Name: Prueba de tolerancia a la nicotina en los áfidos El uso de un experimento de una dieta artificial (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:17:00.000+00:00
Duration: 6 min 19 s
Description: Aprende a evaluar la tolerancia a la nicotina en áfidos adaptados y no adaptados al tabaco mediante dietas artificiales. Este método revela mecanismos de resistencia en insectos plaga y su interacción con metabolitos secundarios vegetales.

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En este experimento, 4 pulgones adultos están encerrados en un pequeño vaso de plástico. Se alimentan de una dieta líquida pipeta entre dos capas de parafina se extendía sobre la parte superior de la copa. Después de 3 días de alimentación, la toxicidad de las dietas que contienen diferentes concentraciones de nicotina en comparación con el control de las dietas, contando adultos y larvas de áfidos en cada taza. <ol><li> Que las soluciones que contienen sacarosa y 20 aminoácidos. Los áfidos pueden subsistir en esta dieta, a reproducirse a los niveles normales, por lo menos durante una semana. Por favor, vea el archivo adjunto para la alimentación artificial. </li><li> Alícuota de 1 ml de esta dieta en 6 diferentes tubos Eppendorf que contienen nicotina. Etiqueta con respecto a varias concentraciones de nicotina utilizados, que van desde 0-500μM. </li><li> Seleccione 4 pulgones, ya sea rojo o verde, y puso en estas copas experimental. </li><li> Al seleccionar los áfidos, es importante que sean de edad consistente. Por lo general, buscar áfidos de similar tamaño y color (los pulgones rojos se oscurecen cuando son mayores). </li><li> Cubra el recipiente con un trozo de parafilm. Incluya la dieta entre 2 piezas de parafina. Parcialmente estirar el nivel de parafina segundo alrededor de los bordes de la copa. Alícuota de la dieta de líquidos entre las capas, y sellar la capa de arriba hacia abajo. </li><li> Mantener estos vasos en la sala de insectos bajo las luces en un fotoperíodo de día largo por 3 días, tras lo cual los datos del experimento se pueden recoger. </li></ol> Por favor, visite <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825" target="_blank">las revisiones anuales de Biología Vegetal</a> para obtener más información acerca de este protocolo y la inmunidad de plantas a la herbivoría de insectos.

Los autores no tienen nada que revelar.

prueba de tolerancia a la nicotina en los áfidos el uso de un experimento de una dieta artificial

Testing Nicotine Tolerance in Aphids Using an Artificial Diet Experiment

Las plantas pueden regular al alza la producción de muchos metabolitos seconday diferentes en respuesta a la alimentación de los insectos. Uno de estos metabolitos, la nicotina, es bien sabido que tiene propiedades insecticidas. Una de las respuestas de las plantas de tabaco a la herbivoría, o se mordían a los insectos, es aumentar la producción de este alcaloide neurotóxico. Aquí, vamos a demostrar cómo configurar un experimento para responder a esta pregunta de si un tabaco adaptado cepa del áfido verde del duraznero, Myzus persicae, pueden tolerar niveles más altos de nicotina que la cepa A de este insecto que no tabaco infestan en el campo.

En este video y ensayo se ha demostrado que las pruebas de la tolerancia de la nicotina a dos tipos de pulgones que infesta las plantas de tabaco en el campo y que no lo hace.

Prueba de tolerancia a la nicotina en los áfidos El uso de un experimento de una dieta artificial

Las plantas pueden aumentar la producción de muchos metabolitos secundarios diferentes en respuesta a la alimentación de los insectos. Uno de estos metabolitos, la nicotina, está bien...

Las plantas pueden aumentar la producción de muchos metabolitos secundarios diferentes en respuesta a la alimentación de insectos. Una respuesta de las plantas de tabaco a la herbivoría que no están siendo atacadas por los insectos es aumentar la producción del alcaloide neurotóxico nicotina, utilizando nicotina. A modo de ejemplo, demostraré cómo poner en marcha un experimento para evaluar la toxicidad de los metabolitos secundarios de las plantas contra los pulgones.Ciertos linajes de MiSiS persky, el pulgón verde del melocotonero se han adaptado para especializarse en el tabaco cultivado. Aquí planteamos la hipótesis de que estos linajes adaptados al tabaco tienen una mayor resistencia a la nicotina que los linajes no adaptativos. Hola, mi nombre es John Ramsey.Soy estudiante de posgrado en el laboratorio de George Jander en el Instituto Bo Thompson para la Investigación de Plantas. Hoy os voy a enseñar un procedimiento para medir la toxicidad de los metabolitos de las plantas frente a los pulgones. Este procedimiento consiste en preparar una dieta artificial a la que la planta metabolito de interés.En este caso, la nicotina se añade en diferentes concentraciones, enjaulando a los pulgones, de modo que se alimenten de esta dieta y contando los pulgones después de varios días para medir la supervivencia y la fecundidad en diferentes concentraciones de nicotina. Así que comencemos. Con el experimento.Podemos criar pulgones con dietas artificiales, aprovechando su estilo de alimentación en el que insertan un estilo S especializado en la vasculatura de la planta y consumen una dieta de savia de flujo. Preparamos una dieta líquida similar a la que los encuentros A estaban alimentando de una planta que consiste en sacarosa y aminoácidos a esta solución. A continuación, añadimos concentraciones variables del metabolito de la planta.Estamos interesados en determinar la toxicidad de, en este caso, la nicotina. En este experimento, cuatro pulgones adultos están encerrados en un pequeño vaso de plástico. Se alimentan de una dieta líquida pipeteada entre dos capas de biopelículas estiradas sobre la parte superior de la taza después de tres días.La toxicidad alimentaria de las dietas que contienen diferentes concentraciones de nicotina se compara con las dietas de control mediante el recuento de pulgones adultos y larvales en cada taza. Ahora es el momento de preparar la dieta experimental. Tengo aquí una solución de sacarosa y 20 aminoácidos.Los pulgones pueden sobrevivir y reproducirse normalmente con esta dieta durante al menos una semana. Ahora tengo alícuota esta dieta en un mililitro, Alec Watts que contiene concentraciones variantes de nicotina de cero a 500 micromolares en estos tubos fendor, luego se seleccionan cuatro pulgones rojos o verdes y se colocan en estas tazas experimentales. Se utiliza un pincel para levantar delicadamente los pulgones de la hoja y ponerlos en la taza experimental.Al seleccionar pulgones, es importante elegir insectos del mismo tamaño y color general, pulgones más oscuros, como este, que pueden ser más viejos y no ser apropiados para este experimento. Luego estiraré la primera capa de phim sobre la parte superior de la taza para contener los pulgones. A continuación, alícuota 100 microlitros de la dieta líquida entre las dos capas de paraformas y luego estiraré la segunda capa de paraformas asegurándola alrededor de los bordes de la taza.He pinchado estos agujeros de aire para asegurarme de que haya un buen flujo de aire a través del experimento, y pondré esta taza en este soporte de tubo y la colocaré en un estante en la sala de insectos bajo un largo período de fotos de día bajo luces. Así que aquí podemos ver los resultados de un experimento, que preparé hace tres días de la misma manera que el experimento que acabo de demostrar. Tengo una taza, cada uno de pulgones verdes y rojos en una dieta de nicotina de cero micromolares, 10 micromolares, 100 micromolares y 1000 micromolares o un milimolar.Y se puede ver que para la dieta de control cero nicotina micromolar, tanto el pulgón rojo como el verde sobreviven y se reproducen. Asimismo, en la dieta de 10 micromolares, tenemos una gran cantidad de progenie de pulgón rojo. Todavía tenemos adultos verdes, pero no tienen mucha progenie.Por lo tanto, pueden estar sintiendo los efectos de la nicotina, incluso en una concentración tan baja como 10 micromolares. Aquí no hay pulgones verdes adultos supervivientes en la dieta de nicotina de cien micromolares, pero los pulgones rojos sobreviven y se reproducen al mismo nivel que el control. Se puede ver en la dieta que contiene 1000 micromolares de nicotina.Ni el pulgón verde ni el pulgón rojo son capaces de sobrevivir. Entonces, en base a esto, podemos considerar la posibilidad de que una de las adaptaciones que ha permitido que el linaje rojo MiSiS infeste el tabaco en el campo es una mayor capacidad para desintoxicar la nicotina. Acabamos de mostrarte cómo montar un experimento para utilizar dietas artificiales para medir la toxicidad de los metabolitos secundarios de las plantas frente a los pulgones.Al organizar estos experimentos, es importante recordar elegir insectos que no solo sean del mismo tamaño y color, sino que también provengan de plantas en etapas de desarrollo similares. Así que eso es todo. Gracias por mirar y buena suerte con tus experimentos.

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Resistencia de las plantas a insectos herbívoros de mascar puede ser probado de varias maneras. En este sentido, se muestra cómo configurar una opción y no un experimento de elección con la planta modelo Arabidopsis thaliana para identificar la resistencia contra la plaga de especies Violación de Pieris.

Elección y no elección-Los ensayos para probar la resistencia de A. thaliana a insectos masticadores

Los áfidos son transmisores eficaces de virus de plantas. Microinyección de áfidos del virus, el procedimiento que le mostrará hoy en día, es una técnica que permite a los investigadores a inyectar el virus directamente en el hemocele del pulgón, sin pasar por el intestino, una de las dos principales barreras para la transmisión de virus de forma circulatoria. La misma técnica también se utiliza para inyectar dsRNA de RNAi.

Prueba de las barreras fisiológicas a la transmisión del virus en los áfidos con microinyección

Este video describe el ensayo de preferencia gustativa, un método conductual utilizado para medir la atracción o evitación hacia soluciones coloreadas que tienen un sabor diferente al evaluar la coloración abdominal de la mosca después de la ingestión de la sustancia preferida. El protocolo presentado demuestra el procedimiento utilizado para medir la preferencia de las moscas hacia soluciones de diferentes concentraciones de sacarosa.

Ensayo de preferencia gustativa: un método para medir el comportamiento alimentario en Drosophila

Se describe un novedoso ensayo conductual para investigar las respuestas gustativas a corto plazo de las piezas bucales de abejorros (Bombus terrestris) que se mueven libremente hacia los nutrientes y toxinas en solución.

A Novel Behavioral Ensayo para investigar las respuestas gustativas de individual, libre de movimiento abejorros (<em&gt; Bombus terrestris</em&gt;)

El gusto es un proceso sensorial importante que facilita la atracción hacia sustancias beneficiosas y evita las sustancias tóxicas.  Este protocolo describe un ensayo de ingestión simple para determinar la preferencia gustativa de Drosophila por un compuesto químico determinado.

Ensayo Preferencia gusto por adulto<em&gt; Drosophila</em

El pulgón Aphis nerii coloniza plantas muy defendido en la familia del dogbane (Apocyanaceae) y ofrece numerosas oportunidades para el estudio de las interacciones planta-insecto. Aquí, presentamos una serie de protocolos para el mantenimiento de la planta y el pulgón de las culturas y la generación y el análisis molecular y los datos de a. nerii- omic.

Mantenimiento de cultivos biológicos y medir la expresión génica en Aphis nerii: un sistema no-modelo de las interacciones planta-insecto

Aquí, describimos la construcción y el uso de un túnel de viento para olor había mediada ensayos conductuales con insectos. El diseño de túnel de viento facilita la liberación de las fuentes de olor por varios métodos, con y sin estímulos visuales. Túnel de viento los experimentos es métodos importantes para identificar su comportamiento activos sustancias químicas volátiles.

Un túnel de viento para olor mediada por insectos ensayos conductuales

El presente protocolo proporciona información instructiva para el uso del gusano del tabaco Manduca sexta en la investigación de cannabinoides.  El método descrito aquí incluye todos los suministros y protocolos necesarios para monitorear los cambios fisiológicos y de comportamiento del modelo de insecto en respuesta al tratamiento con cannabidiol (CBD).

El gusano del cuerno del tabaco como sistema modelo de insectos para estudios preclínicos de cannabinoides

Este protocolo describe el ensayo de alimentación obligada para evaluar el efecto potencialmente tóxico de un fitoquímico en las larvas de insectos lepidópteros. Este es un bioensayo de insectos altamente escalable, fácil de optimizar la dosis subletal y letal, la actividad disuasoria y el efecto fisiológico. Esto podría usarse para detectar insecticidas ecológicos.

Desarrollo de un sistema de ensayo de alimentación para evaluar el efecto insecticida de los fitoquímicos en Helicoverpa armigera

Este protocolo presenta un sistema optimizado de bioensayo de hojas sueltas para evaluar la efectividad de hongos entomopatógenos (EPF) contra el pulgón de la mostaza (Lipaphis erysimi (Kalt.)), un insecto partenogenético. El método describe el proceso de recopilación de datos durante los experimentos con placas de Petri, lo que permite a los investigadores medir de manera consistente la virulencia de EPF contra pulgones de la mostaza y otros insectos partenogenéticos.

Evaluación del efecto afidicida de hongos entomopatógenos contra insectos partenogenéticos, pulgón de la mostaza, Lipaphis erysimi (Kalt.)

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Cría de la mariposa blanca de la col (Pieris rapae) en condiciones controladas: un estudio de caso con tolerancia a metales pesados

Aprende a evaluar la tolerancia a la nicotina en áfidos adaptados y no adaptados al tabaco mediante dietas artificiales. Este método revela mecanismos de resistencia en insectos plaga y su interacción con metabolitos secundarios vegetales.

Prueba de tolerancia a la nicotina en los áfidos El uso de un experimento de una dieta artificial

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