.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50% lejía</td><td>Mezclar 10 ml de lejía comercial (7,5% hipoclorito sódico) con 10 ml de agua antes de descorionizar los embriones.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Platos de zumo de manzana</td><td>Hervir 15 g de agar Drosophila en 725 ml de dH2O. Añade 25 g de azúcar y 250 ml de zumo de manzana y mezcla hasta que esté batido. Deja que la solución se enfríe a 55 °C y luego añade 1,3 g de tegosepto y mezcla suavemente. Vierte en placas de Petri de 60 x 15 y deja que se enfríen. Guárdalo a 4 °C.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución de bloqueo</td><td>Mezcla 9,8 ml de 1X PBS con 100 ul de Triton X-100 al 10% y 100 ul de Suero Normal Donkey en un tubo cónico de 15.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución de lavado de embriones</td><td>Haz 10 x de solución de lavado de embriones mezclando 70 g de NaCl y 2 ml de Triton X-100 a 1L de dH2O. Diluye a 1X con dH2O para la solución funcional.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Arreglar</td><td>Precalienta 10 ml de 1X PBS en el microondas. Añadir 0,4 g&nbsp; de paraformaldehído y pipeta para mezclar. Añade 10 uls de NaOH 14N para disolver la velocidad. Coloca sobre un bloque térmico de 90 °C hasta que se disuelva. Cuando no quede paraformaldehído sólido, añade 10 ul de 14N HCL para ajustar el pH a neutro. Siempre lleva bata de laboratorio, guantes y gafas cuando uses paraformaldehído.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medios de montaje</td><td>Mezcla 9 ml de glicerol y 1 ml de 1M Tris base pH 8,0. Añade 0,05 g de n-propil-galato, &nbsp; Mezcla y calienta para disolver. Alícuota 0,5 ml en tubos de Eppendorf. &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución de dextráns de rodamina</td><td>Prepara una solución de colorante fresca disolviendo Dextrán marcado con Rodamina de 10 kDa a 1 mg/ml en fosfato de sodio 0,5M, pH 7,5 y 5 mM de cloruro de potasio.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pasta de levadura</td><td>Mezcla 50 g de levadura comercial (Red Star) con una pizca de sacarosa y suficiente agua para obtener una pasta espesa. Guárdalo a 4 °C.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

experimentos de inmunotinción y penetración de colorantes para definir proteínas de unión septata plisadas en el núcleo en epitelios embrionarios de drosophila

Immunostaining and Dye Penetration Experiments to Define Core Pleated Septate Junction Proteins in Drosophila Embryonic Epithelia

Experimentos de inmunotinción y penetración de colorantes para definir proteínas de unión septata plisadas en el núcleo en epitelios embrionarios de Drosophila

The purpose of these protocols is to evaluate the organization and barrier function of pleated Septate Junctions (pSJs) in the ectodermally-derived ...

immunostaining-dye-penetration-experiments-to-define-core-pleated

Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Este protocolo muestra cómo realizar técnicas de inmunohistoquímica sobre disecados larvas de Drosophila.

Drosophila larval NMJ inmunohistoquímica

La disección y la imagen de zonas activas en el Drosophila La unión neuromuscular

La inmunotinción es una técnica eficaz para visualizar tipos específicos de células y proteínas dentro de los tejidos. Al utilizar la sonicación, el protocolo descrito aquí alivia la necesidad de diseccionar tejidos de Drosophila melanogaster de embriones y larvas en fase avanzada antes de la inmunotinción. Proporcionamos una metodología eficiente para la inmunotinción de larvas enteras fijadas en formaldehído.

La sonicación-facilitado Inmunofluorescencia tinción de etapa tardía embrionario y larval<em&gt; Drosophila</em&gt; Tejidos<em&gt; In Situ</em

Las estructuras adultas de Drosophila se derivan de estructuras en forma de saco llamadas discos imaginales. El análisis de estos discos proporciona información sobre muchos procesos de desarrollo, incluida la determinación de tejidos, el establecimiento de límites de compartimentos, la proliferación celular, la especificación del destino celular y la polaridad celular plana. Este protocolo se utiliza para preparar discos imaginales para microscopía óptica/fluorescente.

La disección y la inmunotinción de imaginal discos de Drosophila melanogaster

Este protocolo demuestra cómo la proximidad Ligadura ensayo se puede usar para detectar in situ en las interacciones proteína-proteína en la unión neuromuscular Drosophila larval. Con esta técnica, los discos grandes y Hu-li shao tai se muestra para formar un complejo en la región postsináptica, una asociación identificado previamente a través de co-inmunoprecipitación.

Detección de In Situ Complejos proteína-proteína en la Drosophila Larval unión neuromuscular Usando proximidad Ligadura Ensayo

Se presenta un protocolo de inmunotinción de montaje completo en embriones de pulgón, en el que se abordan las condiciones críticas para disminuir la tinción de fondo y aumentar la permeabilidad del tejido. Estas condiciones se han desarrollado específicamente para la detección eficaz de la expresión de proteínas en los tejidos embrionarios de los pulgones.

Identificación de las condiciones críticas para inmunotinción en el guisante áfido embriones: El aumento del tejido Permeabilidad y disminución de la tinción de fondo

Presentamos aquí un protocolo mejorado para la preparación de montaje completo y la inmunotensión de los testículos de Drosophila, adecuado para la microscopía confocal y también permitiendo el etiquetado reproducible y confiable. Ilustramos este protocolo por la representación y la cuantificación 3D de los experimentos del colocalization en los spermatocytes grandes S4-S5.

Inmunostaining De Todo El Monte Drosophila Testículos Para El Análisis Confocal 3D De Los Espermatocitos Grandes

Aquí, describimos un protocolo para la detección y localización de la proteína embrionaria de Drosophila y el ARN desde la recolección hasta la preincrustación e incrustación, la inmunotinción y la hibridación in situ de ARNm.

Un protocolo para la inmunohistoquímica y la distribución in situ de ARN dentro del embrión temprano de Drosophila

El presente protocolo detalla la preparación y visualización del tejido fijo del notum pupal de Drosophila . Se puede utilizar para el tejido intacto o herido, y se conserva la arquitectura original del tejido. Los procedimientos para diseccionar, fijar y teñir se describen en este artículo.

Disección, fijación y visualización del Drosophila Pupal Notum

Aquí, presentamos un protocolo detallado para visualizar las redes de microtúbulos en las uniones neuromusculares y las células musculares. Combinado con las potentes herramientas genéticas de Drosophila melanogaster, este protocolo facilita enormemente el cribado genético y el análisis de la dinámica de los microtúbulos para determinar el papel de las proteínas reguladoras de la red de microtúbulos en el sistema nervioso.

Uso de la unión neuromuscular de las larvas de Drosophila y células musculares para visualizar la red de microtúbulos

Este protocolo describe el marcaje de fluorescencia personalizado basado en anticuerpos y la inyección en embriones tempranos de Drosophila para permitir la obtención de imágenes en vivo de proteínas de baja abundancia o modificaciones postraduccionales que son difíciles de detectar utilizando los enfoques tradicionales de GFP/mCherry-tag.

Visualización de proteínas de baja abundancia y modificaciones postraduccionales en embriones vivos de Drosophila mediante inyección de anticuerpos fluorescentes

Aprende a evaluar la organización y función barrera de uniones septata plisadas en embriones de Drosophila mediante inmunotinción y ensayos de permeabilidad con colorantes.

Experimentos de inmunotinción y penetración de colorantes para definir proteínas de unión septata plisadas en el núcleo en epitelios embrionarios de Drosophila (Video) | JoVE Journal

Experimentos de inmunotinción y penetración de colorantes para definir proteínas de unión septata plisadas en el núcleo en epitelios embrionarios de Drosophila

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