Name: Aislamiento de células satélite del músculo esquelético para estudios in vitro de miogénesis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-24T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: Aprende a aislar células satélite de músculo esquelético de ratones adultos y neonatales mediante digestión enzimática, filtración secuencial y clasificación magnética. Este protocolo optimizado produce cultivos de mioblastos con más del 97% de pureza para estudios de miogénesis in vitro.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>0,25% tripsina-EDTA&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>100 & micro; Colador de células M&nbsp;</td><td>VWR</td><td>732-2759</td><td></td></tr><tr><td>30 y micro; colador m y nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>40 y micro; Colador de células M&nbsp;</td><td>VWR</td><td>732-2757</td><td></td></tr><tr><td>70 & micro; Colador de células M&nbsp;</td><td>VWR</td><td>130-095-823</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético y nbsp;</td><td>POCH</td><td>568760114</td><td>Disuelto en dH2O hasta una concentración final de 20 mM y esterilizado mediante un 0,2 y micro; Filtro m</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488, anti-conejo burro</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>A21206</td><td>Disuelto en solución bloqueante (véase la Sección 8.7) a una dilución de 1:250</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488, anti-ratón para cabras y nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab150113</td><td>Disuelto en solución bloqueante (véase la Sección 8.7) a una dilución de 1:250</td></tr><tr><td>Cloruro de amonio (NH4Cl)&nbsp;</td><td>BioShop</td><td>AMC303.500</td><td>Disuelve en agua hasta una concentración final de 50 mM</td></tr><tr><td>Medios de montaje antifade</td><td>Vectashield</td><td>H-2000-10</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-PAX7</td><td>Abcam</td><td>ab187339</td><td>Disuelto en solución bloqueante (véase la Sección 8.7) a una dilución 1:100</td></tr><tr><td>Factor básico de crecimiento de fibroblastos y nbsp;</td><td>Corning</td><td>354060</td><td>Disuelto en dH2O estéril a una concentración de stock de 10 y micro; g/mL&nbsp;</td></tr><tr><td>Betadine, 100 mg/mL</td><td>EGIS Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultivo celular, 6 pozos, Cell+</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3902.300</td><td></td></tr><tr><td>Extracto de embrión de pollo y nbsp;</td><td>MP Biomedicina</td><td>2850145</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno I, cola de rata</td><td>Gibco</td><td>A10483-01</td><td>Disuelto en 20 mM de ácido acético y en la sección de ácido acético;</td></tr><tr><td>Colagenasa tipo I</td><td>Sigma</td><td>C0130-500MG</td><td>Disuelto en DMEM y esterilizado mediante un 0,2 y micro; Filtro m</td></tr><tr><td>Tubo de disociación (GentleMACS C Tubes)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium, glucosa alta</td><td>Gibco</td><td>31966-021</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>AM9260G</td><td></td></tr><tr><td>Tubos centrífugas cónicos Falcon, 15 mL</td><td>Corning</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrifugadora cónicos Falcon, 50 mL</td><td>Corning</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Gibco</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>Suero para caballos&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>26050088</td><td></td></tr><tr><td>Reactivo de marcado magnético (Kit de aislamiento de celdas satélite)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-104-268</td><td></td></tr><tr><td>Separador magnético (Separador MidiMACS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel&nbsp;</td><td>Corning</td><td>CLS356234</td><td>Disuelto en DMEM hasta una concentración del 10 % &nbsp;</td></tr><tr><td>Paraformaldehído, 4% en PBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J61899. AK</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato &nbsp;</td><td>VWR</td><td>392-0334</td><td></td></tr><tr><td>Columna de separación (Columnas LS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo de Miosina del Músculo Esquelético, MHC</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-32732</td><td>Disuelto en solución bloqueante (véase la Sección 8.7) con una dilución de 1:50</td></tr><tr><td>Plato TC, 100 x 20 mm</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>Disociador de tejidos (Disociador GentleMACS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-1L</td><td></td></tr></tbody></table>

aislamiento de células satélite del músculo esquelético para estudios in vitro de miogénesis

Isolation of Skeletal Muscle Satellite Cells for In Vitro Myogenesis Studies

Aislamiento de células satélite del músculo esquelético para estudios in vitro de miogénesis

Skeletal muscle regeneration and growth depend on satellite cells, the muscle tissue&#39;s resident stem cells. Currently, these cells serve as ...

isolation-skeletal-muscle-satellite-cells-for-vitro-myogenesis

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

El micro-disección técnica de explantes es un método robusto y fiable para el aislamiento de proliferación células del músculo esquelético de los músculos menores, adultas o embrionarias como fuente de células madre de músculo esquelético. Excepcionalmente, estas células han sido derivadas por clonación para producir músculo esquelético líneas de células madre utilizadas en el trasplante de vivo.

Adultas y embrionarias del músculo esquelético Cultura Microexplant y aislamiento de células madre de músculo esquelético

Este video demuestra el aislamiento de células satélite de tejidos musculares branquiómeros de cabeza de rata a través de la disección de tejidos, la digestión enzimática y la posterior purificación mecánica y centrífuga. A continuación, las células se siembran en pocillos recubiertos de matriz extracelular para su diferenciación en mioblastos y, finalmente, en miotubos y fibras musculares maduras.

Una técnica para aislar células satélite del tejido muscular de la cabeza de rata

Aislamiento y cultivo de fibras musculares es el estándar de...

Aislamiento y cultivo de fibras individuales y sus células satélite del músculo esquelético adulto

El aislamiento y cultivo de una población pura de células satélite quiescentes, una población de células madre de músculo, es esencial para la comprensión de la biología de células madre del músculo y la regeneración, así como el trasplante de células madre para terapias en la distrofia muscular y otras enfermedades degenerativas.

Aislamiento, cultivo y trasplante de células musculares satélite

El cultivo in vitro sistemas han demostrado ser indispensables para nuestra comprensión de la miogénesis de vertebrados. Sin embargo, queda mucho por aprender sobre el desarrollo del músculo esquelético no mamífero y el crecimiento, en particular en los taxones basal. Un protocolo eficiente y robusto para el aislamiento de las células madre adultas de este tejido, las células precursoras miogénicas (PSM), y el mantenimiento de su auto-renovación, la proliferación y la diferenciación en un...

Preparación de Primaria Myogenic precursor de célula / cultivos de mioblastos de basales Vertebrados Linajes

Los principales tipos de células adherentes derivadas del músculo humano son las células miogénicas y los fibroblastos. Aquí, las poblaciones celulares se enriquecen mediante la clasificación de células activadas magnéticamente basadas en el antígeno CD56. El posterior inmunomarcaje con anticuerpos específicos y el uso de técnicas de análisis de imagen permiten cuantificar las características citoplasmáticas y nucleares de las células individuales.

Aislamiento y Caracterización cuantitativa inmunocitoquímica de células miogénicas Primarias y fibroblastos de músculo esquelético humano

Este protocolo describe el aislamiento de las células satélite de músculos de la cabeza branchiomeric de una rata 9 semanas de edad. Los músculos se originan a partir de diferentes arcos branquiales. Posteriormente, las células satélite son cultivadas en un recubrimiento de punto de tamaño de milímetro para estudiar su diferenciación. Este enfoque evita la expansión y pases de las células satélite.

Aislamiento y caracterización de las células satélite de Músculos Rata Head Branchiomeric

La identificación precisa de las células satélite es fundamental para el estudio de sus funciones bajo varias condiciones fisiológicas y patológicas. Este artículo presenta un protocolo para identificar las células satélite en secciones del músculo esquelético adulto por tinción de inmunofluorescencia.

Identificación de células satélite del músculo esquelético por inmunofluorescencia con anticuerpos de laminina y Pax7

Este protocolo ilustra 1) el aislamiento y cultivo de fibroblastos primarios del músculo gastrocnemio de ratón adulto, así como 2) la purificación y caracterización de exosomas utilizando un método de ultracentrifugación diferencial combinado con gradientes de densidad de sacarosa seguidos de análisis de Western blot.

Aislamiento y caracterización de exosomas de fibroblastos del músculo esquelético

Aquí, proponemos un método para obtener eficientemente fibras musculares individuales en etapas de desarrollo postnatal tempranas a partir del modelo de ratón lamin 8-11 mutante homocigoto, un modelo muy severo para la distrofia muscular de Emery-Dreifuss (EDMD).

Aislamiento de miofiber único y cultura de un modelo murino de distrofia muscular de Emery-Dreifuss en el desarrollo post-Natal temprano

El músculo esquelético comprende múltiples tipos de células, incluidas las células madre residentes, cada una con una contribución especial a la homeostasis y regeneración muscular. Aquí, se describe el cultivo 2D de células madre musculares y el nicho de células musculares en un entorno ex vivo que conserva muchas de las características fisiológicas, in vivo y ambientales.

Cultivo masivo no fraccionado de músculo esquelético de ratón para recapitular la quiescencia de nicho y de células madre

Aprende a aislar células satélite de músculo esquelético de ratones adultos y neonatales mediante digestión enzimática, filtración secuencial y clasificación magnética. Este protocolo optimizado produce cultivos de mioblastos con más del 97% de pureza para estudios de miogénesis in vitro.

Aislamiento de células satélite del músculo esquelético para estudios in vitro de miogénesis

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