Name: Mapeo de la morfología de las células estrelladas hepáticas en modelos murinos de fibrosis hepática (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: Aprende a visualizar células estrelladas hepáticas en tejido hepático intacto mediante marcaje fluorescente, aclarado tisular iDISCO y microscopía confocal. Este método permite la reconstrucción 3D de alta resolución para estudios de fibrosis hepática.

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<ol><li>Henderson, N. C., Rieder, F., Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis%3A+from+mechanisms+to+medicines%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Fibrosis: from mechanisms to medicines.</a> Nature. 587 (7835), 555-566 (2020).</li>
<li>Wang, S., Friedman, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Found+in+translation-Fibrosis+in+metabolic+dysfunction-associated+steatohepatitis+%28MASH%29%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Found in translation-Fibrosis in metabolic dysfunction-associated steatohepatitis (MASH).</a> Sci Transl Med. 15 (716), eadi0759(2023).</li>
<li>Amini-Salehi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease%3A+An+updated+review+meta-analysis+comprising+a+population+of+78+million+from+38+countries%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Med+Res%22%5BJournal%5D)">Global prevalence of nonalcoholic fatty liver disease: An updated review meta-analysis comprising a population of 78 million from 38 countries.</a> Arch Med Res. 55 (6), 103043(2024).</li>
<li>Ekstedt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+stage+is+the+strongest+predictor+for+disease-specific+mortality+in+NAFLD+after+up+to+33+years+of+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Fibrosis stage is the strongest predictor for disease-specific mortality in NAFLD after up to 33 years of follow-up.</a> Hepatology. 61 (5), 1547-1554 (2015).</li>
<li>Hagström, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+stage+but+not+NASH+predicts+mortality+and+time+to+development+of+severe+liver+disease+in+biopsy-proven+NAFLD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Fibrosis stage but not NASH predicts mortality and time to development of severe liver disease in biopsy-proven NAFLD.</a> J Hepatol. 67 (6), 1265-1273 (2017).</li>
<li>Geng, Y., Schwabe, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+stellate+cell+heterogeneity%3A+Functional+aspects+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Hepatic stellate cell heterogeneity: Functional aspects and therapeutic implications.</a> Hepatology. , (2025).</li>
<li>Trinh, V. Q. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+stellate+cells+maintain+liver+homeostasis+through+paracrine+neurotrophin-3+signaling+that+induces+hepatocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Signal%22%5BJournal%5D)">Hepatic stellate cells maintain liver homeostasis through paracrine neurotrophin-3 signaling that induces hepatocyte proliferation.</a> Sci Signal. 16 (787), eadf6696(2023).</li>
<li>Sugimoto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+stellate+cells+control+liver+zonation%2C+size+and+functions+via+R-spondin+3%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hepatic stellate cells control liver zonation, size and functions via R-spondin 3.</a> Nature. 640 (8059), 752-761 (2025).</li>
<li>Bataller, R., Brenner, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Liver fibrosis.</a> J Clin Invest. 115 (2), 209-218 (2005).</li>
<li>Gäbele, E., Brenner, D. A., Rippe, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+fibrosis%3A+Signals+leading+to+the+amplification+of+the+fibrogenic+hepatic+stellate+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci%22%5BJournal%5D)">Liver fibrosis: Signals leading to the amplification of the fibrogenic hepatic stellate cell.</a> Front Biosci. 8 (4), 69-77 (2003).</li>
<li>Marra, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+stellate+cells+and+the+regulation+of+liver+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Hepatic stellate cells and the regulation of liver inflammation.</a> J Hepatol. 31 (6), 1106-1119 (1999).</li>
<li>Milani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procollagen+expression+by+nonparenchymal+rat+liver+cells+in+experimental+biliary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Procollagen expression by nonparenchymal rat liver cells in experimental biliary fibrosis.</a> Gastroenterology. 98 (1), 175-184 (1990).</li>
<li>Sato, M., Suzuki, S., Senoo, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+stellate+cells%3A+Unique+characteristics+in+cell+biology+and+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Hepatic stellate cells: Unique characteristics in cell biology and phenotype.</a> Cell Struct Funct. 28 (2), 105-112 (2003).</li>
<li>Du, K., Jun, J. H., Dutta, R. K., Plasticity Diehl, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((heterogeneity%2C+and+multifunctionality+of+hepatic+stellate+cells+in+liver+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatol+Commun%22%5BJournal%5D)">heterogeneity, and multifunctionality of hepatic stellate cells in liver pathophysiology.</a> Hepatol Commun. 8 (5), e0411(2024).</li>
<li>Trivedi, P., Wang, S., Friedman, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+power+of+plasticity-Metabolic+regulation+of+hepatic+stellate+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">The power of plasticity-Metabolic regulation of hepatic stellate cells.</a> Cell Metab. 33 (2), 242-257 (2021).</li>
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<li>Renier, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((iDISCO%3A+A+simple%2C+rapid+method+to+immunolabel+large+tissue+samples+for+volume+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">iDISCO: A simple, rapid method to immunolabel large tissue samples for volume imaging.</a> Cell. 159 (4), 896-910 (2014).</li>
<li>Molbay, M., Kolabas, Z. I., Todorov, M. I., Ohn, T., Ertürk, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guidebook+for+DISCO+tissue+clearing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Syst+Biol%22%5BJournal%5D)">A guidebook for DISCO tissue clearing.</a> Mol Syst Biol. 17 (3), e9807(2021).</li>
<li>Scott, G. D., Blum, E. D., Fryer, A. D., Jacoby, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+optical+clearing%2C+three-dimensional+imaging%2C+and+computer+morphometry+in+whole+mouse+lungs+and+human+airways%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue optical clearing, three-dimensional imaging, and computer morphometry in whole mouse lungs and human airways.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 51 (1), 43-55 (2014).</li>
<li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nat Neurosci. 13 (1), 133-140 (2010).</li>
<li>Mederacke, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+tracing+reveals+hepatic+stellate+cells+as+dominant+contributors+to+liver+fibrosis+independent+of+its+aetiology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Fate tracing reveals hepatic stellate cells as dominant contributors to liver fibrosis independent of its aetiology.</a> Nat Commun. 4, 2823(2013).</li>
<li>Slater, T. F., Cheeseman, K. H., Ingold, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+tetrachloride+toxicity+as+a+model+for+studying+free-radical+mediated+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Carbon tetrachloride toxicity as a model for studying free-radical mediated liver injury.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 311 (1152), 633-645 (1985).</li>
<li>Kolesová, H., Olejníčková, V., Kvasilová, A., Gregorovičová, M., Sedmera, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+imaging+methods+for+cardiovascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and imaging methods for cardiovascular development.</a> iScience. 24 (4), 102387(2021).</li>
<li>Shrirao, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autofluorescence+of+blood+and+its+application+in+biomedical+and+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Autofluorescence of blood and its application in biomedical and clinical research.</a> Biotechnol Bioeng. 118 (12), 4550-4576 (2021).</li>
<li>Croce, A. C., Bottiroli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipids%3A+Evergreen+autofluorescent+biomarkers+for+the+liver+functional+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Histochem%22%5BJournal%5D)">Lipids: Evergreen autofluorescent biomarkers for the liver functional profiling.</a> Eur J Histochem. 61 (2), 2808(2017).</li>
<li>Jafree, D. J., Long, D. A., Scambler, P. J., Moulding, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+deep+imaging+of+the+kidney+using+confocal+and+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and deep imaging of the kidney using confocal and two-photon microscopy.</a> Methods Mol Biol. , 103-126 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Anticuerpo RFP, conejo, preadsorbido</td><td>Rockland</td><td>600-401-379</td><td></td></tr><tr><td>Antena inferior de vidrio de 4 cámaras de 35 mm con micropozo de 20 mm, vidrio cubierto #1.5</td><td>Cellvis</td><td>D35C4201.5N</td><td></td></tr><tr><td>Inyección de AnaSed (inyección de xilazina)</td><td>Akorn, Inc.</td><td>NDC 593990110-20</td><td>20 mg/mL</td></tr><tr><td>Tubos cónicos de centrifugadora: 50 ml y nbsp;</td><td>Halcón</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Hisopos de algodón</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td></td></tr><tr><td>Bloqueo curvo &nbsp; Hemostats</td><td>Fisher Scientific</td><td>16-100-117</td><td></td></tr><tr><td>AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG conjugado con Cy3 (H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>712-165-153</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de operación delicadas de 4,75" curvas afiladas/romas</td><td>Instrumento Quirúrgico Roboz</td><td> 728501</td><td></td></tr><tr><td>Éter dibenzílico (DBE), 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>108014</td><td></td></tr><tr><td>Diclorometano (DCM), &nbsp; &ge; 99.8%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>270997</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO), &ge; 99.9%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario adsorbido cruzado de Bunkey anti Rabbit IgG (H+L), Alexa Fluor 647</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A31573</td><td></td></tr><tr><td>Suero de burro</td><td>EMD Millipore</td><td>S30</td><td></td></tr><tr><td>Etil-cinnamato, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>112372</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras Microdiseccionadoras Extra Finas; Hoja de 24 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9232515</td><td></td></tr><tr><td>Rata de anticuerpos monoclonales F4/80</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-4801-82</td><td></td></tr><tr><td>Fiyi</td><td>NIH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinzas</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9214139</td><td></td></tr><tr><td>Glicina</td><td>Bio-Rad</td><td>1610718</td><td></td></tr><tr><td>Heparina Sal Sódica</td><td>Chem-Impex</td><td>29984</td><td></td></tr><tr><td>Horno de hibridación de hibaides</td><td>Triad Scientific</td><td>Maxi 14</td><td></td></tr><tr><td>Peróxido de hidrógeno, 30 %</td><td>Sigma Aldrich</td><td>31642</td><td></td></tr><tr><td>Software Imaris 10.2.0</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software ImarisFileConverter 10.2.0</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImarisViewer 11.0.0</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Catéter IV</td><td>Exel International Inc.</td><td>EXE 26751</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina, inyección de cloruro</td><td>Dechra</td><td>B8U4</td><td>100 mg/mL</td></tr><tr><td>Software LAS X 4.4.0.24861</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio Confocal Leica Stellaris 8</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metanol, grado HPLC</td><td>Fisher</td><td>A452-2</td><td></td></tr><tr><td>Rotador multiusos</td><td>Industrias Científicas, Inc.</td><td>Modelo 151</td><td></td></tr><tr><td>Agujas (27G x 1/2'')</td><td>BD</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Paraformadehilo, polvo, 95%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>Bomba peristáltica</td><td>Gilson</td><td>Modelo Minipuls 3</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de bomba peristáltica, MasterFlex</td><td>Termo Científica</td><td>96400-16</td><td>Tubo de bomba de silicona curado con peróxido de 3,1 mm diámetro diámetro diametral x 7,6 m L/S, tamaño L/s 16, espiga de manguera de 1/8 pulgada</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Cytiva</td><td>SH30256.01</td><td>Estéril, pH 7,0 - 7,2, sin calcio, magnesio</td></tr><tr><td>Propidium yoduro, &ge; 94,0% (HPLC)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4170</td><td></td></tr><tr><td>Cuchillas de afeitar</td><td>American Line</td><td>66-0362</td><td></td></tr><tr><td>Plataforma de mecedor</td><td>VWR</td><td>Modelo 200</td><td></td></tr><tr><td>Azida de sodio, &ge; 99.5%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Sutura</td><td>Ethicon</td><td>J109T</td><td></td></tr><tr><td>Jeringuilla (1 mL)</td><td>BD</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>TritonX-100</td><td>Sigma</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>Preadolescente-20</td><td>Termo Científica</td><td>J20605-AP</td><td></td></tr><tr><td>Viales, tapa de rosca con tapa sólida y revestimiento de aluminio, preensamblados</td><td>Sigma Aldrich</td><td>27470-U</td><td>volumen 7 mL, vial de vidrio ámbar, O.D. y tiempos; H 17 mm y tiempos; 60 mm, rosca para 15-425</td></tr></tbody></table>

mapeo de la morfología de las células estrelladas hepáticas en modelos murinos de fibrosis hepática

Mapping Hepatic Stellate Cell Morphology in Mouse Models of Liver Fibrosis

Mapeo de la morfología de las células estrelladas hepáticas en modelos murinos de fibrosis hepática

Tissue-resident fibroblasts are the cellular drivers of fibrosis across tissues. Within the liver, hepatic stellate cells (HSCs), the resident pericytes ...

mapping-hepatic-stellate-cell-morphology-mouse-models-liver

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Investigación

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Biología

Aquí se describe un método para el aislamiento de las células estrelladas hepáticas del hígado de ratón. Para la purificación de células estrelladas, hígados de los ratones se...

Siete pasos para células estrelladas

La interrupción del flujo biliar da lugar a una lesión hepática colestásica inflamatoria grave con una secuencia característica de alteraciones morfológicas dependientes del tiempo. En este trabajo presentamos un protocolo para la ligadura quirúrgica de la colédoca en ratones que permite inducir una fuerte respuesta fibrótica a los 21 a 28 días.

Ligadura del conducto biliar en los ratones: Inducción de la injuria hepática inflamatoria y fibrosis por colestasis obstructiva

La fibrosis sostenida con depósito excesivo de proteínas de la matriz extracelular conduce a la cirrosis. El abuso del alcohol es una de las principales causas de enfermedad hepática grave. Establecimos un modelo de hígado fibrótico de pez cebra inducido por etanol para estudiar los mecanismos y estrategias de promoción de la regeneración de hepatocitos tras la lesión inducida por el alcohol.

Desarrollo de un Modelo de hígado fibrótico inducida por etanol en el pez cebra para el Estudio de células progenitoras mediada por la regeneración de hepatocitos

Este protocolo proporciona un método simple y confiable para la producción de rodajas de hígado de piedra de precisión viables de ratones. Las muestras de tejido ex vivo se pueden mantener bajo condiciones de cultivo de tejido de laboratorio durante varios días, proporcionando un modelo flexible para examinar la patobiología hepática.

Rebanadas de hígado cortadas con precisión de la murino como modelo Ex Vivo de biología hepática

Este protocolo presenta un modelo biomimético 3D con compartimento estromal fibromático que lo acompaña. Preparado con hidrogeles fisiológicamente relevantes en proporciones que imitan las propiedades biofísicas de la matriz extracelular estromal, un mediador activo de interacciones celulares, crecimiento tumoral y metástasis.

Un modelo biomimético para el cáncer de hígado para estudiar las interacciones tumorales-estroma en un entorno 3D con propiedades biofísicos ajustables

El presente protocolo optimiza los métodos de perfusión/descelularización in situ hepática y microscopía de dos fotones para establecer una plataforma confiable para visualizar la dinámica de la remodelación de la matriz extracelular (MEC) durante la esteatohepatitis no alcohólica (EHNA).

Imágenes 3D de la matriz extracelular hepática en un modelo de ratón de esteatohepatitis no alcohólica

Los hepatocitos cargados de lípidos son inherentes a la regeneración hepática, pero generalmente se pierden con la centrifugación por gradiente de densidad. Aquí, presentamos un protocolo de aislamiento celular optimizado que retiene hepatocitos esteatósicos, produciendo poblaciones representativas de hepatocitos regeneradores después de la hepatectomía parcial en ratones.

Aislamiento de hepatocitos regeneradores después de hepatectomía parcial en ratones

Establecimos un modelo de ratón de fibrosis hepática crónica, que proporciona un modelo animal adecuado para el estudio mecanicista de fibrosis hepática inducida por virus de la atresia biliar (BA) y una plataforma para futuros tratamientos de BA.

Un modelo de ratón de fibrosis hepática crónica para el estudio de la atresia biliar

El objetivo de este estudio fue desarrollar un nuevo modelo digital tridimensional para el diagnóstico precoz de la fibrosis hepática, que incluya la rigidez de cada vóxel en el hígado del paciente y, por lo tanto, pueda utilizarse para calcular la relación de distribución del hígado del paciente en diferentes etapas de fibrosis.

Un modelo digital tridimensional para el diagnóstico precoz de la fibrosis hepática basado en la elastografía por resonancia magnética

El modelo murino de hepatectomía parcial 2/3 (66%) está bien descrito en la literatura, pero rara vez se han utilizado hepatectomías más extendidas que imitan el síndrome de tamaño pequeño después del trasplante hepático. Describimos un procedimiento de hepatectomía extendida del 78% en un modelo de ratón que resulta en aproximadamente un 50% de letalidad postoperatoria en ratones sanos.

Hepatectomía extendida al 78% en un modelo quirúrgico de ratón

Modelo murino de enfermedad hepática esteatótica asociada a disfunción metabólica (MASLD) con disfunción metabólica, cambios en la expresión génica hepática y alteraciones histopatológicas hepáticas que se asemejan a la MASLD humana, incluida la fibrosis que progresa a la fase 3 de fibrosis avanzada. Este modelo se puede utilizar en estudios de fisiopatología de MASLD y en estudios preclínicos de nuevas terapias.

Modelo murino de enfermedad hepática esteatótica asociada a disfunción metabólica con fibrosis

Aprende a visualizar células estrelladas hepáticas en tejido hepático intacto mediante marcaje fluorescente, aclarado tisular iDISCO y microscopía confocal. Este método permite la reconstrucción 3D de alta resolución para estudios de fibrosis hepática.

Mapeo de la morfología de las células estrelladas hepáticas en modelos murinos de fibrosis hepática

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