Name: Mapeando la inmunidad infantil con entrada mínima: perfilado integrativo de células únicas y multiómico (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T12:35:00.000+00:00
Duration: 10 min 29 s
Description: Aprende a realizar perfilado inmunológico multidimensional en neonatos con volúmenes mínimos de sangre mediante citometría de flujo, proteómica y secuenciación de ARN de células únicas. Este protocolo permite estudios longitudinales del desarrollo inmunitario en recién nacidos prematuros.

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<ol><li>Kollmann, T. R., Kampmann, B., Mazmanian, S. K., Marchant, A., Levy, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protecting+the+newborn+and+young+infant+from+infectious+diseases%3A+lessons+from+immune+ontogeny%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Protecting the newborn and young infant from infectious diseases: lessons from immune ontogeny.</a> Immunity. 46 (3), 350-363 (2017).</li>
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<table><tbody><tr><td>0,5 M EDTA, pH 8,0</td><td>Thermo Fisher Scientific y nbsp;</td><td>15575-038&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>1x Búfer de Lisis de los glóbulos rojos&nbsp;</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>3177165&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kit de análisis de proteínas BCA y nbsp;</td><td>Abcam&nbsp;</td><td>ab287853&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Microtubo BD Microtainer MAP</td><td>Fisher Scientific & nbsp;</td><td>22-253-270</td><td></td></tr><tr><td>Bel-Art Cryo-Safe -1&deg; C Controlador de congelación &nbsp;</td><td>Millipore Sigma&nbsp;</td><td>41122800&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich & nbsp;</td><td>A9647-100G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Ultra Violet 496 Anti-Humano CD3&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific y nbsp;</td><td>364-0038-42&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Ultra Violet 661 anti-humano CD11c&nbsp;</td><td>BD BioCiencias &nbsp;</td><td>612968&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Vil750 Anti-Humano CD14&nbsp;</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>367135&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 570 Anti-Human CD8a&nbsp;</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>301038&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 711 Anti-Humano CD56&nbsp;</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>318336&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>cOmplete, Mini, cóctel inhibidor de proteasas libre de EDTA</td><td>Millipore Sigma&nbsp;</td><td>11836170001&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kit para retirar células muertas &nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-090-101&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil Sulfóxido (DMSO)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific y nbsp;</td><td>BP231-100&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Solución salina tamponada con fosfato (DPBS), sin calcio, sin magnesio y nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific y nbsp;</td><td>14190144&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS) y nbsp;</td><td>Gibco y nbsp;</td><td>A5256801&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Mezclador digital de vórtices Fisherbrand &nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific y nbsp;</td><td>02215418&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Buffer de Fijación &nbsp;</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>420801&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento GlutaMAX</td><td>Gibco y nbsp;</td><td>35050061&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-042-303&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Columnas de MS&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-042-201&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Nombre</td><td>Compañía</td><td>Número de catálogo</td><td></td></tr><tr><td>Separador OctoMACS&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-042-109&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Azul Pacífico Anti-Humano CD4 y nbsp;</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>344619&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina (10.000 U/mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific y nbsp;</td><td>15140-122&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RB780 Anti-Humano CD33&nbsp;</td><td>BD en Biociencias &nbsp;</td><td>755606&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Perforador de Metal Rierdge 3mm &nbsp;</td><td>Rierdge&nbsp;</td><td>SDD231031pc-01&NBSP;</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medio</td><td>Gibco y nbsp;</td><td>11875-093&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Spark UV 387 Anti-Humano CD19&nbsp;</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>302289&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kits de la colección Tasso</td><td>Tasso y nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Microtubos de tapa roscada Thermo Scientific</td><td>Thermo Fisher Scientific y nbsp;</td><td>14-755-287&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Whatman 309 Proteína</td><td>Cytiva&nbsp;</td><td>41111700&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Viabilidad Arreglable para Zombie NIR &nbsp;</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>423105&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Software y paquetes</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adobe Illustrator</td><td>2024</td><td></td><td></td></tr><tr><td>bbknn</td><td>1.5.1</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlowJo</td><td>10.8.1</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>9.4.0</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nombre</td><td>Versión</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scanpy</td><td>1.9.1</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Srublet</td><td>0.2.3</td><td></td><td></td></tr><tr><td><fuerte>ensayos comerciales</fuertes></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cromo Single Cell 5' Equipamiento</td><td>Genómica 10X</td><td>PN-1000263</td><td></td></tr><tr><td>Olink&nbsp; Panel inflamatorio de Revelar o Objetivo 96</td><td>Olink</td><td>https://olink.com/products/olink-target-96</td><td></td></tr></tbody></table>

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Este protocolo describe la forma de evaluar la expresión de una gran variedad de genes a nivel clonal. Una sola célula de RT-qPCR produce resultados altamente fiables con una fuerte sensibilidad para cientos de muestras y los genes.

Una sola célula de la expresión génica utilizando multiplex RT-qPCR para caracterizar heterogeneidad de las poblaciones linfoides Raras

Aquí describimos un enfoque proteómico unicelular para evaluar inmunológico fenotípico y funcional (inducción de citocinas intracelulares) alteraciones en las muestras de sangre periférica, analizadas mediante citometría de masas.

Análisis unicelular de Immunophenotype y producción de citoquinas en sangre periférica por citometría de masas

A granel gene expresión medidas nube célula individual diferencias en poblaciones celulares heterogéneas. Aquí, describimos un protocolo para análisis de expresión génica e índice cómo sola célula clasificación de Florescence activa célula clasificación (FACS) puede combinarse para delinear la heterogeneidad y immunophenotypically caracterizar poblaciones celulares molecularmente distintos.

Una combinatoria unicelular enfoque para caracterizar Molecular y heterogeneidad de Immunophenotypic de madre humana y de las poblaciones progenitoras

La inmunoprecipitación por multiplex (QMI) cuantitativa utiliza citometría de flujo para la detección sensible de diferencias en la abundancia de interacciones proteínas y proteínas dirigidas entre dos muestras. QMI se puede realizar utilizando una pequeña cantidad de biomaterial, no requiere etiquetas genéticamente diseñadas y se puede adaptar para cualquier red de interacción de proteínas previamente definida.

Cuantificación de la dinámica de la red de interacción de proteínas mediante coinmunoprecipitación multiplexada

El uso de un enfoque basado en ARN para determinar los perfiles inmunitarios cuantitativos de los tejidos tumorales sólidos y aprovechar las cohortes clínicas para el descubrimiento de biomarcadores de oncitología se describe a través de protocolos moleculares e informáticos.

Modelado inmune predictivo de tumores sólidos

Aquí, describimos una estrategia simple y accesible para visualizar, cuantificar y mapear células inmunitarias en secciones de tejido tumoral incrustado en parafina fija de formalina. Esta metodología combina las técnicas existentes de análisis de imágenes y digitales con el propósito de ampliar la capacidad de multiplexación y el análisis multiparámetro de ensayos de imágenes.

Visualización, cuantificación y mapeo de poblaciones de células inmunes en el microambiente tumoral

En la era de la inmunoterapia y el perfil genómico unicelular, la biología del cáncer requiere nuevas herramientas in vitro y computacionales para investigar la interfaz tumor-inmune en un contexto espaciotemporal adecuado. Describimos protocolos para explotar cocultivos microfluídicos inmunes al tumor en entornos 2D y 3D, compatibles con el monitoreo dinámico y multiparamétrico de las funciones celulares.

Modelos de cocultivo microfluídico para diseccionar la respuesta inmune en microambientes tumorales in vitro

Este protocolo combina la citometría de flujo y la secuenciación de ARN unicelular para aislar y caracterizar los estados de las células microgliales en el cerebelo de los cerebros de ratones postnatales tempranos. Utiliza la disociación enzimática, la centrifugación de Percoll y la inmunotinción para revelar la heterogeneidad de la microglía y mejorar la comprensión de sus funciones en el desarrollo y la enfermedad del cerebelo.

Citometría de flujo y análisis unicelular para caracterizar la activación de la microglía en el desarrollo temprano del cerebro de ratón posnatal

Una célula de la muerte de ensayo basado en la PTI en plantas de Nicotiana benthamiana se describe.

Ensayo para asociados a patógenos patrón molecular (PAMP)-Accionados Inmunidad (PTI) en las plantas

Selección de Plasmodium falciparum Los parásitos de cytoadhesion a las células cerebrales endoteliales humanas

Aprende a realizar perfilado inmunológico multidimensional en neonatos con volúmenes mínimos de sangre mediante citometría de flujo, proteómica y secuenciación de ARN de células únicas. Este protocolo permite estudios longitudinales del desarrollo inmunitario en recién nacidos prematuros.

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