Name: Evaluación colorimétrica de la actividad de la deiodinasa 1 en microsomas hepáticos humanos utilizando la reacción de Sandell-Kolthoff (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T13:05:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: Aprende a evaluar la actividad de la deiodinasa 1 en microsomas hepáticos humanos mediante el ensayo colorimétrico Sandell-Kolthoff. Este método no radiactivo permite identificar inhibidores que alteran la homeostasis hormonal tiroidea.

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<ol><li>Kabir, E. R., Rahman, M. S., Rahman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+endocrine+disruptors+and+their+possible+impacts+on+human+health%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">A review on endocrine disruptors and their possible impacts on human health.</a> Environ Toxicol Pharmacol. 40 (1), 241-258 (2015).</li>
<li>Yue, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+exposure+to+a+mixture+of+endocrine+disruptors+and+serum+levels+of+thyroid+hormones%3A+a+cross-sectional+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Environ+Sci%22%5BJournal%5D)">Human exposure to a mixture of endocrine disruptors and serum levels of thyroid hormones: a cross-sectional study.</a> J Environ Sci. 125, 641-649 (2023).</li>
<li>Köhrle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+deiodinase+family%3A+selenoenzymes+regulating+thyroid+hormone+availability+and+action%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The deiodinase family: selenoenzymes regulating thyroid hormone availability and action.</a> Cell Mol Life Sci. 57 (13), 1853-1863 (2000).</li>
<li>Zhang, J., Lazar, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+action+of+thyroid+hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">The mechanism of action of thyroid hormones.</a> Annu Rev Physiol. 62 (1), 439-466 (2000).</li>
<li>França, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+type+1+iodothyronine+deiodinase+%28DIO1%29+mutations+cause+abnormal+thyroid+hormone+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Human type 1 iodothyronine deiodinase (DIO1) mutations cause abnormal thyroid hormone metabolism.</a> Thyroid. 31 (2), 202-207 (2020).</li>
<li>Weber, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+predictivity+of+the+DIO1-SK+assay+to+investigate+DIO1+inhibition+in+human+liver+microsomes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the predictivity of the DIO1-SK assay to investigate DIO1 inhibition in human liver microsomes.</a> Appl Vitro Toxicol. 9 (2), 44-59 (2023).</li>
<li>Weber, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+method+to+study+thyroid+hormone+disruption%3A+optimization+and+standardization+of+an+assay+to+assess+the+inhibition+of+DIO1+enzyme+in+human+liver+microsomes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A new approach method to study thyroid hormone disruption: optimization and standardization of an assay to assess the inhibition of DIO1 enzyme in human liver microsomes.</a> Appl Vitro Toxicol. 8 (3), 67-82 (2022).</li>
<li>Renko, K., Hoefig, C. S., Hiller, F., Schomburg, L., Köhrle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+iopanoic+acid+as+substrate+of+type+1+deiodinase+by+a+novel+nonradioactive+iodide-release+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Identification of iopanoic acid as substrate of type 1 deiodinase by a novel nonradioactive iodide-release assay.</a> Endocrinology. 153 (5), 2506-2513 (2012).</li>
<li>Renko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+nonradioactive+screening+method+identifies+genistein+and+xanthohumol+as+potent+inhibitors+of+iodothyronine+deiodinases%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">An improved nonradioactive screening method identifies genistein and xanthohumol as potent inhibitors of iodothyronine deiodinases.</a> Thyroid. 25 (8), 962-968 (2015).</li>
<li>Olker, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+the+ToxCast+phase+1%2C+phase+2%2C+and+e1k+chemical+libraries+for+inhibitors+of+iodothyronine+deiodinases%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Screening the ToxCast phase 1, phase 2, and e1k chemical libraries for inhibitors of iodothyronine deiodinases.</a> Toxicol Sci. 168 (2), 430-442 (2019).</li>
<li>Sane, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+highly+potent+and+isoenzyme-selective+inhibitors+of+deiodinase+type+I+via+a+nonradioactive+high-throughput+screening+method%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of highly potent and isoenzyme-selective inhibitors of deiodinase type I via a nonradioactive high-throughput screening method.</a> Thyroid. 35 (5), 576-589 (2025).</li>
<li>Visser, T. J., Van Overmeeren, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Binding+of+radioiodinated+propylthiouracil+to+rat+liver+microsomal+fractions%3A+stimulation+by+substrates+for+iodothyronine+5%E2%80%B2-deiodinase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Binding of radioiodinated propylthiouracil to rat liver microsomal fractions: stimulation by substrates for iodothyronine 5′-deiodinase.</a> Biochem J. 183 (1), 167-169 (1979).</li>
<li>Hindrichs, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+fast+online+SPE-LC-MS%2FMS+method+to+quantify+thyroid+hormone+metabolites+in+rat+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Res+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A novel and fast online SPE-LC-MS/MS method to quantify thyroid hormone metabolites in rat plasma.</a> Chem Res Toxicol. 37 (1), 33-41 (2024).</li>
<li>Kolthoff, I. M., Sandell, E. B., Lingane, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+persulfate-arsenite+method+for+manganese%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">A modified persulfate-arsenite method for manganese.</a> Anal Chem. 8 (1), 73-73 (1936).</li>
<li>Stefanidis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+robustness+and+accuracy+of+the+deiodinase+1+Sandell%E2%80%93Kolthoff+assay%3A+a+comparative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the robustness and accuracy of the deiodinase 1 Sandell–Kolthoff assay: a comparative analysis.</a> Appl Vitro Toxicol. 10 (4), 80-90 (2024).</li>
<li>Satya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidance+document+on+standardised+test+guidelines+for+evaluating+chemicals+for+endocrine+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22OECD+Environ+Health+Saf+Publ%22%5BJournal%5D)">Guidance document on standardised test guidelines for evaluating chemicals for endocrine disruption.</a> OECD Environ Health Saf Publ. 150, (2012).</li>
<li>Joseph, O., Eberle, M., Lieberman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolites+in+urine+that+interfere+with+the+Sandell%E2%80%93Kolthoff+assay+for+urinary+iodine%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Trace+Elem+Res%22%5BJournal%5D)">Metabolites in urine that interfere with the Sandell–Kolthoff assay for urinary iodine.</a> Biol Trace Elem Res. 202 (2), 466-472 (2024).</li>
<li>May, W., Wu, D., Eastman, C., Bourdoux, P., Maberly, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+automated+urinary+iodine+methods%3A+problems+of+interfering+substances+identified%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Evaluation of automated urinary iodine methods: problems of interfering substances identified.</a> Clin Chem. 36 (6), 865-869 (1990).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-Tio-&beta;-D-glucosa sal sódica</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6375-1G</td><td>CAS 10593-29-0</td></tr><tr><td>3,3',5'-triiodotironina (rT3)&nbsp;</td><td>Santa Cruz Biotecnología</td><td>SC-209692</td><td>CAS 5817-39-0</td></tr><tr><td>6-propil-2-tiouracilo (6PTU)</td><td>Supelco</td><td>P3755-10G</td><td>CAS 51-52-5</td></tr><tr><td>Ácido acético</td><td>Thermo Fisher</td><td>9526-33</td><td>CAS 64-19-7</td></tr><tr><td>Balance analítico</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Capaz de pesar con precisión hasta 30 g con 0,1 mg de legibilidad</td></tr><tr><td>Óxido de arsénico sódico (NaAsO2)</td><td>Thermo Fisher</td><td>041533.AP</td><td>CAS 7784-46-5</td></tr><tr><td>Placas de ensayo (formato de 96 pozos)</td><td>Merck</td><td>Z707902-108EA</td><td>por ejemplo, placas de cultivo de tejidos, placa de 96 pozos, fondo plano, poliestireno, 0,34 cm2, estéril, 108/cs, TPP</td></tr><tr><td>Aurothioglucosa (ATG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0606-5MG</td><td>CAS 12192-57-3</td></tr><tr><td>Tubos de centrifugadora 15 y 50&nbsp; mL</td><td>Merck</td><td>Z707724-800EA, Z707716-320EA</td><td>por ejemplo, tubos de centrifugadora TPP, volúmenes 15 y 50 mL, polipropileno y nbsp;</td></tr><tr><td>Centrífuga con rotor abatible para placas de microtitulación</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Debería ser lo suficientemente alta para caber una placa de pozo de 96 de profundidad con una placa filtrante de 96 pozos encima (al menos unos 6 cm de alto).</td></tr><tr><td>Sulfato de amonio de cerio (IV) (Ce(NH4)4(SO4)4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22269-100G-F</td><td>CAS 10378-47-9</td></tr><tr><td>Incubadora de CO2</td><td>NA</td><td>NA</td><td>capaz de mantener temperaturas de 37°C; C, 5% de CO2 y &ge; 90% de humedad</td></tr><tr><td>Placas de pozo profundo (formato de 96 pozos)</td><td>Supelco</td><td>575653-U</td><td>por ejemplo, SPE 96-Deep Square Well Collection Plate, volumen de pozo 2 mL, polipropileno</td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>AppliChem</td><td>A3672.0250</td><td>CAS 67-68-5</td></tr><tr><td>Ditiotreitol (TDT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779-1G</td><td>CAS 3483-12-3</td></tr><tr><td>Ácido etilendediaminetetraacético (EDTA) y nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>APO456787707-500G</td><td>CAS 6381-92-6</td></tr><tr><td>Placas de filtro (formato de 96 pozos)</td><td>Merck</td><td>WHA77002810</td><td>por ejemplo, Micro-Placas, 96-pozos, poliestireno transparente, 800 y micro; L, unión de ADN, Whatman</td></tr><tr><td>Selladores de placas herméticos al gas</td><td>Thermo Fisher</td><td>232698</td><td>por ejemplo, cinta de sellado, poliéster, estéril, cinta de sellado, poliéster, estéril, Nunc</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Pan Biotech</td><td>P05-01100</td><td>CAS 7365-45-9</td></tr><tr><td>Microsomas hepáticos humanos</td><td>Biovit</td><td>X008070</td><td>por ejemplo, INVITROCYP 150-Microsomas hepáticos humanos agrupados por donantes</td></tr><tr><td>Yoduro (estándar de CI)</td><td>Supelco</td><td>41271-100ML</td><td>por ejemplo, estándar de yoduro para CI, 1000 mg/L en agua, Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>Resina de intercambio iónico como la Dowex 50WX2</td><td>Roth</td><td>334.4</td><td>CAS 12612-37-2; Malla 100-200</td></tr><tr><td>Tubos microcentrífugas 1.5&nbsp; mL</td><td>Merck</td><td>EP0030120086-1PAK</td><td>por ejemplo, Eppendorf & reg; Tubos de microcentrífuga Safe-Lock, volumen 1,5 mL, naturales</td></tr><tr><td>Dispensador multicanal capaz de entregar entre 50 y 300 y 300 Mbps; & micro; L por paso</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Pipeta multicanal capaz de entregar de 10 a 100 a 100 nbsp; & micro; L por paso</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Medidor de pH con electrodo y buffers de calibración</td><td>NA</td><td>NA</td><td>capaz de leer +/- 0,1 unidades de pH</td></tr><tr><td>Fotómetro para medición de absorbancia</td><td>Tecan Trading AG</td><td>NA</td><td>por ejemplo, Sunrise Absorbance Reader, INSTSUN-3</td></tr><tr><td>Pipetas capaces de entregar de 1 a 10&nbsp; & micro; L</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Pipetas capaces de entregar entre 10 y 100 nbsp; & micro; L</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Pipetas capaces de entregar entre 100 y 1000 &nbsp; & micro; L&nbsp;</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Pipetas para volúmenes superiores</td><td>NA</td><td>NA</td><td>pipetas serológicas, por ejemplo, 10, 25, 50 mL</td></tr><tr><td>Agitador de platos</td><td>Thermo Fisher</td><td>NA</td><td>por ejemplo, placa de microtitulación Thermo Scientific H+P monoshake vortexer, controlada directamente</td></tr><tr><td>Pipeta repetidora</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Cloruro de sodio (NaCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888-25G</td><td>CAS: 7647-14-5, por ejemplo, cloruro de sodio, reactivo ACS, etc; 99.0 %</td></tr><tr><td>Software de estadística</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Capaz de realizar análisis de regresión que refleje características del ensayo y capaz de calcular concentraciones inhibitorias, por ejemplo, GraphPad Prims 8, GraphPad</td></tr><tr><td>Ácido sulfúrico (H2SO4)&nbsp;</td><td>Supelco</td><td>1007311000</td><td>CAS 7664-93-9</td></tr><tr><td>Matraz volumétrico</td><td>NA</td><td>NA</td><td>certificado con volumen definido</td></tr></tbody></table>

evaluación colorimétrica de la actividad de la deiodinasa 1 en microsomas hepáticos humanos utilizando la reacción de sandell-kolthoff

Colorimetric Assessment of Deiodinase 1 Activity in Human Liver Microsomes Using the Sandell-Kolthoff Reaction

Evaluación colorimétrica de la actividad de la deiodinasa 1 en microsomas hepáticos humanos utilizando la reacción de Sandell-Kolthoff

This method enables the identification of test substances that inhibit DIO1 activity and may thus interfere with thyroid hormone homeostasis. The protocol ...

colorimetric-assessment-deiodinase-1-activity-human-liver-microsomes

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

La actividad de la descarboxilasa inducible lisina es controlada por la reacción del sustrato L-lisina y el producto cadaverina con 2,4,6-trinitrobenzensulfonic ácido para formar aductos que tienen una solubilidad diferencial en tolueno.

Un ensayo para medir la actividad de Escherichia coli Inducible lisina Decarboxyase

En este video, describimos un método basado en la colorimetría para determinar el contenido de hierro no hemo en el tejido hepático de ratón. El sulfonato de batofenantrolina se utiliza como sustrato cromogénico en presencia de un agente reductor, que convierte el hierro férrico en hierro ferroso quelastable.

Ensayo colorimétrico basado en sulfonato de bateofenantrolina: un método simple y rápido para la cuantificación de hierro no hemo en tejido hepático de ratón

Este trabajo presenta un flujo de trabajo de microscopía de alto contenido para la cuantificación simultánea de los niveles de ROS intracelular, así como el potencial de membrana mitocondrial y la morfología -conocidas conjuntamente como morfofonción mitocondrial- en células adherentes vivas utilizando las moléculas reportero fluorescentes permeantes a las células 5- 6) - clorometil - 2 ', 7' - diclorodihidrofluoresceína, éster acetilico (CM - H _ { 2 } DCFDA) y éster metílico de...

Perfilado Redox Celular Utilizando Microscopía de Alto Contenido

Competencia metabólica de los sistemas in vitro es un requisito clave para la biotransformación y la disposición de fármacos y sustancias tóxicas. En este protocolo, se describe la aplicación de sondas metabólicos de referencia para evaluar la fase I metabolismo en cultivos celulares.

La espectrometría de masa y enfoques basados ​​en luminogénico para caracterizar la fase I metabólico de Competencia<em&gt; In Vitro</em&gt; Cultivos Celulares

Aquí, presentamos un protocolo que puede utilizarse para visualizar microscópicamente y cuantificar la actividad de Deshidrogenasas en las células y tejidos y su cinética, función y localización subcelular.

Mapeo metabólico: Citoquímica enzimática cuantitativa y la histoquímica para determinar la actividad de Deshidrogenasas en células y tejidos

Se describe un protocolo para el mapeo de la distribución espacial de la actividad enzimática de las enzimas que generan nicotinatmide adenina-dinucleótido-fosfato (NAD(P)H) + H + directamente en muestras de tejido.

Asignación de metabolismo: Supervisar la actividad de la deshidrogenasa del lactato directamente en el tejido

Aquí se describe un protocolo simple y bien validado para medir la actividad de autofagia secuestro a granel en células de mamíferos. El método se basa en cuantificar la proporción de lactato deshidrogenasa (LDH) en fracciones celulares de sedimentables en comparación con los niveles de LDH celulares total.

El ensayo de secuestro del lactato deshidrogenasa, Es un método Simple y confiable para determinar la actividad de autofagia secuestro a granel en células de mamíferos

Aquí, se proporciona un protocolo para la medición del contenido de hierro no hemo en tejidos animales, utilizando un ensayo colorimétrico simple y bien establecido que se puede implementar fácilmente en la mayoría de los laboratorios.

Medición del contenido de hierro no hemo en tejidos utilizando un ensayo colorimétrico basado en batofenantrolina

Se prepararon esferoides tumorales 3D multicelulares con células de adenocarcinoma de pulmón, fibroblastos y monocitos, seguidos del aislamiento de fibroblastos asociados al cáncer (CAF) de estos esferoides. Los CAF aislados se compararon con fibroblastos normales para evaluar la salud mitocondrial mediante el estudio del potencial transmembrana mitocondrial, las especies reactivas de oxígeno y las actividades enzimáticas.

Evaluación de la salud mitocondrial en fibroblastos asociados al cáncer aislados de esferoides tumorales de pulmón multicelulares 3D

Aquí, presentamos una compilación de ensayos para medir directamente la función mitocondrial en células de mamíferos independientemente de su capacidad para consumir oxígeno molecular.

Ensayos independientes del oxígeno para medir la función mitocondrial en mamíferos

Este protocolo describe un método novedoso para cuantificar las especies reactivas de oxígeno (ROS) intracelulares utilizando dihidroetidio (DHE) como sonda de colorante de fluorescencia utilizando un enfoque de cribado de alto rendimiento. El protocolo describe los métodos para la evaluación cuantitativa de las especies reactivas de oxígeno (ROS) intracelulares en las tres líneas celulares diferentes de carcinoma hepatocelular.

Evaluación de cribado de alto rendimiento de la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS) mediante colorante de fluorescencia de dihidroetidio (DHE)

Aprende a evaluar la actividad de la deiodinasa 1 en microsomas hepáticos humanos mediante el ensayo colorimétrico Sandell-Kolthoff. Este método no radiactivo permite identificar inhibidores que alteran la homeostasis hormonal tiroidea.

Evaluación colorimétrica de la actividad de la deiodinasa 1 en microsomas hepáticos humanos utilizando la reacción de Sandell-Kolthoff (Video) | JoVE Journal

Evaluación colorimétrica de la actividad de la deiodinasa 1 en microsomas hepáticos humanos utilizando la reacción de Sandell-Kolthoff

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