Prueba de las barreras fisiológicas a la transmisión del virus en los áfidos con microinyección
14 de mayo de 2008
Los áfidos son transmisores eficaces de virus de plantas. Microinyección de áfidos del virus, el procedimiento que le mostrará hoy en día, es una técnica que permite a los investigadores a inyectar el virus directamente en el hemocele del pulgón, sin pasar por el intestino, una de las dos principales barreras para la transmisión de virus de forma circulatoria. La misma técnica también se utiliza para inyectar dsRNA de RNAi.
Si se trata de transmisores eficaces de virus vegetales, si se trata de micro inyección de virus, el procedimiento que le mostraremos hoy es una técnica que permite a los investigadores inyectar el virus directamente en la célula de la fibrilación auricular, evitando el intestino, una de las dos principales barreras para la transmisión del virus de manera circulante. Hola, soy Cecilia Tamrin Dehi post doc en el departamento de fitopatología de la Universidad de Cornell. Hoy les voy a mostrar cómo inyectar virus en el virus de células hemohemóticas AFI que luego se pueden transmitir a diferentes especies de plantas.
Por ejemplo, esta planta de FE está infectada con el virus de la hoja de papa PLRV. Puedes ver la diferencia entre una planta sana y una infectada. El síntoma más notable es la esclerosis taven.
El PLRV es un virus luthier que es transportado por el APHIS en su hemolinfa, el equivalente de los insectos a la sangre de los mamíferos. Cuando un AFI no infectado se alimenta de una planta infectada, contrae el virus a través de la gripe vegetal, que puedes ver aquí. Una vez ingerido, el virus debe pasar del intestino del insecto a la hemolinfa y luego debe pasar a través de la glándula salival para ser transmitido de nuevo a la planta ESE.
Y si puede tomar muchos virus cuando se alimenta de una planta ESE, sin embargo, solo en la medida en que más fracción pasará a través del intestino y la glándula salival. Las dos principales barreras para que la transmisión infecte a más plantas para probar. Si un AFI está deshabilitado para transmitir un virus, alimentamos al afis con tejido infectado durante dos días, luego permitimos que se alimente en una planta sana durante cinco días.
Luego se fumiga la planta y después de tres semanas comenzamos a buscar síntomas. Cuando encontramos una fibrilación auricular que no puede transmitir un virus, podemos evaluar cuál de las dos barreras está deteniendo el virus mediante el procedimiento de microinyección, que les voy a mostrar hoy. En este procedimiento, el virus se inyecta directamente en la célula hemocélula allí, evitando la barrera de transmisión intestinal.
Así que comencemos y te mostraré cómo micro inyectar un poco de ápice. Así que este es el vidrio, las agujas de vidrio que usamos. Bajamos las agujas de vidrio de estos escudos de vidrio usando APU apu.
Así que este es el micro inyector. Para hacer la micro inyección de un virus. Voy a empezar a poner la aguja en el portaagujas.
Así que simplemente puse la aguja y la puse en su lugar. Así que ahora voy a cargar el virus en la aguja hasta la parte superior de este yelmo. Ahora tenemos que posicionar AFI para la microinyección.
Así que voy a tomar un AFI con la presión del dolor y lo voy a colocar en el soporte AFI. Lo ideal es intentar colocar la parte posterior del pulgón contra el soporte para poder acceder a la parte abdominal de la fibrilación auricular. Está bien, genial.
Ahora podemos seguir adelante y micro inyectar. Bien, ahora voy a colocar la aguja y la voy a acercar a la fibrilación auricular. Así que ahora voy a poner la aguja en contacto con la fibrilación auricular y perforar el exoesqueleto, lo mejor es intentar perforar entre el segmento de la base de las piernas.
Así que voy a inyectarme. Ahora estoy sacando el AFI con el pincel y lo pongo en el papel de recuperación donde voy a dejar que grabe por un momento. Por lo tanto, también necesitamos micro inyectar control afi.
Esta micro inyección de control se realiza solo con el tampón sin el virus. El tampón que utilizamos es 0,1 tampón de fosfato más pH siete. Así que voy a colocar el ajuste A en una planta sana donde voy a permitir que se ajuste durante cinco días después de que voy a destinar la planta y esperar el desarrollo de los síntomas después de la microinyección de la NA de cadena inferior durante una semana cada día, el nivel de expresión del gen objetivo se mide en el afi.
Así que acabamos de microinyectar un afit que no pudo transmitir el virus. Si después de la microinyección, el AFI es capaz de transmitir el virus, significará que este AFI tiene una barrera intestinal que estaba bloqueando el virus. Si, por el contrario, no se desarrollan síntomas, significará que esta afidad tiene una fuerte barrera de glándulas salivales.
Así que acabamos de mostrar cómo microinyectar el virus en los pulgones. Este mismo procedimiento se utiliza para microinyectar ese ARN trenzado en los pulgones para realizar interferencias oculares RNI, que es una técnica interesante para ayudar a estudiar la función génica en los pulgones. Así que eso es todo para la micro inyección.
Espero que lo disfrutes y te sea útil para tus experimentos. Gracias.
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Visión general
Los áfidos sirven como transmisores efectivos de virus vegetales. Este artículo demuestra una técnica de microinyección que permite a los investigadores inyectar virus directamente en el hemocele de los áfidos, evitando el intestino, que es una barrera significativa para la transmisión de virus.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Patología vegetal
- Virología
- Entomología
Antecedentes
- Los áfidos son conocidos vectores de varios virus vegetales.
- Entender los mecanismos de transmisión de virus es crucial para la salud de las plantas.
- Las técnicas de microinyección pueden mejorar la investigación sobre las interacciones virus-huésped.
- La inyección directa en el hemocele evita las barreras digestivas.
Propósito del estudio
- Demostrar la técnica de microinyección para la introducción de virus en áfidos.
- Facilitar el estudio de la transmisión de virus a plantas.
- Proporcionar información sobre los efectos de virus específicos en la salud de las plantas.
Métodos utilizados
- Microinyección de virus en el hemocele de los áfidos.
- Observación de la transmisión de virus a plantas huésped.
- Comparación de plantas infectadas y sanas.
- Documentación de los síntomas asociados con infecciones virales.
Principales resultados
- Se logró la inyección exitosa de virus en los áfidos.
- Las plantas infectadas exhibieron síntomas notables, como esclerosis de taven.
- La técnica permite el estudio directo de los efectos de los virus en las plantas.
- Se demostró el potencial de los áfidos para transmitir virus de manera efectiva.
Conclusiones
- La técnica de microinyección es una herramienta valiosa para estudiar virus vegetales.
- Los áfidos pueden usarse para modelar las dinámicas de transmisión de virus.
- La investigación adicional puede explorar las implicaciones para la salud y el manejo de los cultivos.
Preguntas frecuentes
Executive Industry Relevance
Dissecting physiological barriers to viral transmission in aphids using microinjection enables precise target validation of vector competence in agricultural pathogen models. This approach clarifies mechanistic bottlenecks in virus passage, supporting predictive confidence for translational plant pathology and vector biology research. The method informs risk-adjusted decisions for pipeline strategies targeting vector-borne disease mitigation.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables direct interrogation of gut and salivary gland barriers in vector competence studies.
- Supports mechanistic de-risking by isolating physiological checkpoints in virus transmission.
- Facilitates functional validation of candidate targets affecting pathogen passage in insect vectors.
Screening & Assay Development
- Prepares validated insect models for downstream screening of viral transmission-blocking interventions.
- Standardizes microinjection as a reproducible assay for barrier function analysis.
- Generates quantitative outputs on transmission success post-barrier bypass.
Translational & Preclinical Research
- Aligns vector competence models with disease-relevant transmission scenarios in crop protection pipelines.
- Enables continuity from mechanistic discovery to preclinical validation of vector-targeted strategies.
- Supports predictive de-risking for translational research in plant-virus epidemiology.
Pipeline & Workflow Integration
This microinjection method integrates at the interface of early discovery and preclinical validation in vector biology and plant pathology workflows.
- Discovery Biology: Clarifies physiological checkpoints in vector competence, supporting hypothesis-driven target validation.
- Screening: Provides a standardized assay for evaluating barrier function and intervention efficacy.
- Analytics: Delivers quantitative readouts on viral transmission post-microinjection for comparative analysis.
- Translational Research: Bridges mechanistic findings to preclinical models of vector-borne disease transmission.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable platform for dissecting transmission barriers across vector-pathogen systems.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in vector competence and transmission-blocking strategies.
- Operational Value: Standardizes barrier bypass assays for reproducibility and scalability in R&D pipelines.
- Strategic Value: Informs go/no-go decisions for vector-targeted interventions and resource allocation.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of vector-pathogen targets for translational advancement.
Implementation Considerations
- Requires technical expertise in microinjection and insect handling.
- Needs specialized microinjection instrumentation and validated buffer systems.
- Demands cross-team standardization for assay reproducibility and data comparability.
- May require adaptation for different aphid species or vector-pathogen combinations.
- Limited to physiological barrier analysis; does not address downstream ecological or field-level variables.
