Name: Preparación optimizada de tejido pulmonar completo con tumores de murino para citometría de flujo y secuenciación de ARN unicelular (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-22T13:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Aprende a preparar tejido pulmonar murino con tumores para citometría de flujo y secuenciación de ARN unicelular. Este protocolo optimizado logra viabilidad celular superior al 85% en modelos KrasG12D.

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<ol><li>Leiter, A., Veluswamy, R. R., Wisnivesky, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+burden+of+lung+cancer%3A+current+status+and+future+trends%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">The global burden of lung cancer: current status and future trends.</a> Nat Rev Clin Oncol. 20 (9), 624-639 (2023).</li>
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<li>Mittal, D., Gubin, M. M., Schreiber, R. D., Smyth, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+cancer+immunoediting%3A+Elimination%2C+equilibrium+and+escape%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">New insights into cancer immunoediting: Elimination, equilibrium and escape.</a> Curr Opin Immunol. 27, 16-25 (2014).</li>
<li>Papalexi, E., Satija, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+sequencing+to+explore+immune+cell+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA sequencing to explore immune cell heterogeneity.</a> Nat Rev Immunol. 18 (1), 35-45 (2018).</li>
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<li>van den Brink, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+sequencing+reveals+dissociation-induced+gene+expression+in+tissue+subpopulations%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Single-cell sequencing reveals dissociation-induced gene expression in tissue subpopulations.</a> Nat Methods. 14 (10), 935-936 (2017).</li>
<li>Denisenko, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+assessment+of+tissue+dissociation+and+storage+biases+in+single-cell+and+single-nucleus+RNA-seq+workflows%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Systematic assessment of tissue dissociation and storage biases in single-cell and single-nucleus RNA-seq workflows.</a> Genome Biol. 21 (1), 130(2020).</li>
<li>Zhao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cellular+and+spatial+atlas+of+TP53-associated+tissue+remodeling+defines+a+multicellular+tumor+ecosystem+in+lung+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cancer%22%5BJournal%5D)">A cellular and spatial atlas of TP53-associated tissue remodeling defines a multicellular tumor ecosystem in lung adenocarcinoma.</a> Nat Cancer. 6 (11), 1857-1879 (2025).</li>
<li>Marjanovic, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+a+high-plasticity+cell+state+during+lung+cancer+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Emergence of a high-plasticity cell state during lung cancer evolution.</a> Cancer Cell. 38 (2), 229-246.e13 (2020).</li>
<li>Xie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PLVAP+mediates+regulation+of+the+tumour+microenvironment+in+early-stage+lung+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">PLVAP mediates regulation of the tumour microenvironment in early-stage lung adenocarcinoma.</a> Clin Transl Med. 15 (12), e70532(2025).</li>
<li>Fernandes, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-cell+atlas+of+normal+and+KRASG12D-malformed+lymphatic+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">A single-cell atlas of normal and KRASG12D-malformed lymphatic vessels.</a> JCI Insight. 10 (5), e185181(2025).</li>
<li>Pirrello, A., Killingsworth, M., Spring, K., Rasko, J. E. J., Yeo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+macrophage-like+cells+as+a+prognostic+biomarker+in+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Liquid+Biopsy%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated macrophage-like cells as a prognostic biomarker in solid tumors.</a> J Liquid Biopsy. 6, 100275(2024).</li>
<li>Rudnick, J. A., Debnath, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+host+stromal+fibroblasts+supports+tumor+desmoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy in host stromal fibroblasts supports tumor desmoplasia.</a> Autophagy. 17 (12), 4497-4498 (2021).</li>
<li>Nissen, N. I., Karsdal, M., Willumsen, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagens+and+cancer-associated+fibroblasts+in+reactive+stroma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Collagens and cancer-associated fibroblasts in reactive stroma.</a> J Exp Clin Cancer Res. 38 (1), 115(2019).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcardiac+perfusion+of+the+mouse+for+brain+tissue+dissection+and+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Transcardiac perfusion of the mouse for brain tissue dissection and fixation.</a> Bio Protoc. 11 (5), e3988(2021).</li>
<li>Morton, J., Snider, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+collection+and+processing+of+lungs+from+aged+mice+for+histological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Pathobiol+Aging+Age+Relat+Dis%22%5BJournal%5D)">Guidelines for collection and processing of lungs from aged mice for histological studies.</a> Pathobiol Aging Age Relat Dis. 7 (1), 1313676(2017).</li>
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<li>Wu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+profiling+of+tumor+heterogeneity+and+microenvironment+in+advanced+NSCLC%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Single-cell profiling of tumor heterogeneity and microenvironment in advanced NSCLC.</a> Nat Commun. 12 (1), 2540(2021).</li>
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<li>Seltzer, J. L., Welgus, H. G., Jeffrey, J. J., Eisen, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Ca2%E2%81%BA+in+mammalian+collagenase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Role of Ca2⁺ in mammalian collagenase activity.</a> Arch Biochem Biophys. 173 (1), 355-361 (1976).</li>
<li>Shao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+expansion+of+type+II+alveolar+epithelial+cells+promotes+airway+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Pharmacological expansion of type II alveolar epithelial cells promotes airway repair.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 121 (16), e2400077121(2024).</li>
<li>Chen, Q., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+mouse+alveolar+type+II+cells%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of mouse alveolar type II cells.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100241(2021).</li>
<li>Arceneaux, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+contamination-focused+approach+for+optimizing+single-cell+RNA-seq+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">A contamination-focused approach for optimizing single-cell RNA-seq experiments.</a> iScience. 26 (7), 107242(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>DMEM/F12</td><td>Thermo Fisher</td><td>11320033</td><td>Cultivo celular</td></tr><tr><td>Colagenasa Tipo IV</td><td>Sigma Aldich</td><td>C5138</td><td>Enzimas digestivas</td></tr><tr><td>Dispasa II</td><td>Sigma Aldich</td><td>D4693</td><td>Enzimas digestivas</td></tr><tr><td>DNasa I</td><td>Roche</td><td>11284931001</td><td>Eliminar ADN</td></tr><tr><td>Colador Falcon 70 Cell</td><td>Halcón</td><td>352350</td><td>Eliminar tejido no digerido</td></tr><tr><td>Tijeras estérils</td><td>FST</td><td>14088-10</td><td>Tejidos cortados</td></tr><tr><td>Amortiguador de lisis de glóbulos rojos</td><td>Sigma Aldich</td><td>R7757</td><td>Eliminar las células sanguíneas</td></tr><tr><td>FBS inactivado por calor</td><td>Phoenix Scientific</td><td>PS100</td><td>Proteger las células</td></tr><tr><td>PBS libre de Ca+/Mg+</td><td>Thermo Fisher</td><td>10010023</td><td>Enzimas disolutas/Células de lavado</td></tr><tr><td>Aguja 21G de seguridad multifly y nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>3051524</td><td>Perfusión corporal total</td></tr><tr><td>50 mL jeringuillas&nbsp;</td><td>BD</td><td>300866</td><td>Perfusión corporal total</td></tr><tr><td>Plato de 6 cm</td><td>Corning</td><td>430116</td><td>Tejidos digestivos</td></tr><tr><td>Plato de 10 cm</td><td>Corning</td><td>430167</td><td>Tejidos digestivos</td></tr><tr><td>Anticuerpo de bloqueo Fc</td><td>BD</td><td>553141; RRID:AB_394655</td><td>Citometría de flujo</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>BD</td><td>564907; RRID:AB_2869624</td><td>Citometría de flujo</td></tr><tr><td>CD326</td><td>BD</td><td>563478; RRID:AB_2738234</td><td>Citometría de flujo</td></tr><tr><td>HIVmPGKCre VSVG</td><td>UI Viral Vectore Core</td><td>VVC-U de Iowa-7556</td><td>Lentiviro</td></tr><tr><td>Citómetro de flujo ZE5 (Yeti)</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td>Análisis de citometría de flujo</td></tr><tr><td>Ratón KrasLSL-G12D/+</td><td>Laboratorio Jackson</td><td>008179; RRID:IMSR_JAX:008179</td><td></td></tr><tr><td>Ratón reportero de TdTomato</td><td>Laboratorio Jackson</td><td>007909; RRID:IMSR_JAX:007909&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

preparación optimizada de tejido pulmonar completo con tumores de murino para citometría de flujo y secuenciación de arn unicelular

Optimized Preparation of Whole Murine Tumor-Bearing Lung Tissue for Flow Cytometry and Single-Cell RNA-Sequencing

Preparación optimizada de tejido pulmonar completo con tumores de murino para citometría de flujo y secuenciación de ARN unicelular

NSCLC accounts for approximately 85% of lung cancers, and Kirsten rat sarcoma (KRAS) is the most commonly mutated gene in NSCLC. Although management of ...

optimized-preparation-whole-murine-tumor-bearing-lung-tissue-for-flow

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Investigación

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Biology

Biología

El nuevo protocolo reportados en el presente estudio permite la detección selectiva de metástasis pulmonares en la celda de resolución única en ratones por...

Visualización mejorada de metástasis pulmonares en la Resolución sola célula en ratones por Combinada<em&gt; In-situ</em&gt; La perfusión del tejido pulmonar y X-Gal tinción de<em&gt; LacZ</em&gt;-Etiquetados células tumorales

Se describe el aislamiento rápido de células primarias de murino de tipo II alveolares epiteliales (AECII) por citometría de flujo negativo de selección. Estos AECII mostrar una alta viabilidad y pureza, y son adecuados para una amplia gama de estudios funcionales y molecular respecto a su función en condiciones respiratorias tales como enfermedades autoinmunes o infecciosas.

Citometría de flujo El aislamiento de células primarias murino tipo II alveolares epiteliales de Estudios funcionales y moleculares

Este video describe la preparación de la suspensión de células pulmonares de ratón para el análisis de citometría de flujo para estudiar la expresión de PD-L1 de las células de adenocarcinoma de pulmón.

Preparación del pulmón de ratón para la citometría de flujo: generación de suspensión celular a partir de tejido pulmonar para el análisis de citometría de flujo

Los cultivos organotípicos de explantes de tejido primario, que incluyen cortes de precisión, representan la arquitectura tridimensional (3-D) del tejido, así como las interacciones multicelulares del tejido nativo. Este video describe el cultivo de cortes de tejido derivado de tumores de pulmón murinos utilizando una unidad de incubación rotativa, un sistema que permite la exposición intermitente de los tejidos al oxígeno y los nutrientes. El protocolo describe la metodología para generar y...

Cultivo de explantes de tejido tumoral de pulmón: un procedimiento para generar y cultivar cortes de tumores de pulmón cortados con precisión

Este protocolo describe los pasos necesarios para realizar la validación ex vivo de experimentos de imágenes de xenoinjertos de fluorescencia de infrarrojo cercano in vivo en ratones utilizando nanocuerpos marcados con fluoróforos y anticuerpos convencionales.

Validación de nanocuerpo y basados ​​en anticuerpos<em&gt; En Vivo</em&gt; Experimentos tumor de xenoinjerto NIRF-de formación de imágenes en ratones utilizando<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Citometría de flujo y microscopía

El procedimiento experimental en el immunophenotyping de homoinjertos PDAC Murino ortotópico pretende perfilar el inmuno-microambiente tumoral. Los tumores son orthotopically implantado mediante cirugía. Tumores de 200 – 600 mm3 en tamaño fueron cosechados y disociados para preparar suspensiones de unicelular, seguidos del análisis de marcador múltiple inmunológico FACS utilizando diferentes anticuerpos marcados con fluorescencia.

Immunophenotyping de Orthotopic la homoplastia (Syngeneic) de Adenocarcinoma Ductal pancreática KPC primaria murinas por citometría de flujo

En este estudio, presentamos un protocolo eficaz y reproducible para aislar las poblaciones inmunes del sistema respiratorio murino. También proporcionamos un método para la identificación de todas las células inmunes innatas y adaptativas que residen en los pulmones de ratones sanos, utilizando un panel de citometría de flujo basado en 9 colores.

Análisis citométrico de flujo para la identificación de las células inmunes innatas y adaptativas del pulmón murino

Hemos desarrollado una técnica de procesamiento tisular que utiliza un vibratomo y tejido pulmonar incluido en agarosa para generar secciones pulmonares, lo que permite la adquisición de imágenes de alta resolución de la arquitectura pulmonar. Empleamos la tinción de inmunofluorescencia para observar la expresión espacial de proteínas utilizando marcadores estructurales pulmonares específicos.

Seccionamiento automatizado de vibratomo de tejido pulmonar incluido en agarosa para obtener imágenes de fluorescencia multiplex

Este protocolo describe el procedimiento para disociar rápidamente muestras de tumores humanos y de ratón para la secuenciación de ARN de una sola célula.

Disociación de muestras de tejido tumoral humano y de ratón para la secuenciación de ARN de una sola célula

Describimos protocolos para la preparación de suspensión unicelular de células epiteliales tímicas de ratón y la tinción de moléculas intracelulares para el análisis de citometría de flujo.

Preparación de suspensión unicelular de células epiteliales tímicas de ratón y tinción de moléculas intracelulares para análisis citométrico de flujo

Aprende a preparar tejido pulmonar murino con tumores para citometría de flujo y secuenciación de ARN unicelular. Este protocolo optimizado logra viabilidad celular superior al 85% en modelos KrasG12D.

Preparación optimizada de tejido pulmonar completo con tumores de murino para citometría de flujo y secuenciación de ARN unicelular (Video) | JoVE Journal

Preparación optimizada de tejido pulmonar completo con tumores de murino para citometría de flujo y secuenciación de ARN unicelular

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