Name: Protocolo para la Disociación de Células Individuales, Secuenciación de ARN y Aislamiento de Células Mioepiteliales y Fibroblastos de las Glándulas Lagrimales y Salivales Envejecidas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-24T13:25:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Aprende un protocolo optimizado para disociar células individuales de glándulas lagrimales envejecidas de ratón. Este método permite secuenciación de ARN y citometría de flujo con alta viabilidad celular.

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</ol>

<table><tbody><tr><td><fuerte>Material</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4919</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 (1&nbsp; Solución M)</td><td>BioVision</td><td>B1010-100</td><td></td></tr><tr><td>Colagenasa IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>Kit para retirar células muertas</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Kit para retirar células muertas</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Dispasa II</td><td>Roche</td><td>C756V28</td><td></td></tr><tr><td>DNasa I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25-100MG</td><td></td></tr><tr><td>DPBS&nbsp;</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Suero bovino fetal, IgG ultra-bajo</td><td>Gibco</td><td># 16250078</td><td></td></tr><tr><td>La solución salina equilibrada de Hank (HBSS)</td><td>Corning (Thermo Fisher Scientific)</td><td>21-022-CV</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1&nbsp; Solución M)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>Solución de isoflurano</td><td>Covertus</td><td># 11695067772</td><td></td></tr><tr><td>MACS&reg; SmartStrainers (30 y micro; m)</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-098-458</td><td></td></tr><tr><td>MACS&reg; SmartStrainers (70 y micro; m)</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-110-916</td><td></td></tr><tr><td>Media/F12 (DMEM/F12)</td><td>Millipore</td><td>DF-042-B</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 1M</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1028-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Columnas MS</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (acción de 5M)</td><td>Invitrogen y comercio;</td><td>AM9759</td><td></td></tr><tr><td>Tabletas de solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8920-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Solución para la lisis de glóbulos rojos (10 veces)</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-094-183</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Accutase&nbsp;</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>A1110501</td><td></td></tr><tr><td>Solución azul de tripán, 0,4%</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>EDTA ultrapuro (0,5M, pH 8,0)</td><td>Invitrogen</td><td>15575020</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Anticuerpos</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD140a (PDGFRA) Anticuerpo monoclonal (APA5), APC-eFluor & trade; 780, Rat / IgG2a, kappa</td><td>eBiociencia</td><td>47-1401-82; RRID:AB_2784706</td><td></td></tr><tr><td>FcBlock (bloqueador de Fc CD16/CD32)</td><td>BD en Biociencias &nbsp;</td><td>553141; RRID:AB_394656</td><td></td></tr><tr><td>FxCycle & trade; Mancha de violeta</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>F10347</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo monoclonal de rata CD326 (EpCAM)-APC (G8.8), IgG2a de rata, kappa</td><td>eBiociencia</td><td>17-579182; RRID:AB_2716944</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>ratones</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acta2GFP&nbsp; </td><td>Un generoso regalo del Dr. Ivo Kalajzic</td><td>PMID: 18571490</td><td></td></tr><tr><td>PdgfraEGFP&nbsp; - B6.129S4-Pdgfratm11(EGFP)Sor/J</td><td>El laboratorio Jackson</td><td>RRID:IMSR_JAX:007669</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Equipo</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Invitrogen y comercio; &nbsp; Condesa y comercio; 3 Contador Automático de Celdas</td><td>Fisher Scientific</td><td>A49862; RRID:SCR_026963</td><td></td></tr></tbody></table>

protocolo para la disociación de células individuales, secuenciación de arn y aislamiento de células mioepiteliales y fibroblastos de las glándulas lagrimales y salivales envejecidas

Protocol for Single-Cell Dissociation, RNA Sequencing, and Isolation of Myoepithelial Cells and Fibroblasts from the Aged Lacrimal and Salivary Glands

Protocolo para la Disociación de Células Individuales, Secuenciación de ARN y Aislamiento de Células Mioepiteliales y Fibroblastos de las Glándulas Lagrimales y Salivales Envejecidas

Aging of the lacrimal gland (LG) is associated with reduced tear secretion and chronic inflammation, contributing to dry eye disease. Age-related LG ...

protocol-for-single-cell-dissociation-rna-sequencing-isolation

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Las neuronas sensoriales específicas de órganos son difíciles de identificar. El trazado rápido de azul se utiliza para identificar las neuronas nodosas que inervan las vías respiratorias para la clasificación de células. Las neuronas nodosas clasificadas se utilizan para extraer ácido ribonucleico (ARN) de alta calidad para la secuenciación. Utilizando este protocolo, se determina la expresión génica de neuronas específicas de la vía aérea.

Un método para detectar y aislar las vías aéreas que inervan las neuronas sensoriales en ratones

El objetivo de este protocolo es obtener muestras de RNA de alta integridad de ganglios entéricos aislados del tejido intestinal humano no fijado, recién resecado usando el microdissection de la captura de láser (LCM). Este protocolo implica preparación de flash-congeladas muestras de tejido intestinal humano, cryosectioning, coloración etanólico y deshidratación, LCM y la extracción de RNA.

Optimización del Microdissection de la captura de láser para el aislamiento de los ganglios entéricos de tejido humano fresco congelado

La glándula lagrimal (LG) tiene dos tipos de células que expresan α-actina muscular lisa (αSMA): células mioepiteliales (MECs) y pericytes. Los MECs son de origen ectodérmico, se encuentran en muchos tejidos glandulares, mientras que los pericitos son células musculares lisas vasculares de origen endodérmico. Este protocolo aísla los MECs y los pericitos de los LGS murinos.

El aislamiento de las células mioepiteliales de la murina lagrimal adulta y las glándulas submandibulares

Presentamos un método para aislar y cultivar células epiteliales derivadas de glándulas salivales humanas primarias. Estas células exhiben patrones de expresión génica consistentes con que son de origen epitelial salival y pueden ser cultivadas como salisferas en matrices de membranas de sótano derivadas de células tumorales Engelbreth-Holm-Swarm o como monocapas en platos de cultivo tratados.

Aislamiento de células epiteliales salivales de glándulas salivales humanas para el crecimiento in vitro como salisferas o monocapas

Este protocolo describe la microdisección de captura láser para el aislamiento del cartílago y el hueso de las secciones congeladas frescas del embrión del ratón. El cartílago y el hueso se pueden visualizar rápidamente mediante la tinción violeta de cresíl y se recogen con precisión para producir ARN de alta calidad para el análisis transcriptómico.

Microdisección de captura láser de cartílago embrionario de ratón y hueso para análisis de expresión génica

La obtención de una población pura de fibroblastos es crucial para estudiar su papel en la reparación de heridas y fibrosis. Aquí se describe un método detallado para aislar fibroblastos y miofibroblastos de corazones de ratón no lesionados y lesionados seguidos de la caracterización de su pureza y funcionalidad por inmunofluorescencia, RTPCR, clasificación celular asistida por fluorescencia, y contracción del gel de colágeno.

Aislamiento y caracterización de fibroblastos cardíacos adultos y miofibroblastos

El protocolo actual presenta un método rápido, eficiente y suave para aislar células individuales adecuadas para el análisis de ARN-seq de una sola célula a partir de un incisivo de ratón en crecimiento continuo, molar de ratón y dientes humanos.

Aislamiento rápido de células individuales de dientes de ratón y humanos

Se presenta un método para la microdisección del oviducto de ratón que permite la recolección de los segmentos individuales mientras se mantiene la integridad del ARN. Además, se describe el procedimiento de disociación de células oviductales no enzimáticas. Los métodos son apropiados para el posterior análisis de genes y proteínas de los segmentos oviductales funcionalmente diferentes y las células oviductales disociadas.

Microdisección y disociación del oviducto murino: identificación de segmentos individuales y aislamiento unicelular

Este artículo proporciona un protocolo simplificado para la disección y disociación del epitelio olfativo murino con el fin de secuenciar el ARN de un solo núcleo.

Disección y disociación rápidas del epitelio olfativo de ratón para suspensiones de un solo núcleo

Este protocolo detalla la separación del epitelio del cristalino ocular del ratón y la masa a granel de las células de fibra, seguida del aislamiento de ARN y el análisis de qPCR. Este método permite separar los compartimentos de las células del cristalino para un análisis más detallado del transcriptoma y los procesos biológicos en las células epiteliales frente a las células de fibra diferenciadas.

Aislamiento de ARN del epitelio del cristalino ocular de ratón y masas masivas de células de fibra

Aprende un protocolo optimizado para disociar células individuales de glándulas lagrimales envejecidas de ratón. Este método permite secuenciación de ARN y citometría de flujo con alta viabilidad celular.

Protocolo para la Disociación de Células Individuales, Secuenciación de ARN y Aislamiento de Células Mioepiteliales y Fibroblastos de las Glándulas Lagrimales y Salivales Envejecidas (Video) | JoVE Journal

Protocolo para la Disociación de Células Individuales, Secuenciación de ARN y Aislamiento de Células Mioepiteliales y Fibroblastos de las Glándulas Lagrimales y Salivales Envejecidas

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