Name: Producción y pruebas de péptidos antimicrobianos y sus imitadores (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T13:08:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: Aprende a sintetizar y evaluar péptidos antimicrobianos como Mel4 y su imitador RK-758 mediante ensayos de CMI, CMB y citotoxicidad en células L-929. Este protocolo integra producción, pruebas biológicas y análisis de seguridad para el desarrollo de nuevos agentes antiinfecciosos.

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<ol><li>Naghavi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+bacterial+antimicrobial+resistance+1990%E2%80%932021%3A+a+systematic+analysis+with+forecasts+to+2050%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global burden of bacterial antimicrobial resistance 1990–2021: a systematic analysis with forecasts to 2050.</a> Lancet. 404 (10459), 1199-1226 (2024).</li>
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<li>Pasupuleti, M., Schmidtchen, A., Malmsten, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+peptides%3A+key+components+of+the+innate+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Crit.+Rev.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial peptides: key components of the innate immune system.</a> Crit. Rev. Biotechnol. 32 (2), 143-171 (2012).</li>
<li>Oliveira Júnior, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+peptides%3A+structure%2C+functions+and+translational+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial peptides: structure, functions and translational applications.</a> Nat. Rev. Microbiol. , (2025).</li>
<li>Keshri, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LL-37%2C+the+master+antimicrobial+peptide%2C+its+multifaceted+role+from+combating+infections+to+cancer+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Antimicrob.+Agents%22%5BJournal%5D)">LL-37, the master antimicrobial peptide, its multifaceted role from combating infections to cancer immunity.</a> Int. J. Antimicrob. Agents. 65 (1), 107398(2025).</li>
<li>Alzain, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+peptides%3A+mechanisms%2C+applications%2C+and+therapeutic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Drug+Resist%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial peptides: mechanisms, applications, and therapeutic potential.</a> Infect. Drug Resist. , 4385-4426 (2025).</li>
<li>Kuppusamy, R., Willcox, M., Black, D. S., Kumar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+cationic+peptidomimetic+antimicrobials%5BTitle%5D)+AND+%22Antibiotics%22%5BJournal%5D)">Short cationic peptidomimetic antimicrobials.</a> Antibiotics. 8 (2), (2019).</li>
<li>Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptides+chemistry%2C+manufacturing%2C+and+controls%5BTitle%5D)+AND+%22Peptide+Science%3A+Chemical+Ligation%2C+Lead+Generation%2C+and+Therapeutic+Advances%22%5BJournal%5D)">Peptides chemistry, manufacturing, and controls.</a> Peptide Science: Chemical Ligation, Lead Generation, and Therapeutic Advances. , 471-508 (2025).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+purification+of+antimicrobial+peptide+buforin+IIb+in+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Expression and purification of antimicrobial peptide buforin IIb in Escherichia coli.</a> Biotechnol. Lett. 33 (11), 2121-2126 (2011).</li>
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<li>Gentilucci, L., De Marco, R., Cerisoli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+modifications+designed+to+improve+peptide+stability%3A+incorporation+of+non-natural+amino+acids%2C+pseudo-peptide+bonds%2C+and+cyclization.%C2%A0Curr.+Pharm+pseudo-peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Des%22%5BJournal%5D)">Chemical modifications designed to improve peptide stability: incorporation of non-natural amino acids, pseudo-peptide bonds, and cyclization. Curr. Pharm pseudo-peptide.</a> Des. 16 (28), 3185-3203 (2010).</li>
<li>Kuppusamy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+the+anthranilamide+peptidomimetic+design+to+selectively+target+planktonic+bacteria+and+biofilm%5BTitle%5D)+AND+%22Antibiotics%22%5BJournal%5D)">Tuning the anthranilamide peptidomimetic design to selectively target planktonic bacteria and biofilm.</a> Antibiotics. 12 (3), 585(2023).</li>
<li>Kuppusamy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guanidine+functionalized+anthranilamides+as+effective+antibacterials+with+biofilm+disruption+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Biomol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Guanidine functionalized anthranilamides as effective antibacterials with biofilm disruption activity.</a> Org. Biomol. Chem. 16 (32), 5871-5888 (2018).</li>
<li>Wiegand, I., Hilpert, K., Hancock, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agar+and+broth+dilution+methods+to+determine+the+minimal+inhibitory+concentration+%28MIC%29+of+antimicrobial+substances%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances.</a> Nat. Protoc. 3 (2), 163-175 (2008).</li>
<li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adsorption+and+morphology+analysis+of+bovine+serum+albumin+on+a+micropillar-enhanced+quartz+crystal+microbalance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+Chem.+B%22%5BJournal%5D)">Adsorption and morphology analysis of bovine serum albumin on a micropillar-enhanced quartz crystal microbalance.</a> J. Phys. Chem. B. 128 (41), 10247-10257 (2024).</li>
<li>Yasir, M., Dutta, D., Willcox, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+antimicrobial+peptides+and+ciprofloxacin+against+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Activity of antimicrobial peptides and ciprofloxacin against Pseudomonas aeruginosa biofilms.</a> Molecules. 25 (17), (2020).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+determination+of+susceptibility+of+bacteria+to+antimicrobial+agents.+terminology%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Infect%22%5BJournal%5D)">Methods for the determination of susceptibility of bacteria to antimicrobial agents. terminology.</a> Clin. Microbiol. Infect. 4 (5), 291-296 (1998).</li>
<li>Saetan, T., Sukwattanasinitt, M., Wacharasindhu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mild+photocatalytic+synthesis+of+guanidine+from+thiourea+under+visible+light%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Lett%22%5BJournal%5D)">A mild photocatalytic synthesis of guanidine from thiourea under visible light.</a> Org. Lett. 22 (20), 7864-7869 (2020).</li>
<li>Woodring, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disrupting+the+conserved+salt+bridge+in+the+trimerization+of+influenza+A+nucleoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Disrupting the conserved salt bridge in the trimerization of influenza A nucleoprotein.</a> J. Med. Chem. 63 (1), 205-215 (2019).</li>
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<li>Deni, W. H., Gao, T., Wu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+reconstituting+peptides%2Fpeptidomimetics+from+DMSO+to+aqueous+buffers+for+circular+dichroism+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for reconstituting peptides/peptidomimetics from DMSO to aqueous buffers for circular dichroism analyses.</a> STAR Protoc. 5 (1), 102850(2024).</li>
<li>Lou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+production+systems+and+optimization+strategies+of+antimicrobial+peptides%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Microbiol.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Microbial production systems and optimization strategies of antimicrobial peptides: a review.</a> World J. Microbiol. Biotechnol. 41 (2), 66(2025).</li>
<li>Hancock, R. E., Sahl, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+and+host-defense+peptides+as+new+anti-infective+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial and host-defense peptides as new anti-infective therapeutic strategies.</a> Nat. Biotechnol. 24 (12), 1551-1557 (2006).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,2-ethanedithiol</td><td>Oakwood&nbsp;</td><td>M03555</td><td></td></tr><tr><td>100X Antibióticos</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5955-20ML</td><td></td></tr><tr><td>1-Etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida Clorhidrato</td><td>Bloqueos combi</td><td>SS-7536</td><td>A partir de ahora se denominará EDC</td></tr><tr><td>2-Naftoilcloruro</td><td>Bloqueos combi</td><td>OR-0173</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético y nbsp;</td><td>Ajax Finechem</td><td>R18401O</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrilo</td><td>VWR&nbsp;</td><td>20060.35</td><td></td></tr><tr><td>Fosfatasa alcalina</td><td>New England Biolabs</td><td>M0525S</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina (BSA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A1933</td><td></td></tr><tr><td>Caldo Mueller-Hinton ajustado por catión (CAMHB)</td><td>Becton, Dickinson y Compañía</td><td>212322</td><td></td></tr><tr><td>Cbz-L-Trp</td><td>Bloqueos combi</td><td>QB-6691</td><td></td></tr><tr><td>Colistina&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C4461</td><td></td></tr><tr><td>Dey-Engley (D/E) Caldo Neutralizante</td><td>Oxóide</td><td>R453042</td><td></td></tr><tr><td>Tierra de diatomeas (Celite 545)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>102693</td><td>Tamaño de partícula de 0,02-0,1 mm</td></tr><tr><td>Diclorometano (DCM)</td><td>VWR&nbsp;</td><td>23366.327</td><td></td></tr><tr><td>Éter dietílico</td><td>Suministros químicos</td><td>EA036</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Chem-Supply Pty Ltd&nbsp;</td><td>LCS-CHEM-0098</td><td></td></tr><tr><td>Ditiotreitol (DTT)</td><td>Termo Científica</td><td>J15397.03</td><td></td></tr><tr><td>Medio de cultivo DMEM</td><td>Thermo Fisher Scientific y nbsp;</td><td>UCS-BIO-0058</td><td></td></tr><tr><td>Hospedador de E. coli BL21(DE3)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>70235-M</td><td></td></tr><tr><td>Electroporador</td><td>Termo Científica</td><td>NEON1SK</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de etilo</td><td>Suministros químicos</td><td>EA011-2.5L-P</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilendediaminático tetraacético (EDTA)</td><td>Termo Científica</td><td>118432500</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>12003C-500ML</td><td></td></tr><tr><td>TEV Proteasa&nbsp etiquetadas con His;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T4455</td><td></td></tr><tr><td>Hidroxibenzotriazol hidrato</td><td>Chem-Implex</td><td>24755</td><td></td></tr><tr><td>Imidazol</td><td>Termo Científica</td><td>288-32-4</td><td></td></tr><tr><td>Isopropil &beta;-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I6758</td><td></td></tr><tr><td>Caldo Luria-Bertani (LB), &nbsp;</td><td>Termo Científica</td><td>12795027</td><td></td></tr><tr><td>Búfer de lisis&nbsp;</td><td>Termo Científica</td><td>89822</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de mercurio (II)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>215465</td><td></td></tr><tr><td>Metanol (Graja HPLC)</td><td>VWR</td><td>A452-4K</td><td></td></tr><tr><td>Reactivo MTT</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M2128-100MG</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Diisopropiletilamina (DIPEA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>3440</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Dimetil formamida (DMF)</td><td>Suministros químicos</td><td>RP1051</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop</td><td>Termo Científica</td><td>ND-ONE</td><td></td></tr><tr><td>N-Boc-etilenodiamina</td><td>Bloqueos combi</td><td>AM-1613</td><td></td></tr><tr><td>Columna de resina de afinidad NTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>70666</td><td></td></tr><tr><td>Palladio sobre carbono</td><td>Sigma Aldrich</td><td>205699</td><td>10% en función de la policía</td></tr><tr><td>Kit de purificación de plásmidos</td><td>QIAGEN</td><td>27104</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de microtitulación de polipropileno &nbsp;</td><td>SARSTEDT&nbsp;</td><td>72.690.008</td><td></td></tr><tr><td>Gel de sílice para cromatografía de columna flash</td><td>Siliciclo</td><td>R12030B</td><td>Gel de sílice 60, malla 230-400 y nbsp;</td></tr><tr><td>Placa de cromatografía de capa fina en gel de sílice</td><td>Merk</td><td>1055540001</td><td>Grosor de capa de 0,2 mm sobre respaldo de aluminio con indicador fluorescente de 254 nm</td></tr><tr><td>Fosfato de sodio, 0,2M de soln tampón</td><td>Termo Científica</td><td>J63816. AP</td><td></td></tr><tr><td>Placa de microtitulación de polipropileno de fondo plano y 96 pozos con tapa</td><td>Corning</td><td>3599</td><td></td></tr><tr><td>Ligasa de ADN T4</td><td>New England Biolabs</td><td>M0202S</td><td></td></tr><tr><td>Trietilamina (Et3N)</td><td>Suministros químicos</td><td>TR02151000</td><td></td></tr><tr><td>Ácido trifluoroacético (TFA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T6508</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCL</td><td>Termo Científica</td><td>J62848. AK</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Termo Científica</td><td>A16046.AE</td><td></td></tr><tr><td>Azul de tripán</td><td>MP BIOMEDICALS AUSTRALIA PTY LTD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T4049-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Tripticase soya agar&nbsp;</td><td>Becton, Dickinson y Compañía</td><td>211043</td><td></td></tr><tr><td>Urea y nbsp;</td><td>Termo Científica</td><td>29700</td><td></td></tr><tr><td>Vector (promotor T7)</td><td>-</td><td></td><td>plásmido de número de copias alto elegido</td></tr></tbody></table>

producción y pruebas de péptidos antimicrobianos y sus imitadores

Production and Testing of Antimicrobial Peptides and Their Mimics

Producción y pruebas de péptidos antimicrobianos y sus imitadores

Antimicrobial peptides (AMPs) and their synthetic mimics are emerging as promising alternatives to conventional antibiotics, particularly in response to ...

production-and-testing-of-antimicrobial-peptides-and-their-mimics

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Amidas terciarias péptido (PTA) son una superfamilia de peptidomiméticos que incluyen pero no se limitan a péptidos, peptoides y péptidos N-metilado. Aquí se describe un método de síntesis que combina estrategias de sub-monómero división y piscina y para sintetizar un solo grano de la biblioteca de un compuesto de las PTA.

Síntesis Split-y-piscina y caracterización del péptido Terciario Amida Biblioteca

Se describe un método simple y general para la síntesis de péptidos cíclicos utilizando irradiación de microondas. Este procedimiento permite la síntesis de péptidos cíclicos de la columna vertebral con una colección de diferentes conformaciones, conservando las cadenas laterales y las fracciones farmacofóricas y, por lo tanto, permite detectar la conformación bioactiva.

Desarrollo de un Backbone cíclica Péptido Biblioteca como Potencial Antiparasitarios Terapéutica Utilizando Microondas irradiación

Aquí, presentamos protocolos para cribar y caracterizar rápidamente la actividad antimicrobiana de las enzimas. El ensayo de difusión de microportaobjetos y el ensayo de liberación de colorante utilizan sustratos bacterianos objetivo para la evaluación cualitativa y cuantitativa de la actividad enzimática.

Los ensayos cualitativos y cuantitativos para la detección y caracterización de proteínas de antimicrobianos

Se presenta un protocolo para sintetizar peptoides con funcionalidad catiónica mixta en la misma secuencia (monómeros de tipo lisina y arginina). También se describen los ensayos posteriores de estos compuestos contra Leishmania mexicana, los parásitos protozoarios causantes de la leishmaniasis cutánea.

Un método eficaz para la síntesis de peptoides con monómeros de tipo mixto lisina / arginina del tipo y la evaluación de su actividad anti-Leishmania

Un método microdilución en caldo fácil y adaptable para la detección de compuestos antifúngicos y extractos.

Microdilución en Vitro proyección de caldo: un método fácil y rápido para detectar nuevos compuestos antimicóticos

El protocolo presenta la Escherichia coli-basado presión selectiva incorporación de aminoácidos no-canónico (ncAAs) el lactococcal péptidos antimicrobianos nisina. Sus propiedades pueden cambiarse durante la expresión recombinante mediante sustitución con ncAAs deseado en medios de crecimiento definido. Cambios resultantes en la bioactividad se asignan por ensayos de inhibición de crecimiento y microscopía de fluorescencia.

Péptidos antimicrobianos producidos por presión selectiva incorporación de aminoácidos no-canónico

Aquí presentamos un protocolo para producir Gram-negativos Escherichia coli (e. coli) Esferoplastos y gram-positivas Bacillus megaterium (B. megaterium) protoplastos claramente visualizar y caracterizar rápidamente interacciones de péptido-bacterias. Esto proporciona un método sistemático para definir la localización de la membrana translocación de péptidos.

Producción y visualización de Esferoplastos bacterianos y protoplastos para caracterizar la localización de péptido antimicrobiano

La proteína de anticuerpo recombinante expresada en células pIRES2-ZSGreen1-rAbs-APN-CHO y anticuerpos monoclonales producidos utilizando la tecnología tradicional de hibridoma puede reconocer y unirse a la proteína N aminopeptidasa porcina (APN).

Producción de anticuerpos monoclonales dirigidos a la aminopeptidasa N en el epitelio de la mucosa intestinal porcina

Este protocolo describe un método para obtener datos cuantitativos sobre la actividad antifúngica de péptidos y otros compuestos, como agentes antifúngicos de moléculas pequeñas, contra Candida albicans. Su uso de la densidad óptica en lugar de contar las unidades formadoras de colonias para cuantificar la inhibición del crecimiento ahorra tiempo y recursos.

Cuantificación de la actividad antifúngica de péptidos contra Candida albicans

Se presentan los procedimientos para demostrar que los ligandos se unen a la membrana de la superficie de la celulosa para digerir estos protozoos en el intestino de las termitas subterráneas de Formosa utilizando microscopía de fluorescencia y los ligandos que, junto con los péptidos líticos matar...

Prueba de Actividad Protozoacidal de ligando-lítica péptidos intestinales contra termitas protozoos In vitro (Cultura protozoos) y In vivo (Microinyección en termitas intestino grueso)

Aprende a sintetizar y evaluar péptidos antimicrobianos como Mel4 y su imitador RK-758 mediante ensayos de CMI, CMB y citotoxicidad en células L-929. Este protocolo integra producción, pruebas biológicas y análisis de seguridad para el desarrollo de nuevos agentes antiinfecciosos.

Producción y pruebas de péptidos antimicrobianos y sus imitadores

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