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</ol>

<table><tbody><tr><td>3% H2O2</td><td>Caelo</td><td>15301730</td><td></td></tr><tr><td>50 ml conical tube</td><td>Greiner Bio-One</td><td></td><td>Tubo cónico tipo Falcon</td></tr><tr><td>Plato de agar Petri</td><td>Hecho a mano</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Unidad de anestesia</td><td>BioMedical Instruments</td><td>Univentor 1200</td><td></td></tr><tr><td>BioCam DupleX</td><td>3Brain</td><td>BioCAM DupleX</td><td>Plataforma CMOS-HD-MEA</td></tr><tr><td>Cuchilla (5*)</td><td>Apollo Herkenrath</td><td>09-025-056</td><td></td></tr><tr><td>Brainwave Software 5</td><td>3Brain</td><td>Versión 5</td><td>Plataforma CMOS-HD-MEA</td></tr><tr><td>Máscara de respiración</td><td>Narishige</td><td>GM-4</td><td></td></tr><tr><td>Flowable Bulk Fill: Compula Refill</td><td>Dentsply Sirona</td><td>267-0195</td><td>Para cemento</td></tr><tr><td>Pistola dispensadora de cápsulas</td><td>Dentsply Sirona</td><td>296-0003</td><td>Para cemento</td></tr><tr><td>Carbogen</td><td>Air Liquide</td><td>Air Liqiuide (sistema de casa)</td><td></td></tr><tr><td>Cavity Block Glass</td><td>AIM</td><td>AIM</td><td>40 mm x 40 mm</td></tr><tr><td>Pinza (3*)</td><td>DIEFFENBACH</td><td>12-1003-04</td><td>acero inoxidable 4cm</td></tr><tr><td>Computadora</td><td>Dell</td><td>Precission 3431</td><td></td></tr><tr><td>CorePlateTM 1W 38/60</td><td>3Brain</td><td>Accura HD-MEA</td><td>Chip CMOS-HD-MEA</td></tr><tr><td>Accesorio de taladro (13)</td><td>FST</td><td>19007-07</td><td>Punta: 7mm</td></tr><tr><td>Accesorio de taladro (13)</td><td>FST</td><td>19007-09</td><td>Punta: 9mm</td></tr><tr><td>Eco wipes - despachador de toallitas</td><td>Dr Schumacher</td><td>00-915SE001 (1x1)</td><td></td></tr><tr><td>Eco wipes - rollos de toallitas</td><td>Dr Schumacher</td><td>00-915SE001 (6x1)</td><td></td></tr><tr><td>ELASTOSIL</td><td>Wacker</td><td>RT 601 A/B</td><td></td></tr><tr><td>Electrodo</td><td>Microprobes</td><td>SNEX-100</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td><td>Art-Nr. T913.3</td><td></td></tr><tr><td>Excavador (10)</td><td>HLW Dental-Instruments Germany</td><td>S-10.28-6</td><td></td></tr><tr><td>Pinza (5)</td><td>FST</td><td>18025-10</td><td>Acero inoxidable 10cm</td></tr><tr><td>Pinza (6)</td><td>Aesculap</td><td>BD311R</td><td>9cm</td></tr><tr><td>Pinza (7)</td><td>FST</td><td>91100-12</td><td>Acero inoxidable 12cm</td></tr><tr><td>Pinza (8)</td><td>FST</td><td>11231-20</td><td>Acero inoxidable 11cm</td></tr><tr><td>Pinza (8*)</td><td>Karl Hammacher</td><td>9.160 160</td><td>Wironit 10,5cm</td></tr><tr><td>Pinza (9)</td><td>FST</td><td>11200-33</td><td>Dumoxel 13,5cm</td></tr><tr><td>Pinza (9)</td><td>FST</td><td>11200-33</td><td>Dumoxel 13,5cm</td></tr><tr><td>Mesa quirúrgica con calefacción+gas de escape integrado</td><td>BioMedical Instruments</td><td>BioMedical Instruments</td><td></td></tr><tr><td>heliobond</td><td>Ivoclar Vivadent</td><td>42040</td><td></td></tr><tr><td>Máquina de hielo</td><td>Scotsman</td><td>AF 80 AS / WS</td><td></td></tr><tr><td>Agujas de entrada y salida</td><td>BD Microlance</td><td>1,25 x70mm</td><td></td></tr><tr><td>Isathal 10mg/g</td><td>Dechra</td><td>Zul.-Nr. 400216.00.00</td><td>Fucidin</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Sedana medical</td><td>N001254</td><td></td></tr><tr><td>Filtro de agua Mili-Q</td><td>Elga</td><td>PURELAB flex 3</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas (4)</td><td>FST</td><td>12501-13</td><td>Carburo de tungsteno 13cm</td></tr><tr><td>Octenisept</td><td>Sch&uuml;lke &amp; Mayr</td><td></td><td>Solución antiséptica</td></tr><tr><td>Filtro de papel (4*)</td><td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td><td>AP75.1</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HS234526C</td><td></td></tr><tr><td>Ancla de platino</td><td>3Brain</td><td>3Brain</td><td></td></tr><tr><td>Punta retractora (14)</td><td>FST</td><td>18200-10</td><td>2.5mm</td></tr><tr><td>Electrodo reutilizado (11)</td><td>Microprobes</td><td>SNEX-100</td><td>Para coordenadas</td></tr><tr><td>Ringer</td><td>B. Braun</td><td>3570030</td><td></td></tr><tr><td>Tijera (1)</td><td>FST</td><td>14078-10</td><td>Acero inoxidable 10cm</td></tr><tr><td>Tijera (2)</td><td>Aesculap</td><td>BC144R</td><td></td></tr><tr><td>Tijera (3)</td><td>FST</td><td>14058-09</td><td>Acero inoxidable 9cm</td></tr><tr><td>Tijera (9*)</td><td>FST</td><td>91401-12</td><td>Acero inoxidable 12cm</td></tr><tr><td>Tornillo (12)</td><td>Online-Schrauben.de</td><td>DIN 84 A2 M 1x2</td><td></td></tr><tr><td>Afeitadora</td><td>Exacta</td><td>GT415</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de estimulación STELLA (plataforma modular implantable definida por software)</td><td>No comercial; desarrollo de la Universidad de Rostock</td><td>open source (https://github.com/SFB-ELAINE/STELLA)</td><td>Estimulador DBS impulsado por batería</td></tr><tr><td>Esterilizador 250</td><td>FST</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>Estereotaxic</td><td>Narishige</td><td>Modelo SR-AR</td><td></td></tr><tr><td>Super glue</td><td>UHU</td><td>64212</td><td></td></tr><tr><td>Crema para las lágrimas (Crema nasal de pantenol)</td><td>Jenapharm</td><td>5541249</td><td></td></tr><tr><td>Vibratomo</td><td>Laica</td><td>VT12005</td><td></td></tr><tr><td>Xylocain Gel 2%</td><td>Aspen Pharma</td><td>1138060</td><td></td></tr><tr><td>Barco de pesaje</td><td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td><td>HYT9.1</td><td></td></tr><tr><td>Balanza</td><td>Voltcraft</td><td>TS-5000/1</td><td></td></tr><tr><td>Compuestos utilizados para la preparación de soluciones</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de calcio (CaCl2)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10043-52-4</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucosa(C6H12O6)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>50-99-7</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de magnesio (MgCl2)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>7786-30-3</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de potasio(KCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>7447-40-7</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato de sodio (NaHCO3)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>144-55-8</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de sodio (NaCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr>

investigación de los mecanismos a nivel de red de la estimulación palidal profunda del cerebro utilizando matrices de microelectrodos de alta densidad

Investigating The Network-Wide Mechanisms of Pallidal Deep Brain Stimulation Using High-Density Microelectrode Arrays

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Dystonia is a neurological movement disorder characterized by abnormal muscle control affecting voluntary movements and sustained postures. Although ...

Investigamos cómo la estimulación cerebral profunda del globo pálido altera la actividad en red del cerebelo, y de esta manera restaura la función neuronal en la distonía. Las matrices de microelectrodos de alta densidad permiten la grabación simultánea de circuitos del bucle motor para investigar los efectos a nivel de red de la estimulación cerebral profunda en trastornos del movimiento como la distonía. Para comenzar, aloje la electrónica del Sistema de Estimulación STELLA en una cápsula personalizada impresa en 3D de tereftalato de polietileno glicol o PETG.Utilice silicona para sellar el área entre la tapa y la cápsula, así como la carcasa en la salida del cable. Después del secado, inspeccione la silicona en busca de espacios visibles y repita el sellado si existen huecos. Tras la completa solidificación de la silicona, prepare la resina epoxi en una proporción de mezcla de 100:35 en peso.Utilice el Vevor RS-1.5 para eliminar las burbujas de aire de la resina bajo vacío. Antes del ensamblaje, aplique una capa fina de vaselina en la superficie de acoplamiento del molde de silicona personalizado. Coloque la cápsula del estimulador en el molde.Llene lentamente con resina epoxi hasta que el estimulador y las uniones del cable estén completamente cubiertos, evitando burbujas de aire durante el llenado. Después del curado de la resina, retire la cápsula del molde. Utilice una lima fina o una herramienta de pulido para alisar la superficie de la epoxi y eliminar los bordes afilados.Sumerja la cápsula en silicona líquida para aplicar un recubrimiento final delgado de silicona. Utilice una pipeta de plástico para aplicar silicona adicional alrededor del cable cerca de la zona de unión. Use un palillo para eliminar el exceso de silicona antes del curado para evitar un espesor excesivo del recubrimiento.Para realizar una prueba de funcionalidad posterior al encapsulado antes del implante quirúrgico o del uso experimental, coloque el Sistema de Estimulación STELLA en solución de Ringer y active la función magnética integrada de autoprueba. Confirme el patrón correcto de parpadeo del diodo emisor de luz o LED de 2 por 2, lo que indica una salida de estimulación adecuada, y descarte cortocircuitos, circuitos abiertos o condiciones de batería baja. Después de la prueba, apague el dispositivo para conservar la batería.Prepare el lugar de trabajo con herramientas de disección, solución de sacarosa, placas de Petri y el equipo de vibrátomo. Añada solución de sacarosa fría con hielo a una placa de Petri que contenga papel filtro en el fondo y mantenga una carbogenación continua para la extracción y sección del cerebro. Transfiera el cerebro extraído dentro de los 15 minutos posteriores al período de 11 días de estimulación cerebral profunda o DBS al recipiente de Petri preparado que contiene la solución de sacarosa fría con hielo.Use una cuchilla para extraer el cerebelo realizando un corte coronal a través del puente. Luego, retire el hemisferio cerebeloso mediante un corte parasagital. Prepare la placa del vibrátomo con una gota de pegamento superfuerte.Retire cuidadosamente el cerebelo del recipiente de Petri. Pase el plano de la sección parasagital sobre papel de filtro para secarlo antes de pegar este lado. Coloque la placa del vibrátomo en la bandeja.Llene la bandeja con suficiente solución de sacarosa a medio congelar para sumergir completamente el cerebelo. Sature la bandeja con carbógeno. Corte secciones parasagitales del cerebelo con un grosor de 200 micrómetros a una velocidad constante de 0,08 milímetros por segundo.Guarde las secciones en fluido cerebroespinal artificial o ACSF en un vaso de precipitados que se burbujee constantemente con carbógeno a temperatura ambiente. Permita que las secciones se recuperen en ACSF carbonatado a temperatura ambiente durante aproximadamente 40 minutos antes de transferirlas a la matriz de microelectrodos de alta densidad o HD-MEA para el recalentamiento y la estabilización antes de la grabación. Limpie las almohadillas plateadas en oro con etanol al 100 % y la matriz de electrodos con etanol al 70 % y un cepillo suave.Luego, enjuague el matriz de electrodos con agua Milli-Q. Antes de colocar el corte de tejido, inserte la placa individual CorePlate en el sistema de registro. Conecte la MEA de alta densidad con la placa individual CorePlate TM al sistema de registro.Pipetee aproximadamente 2 mililitros de ACSF en el pocillo sin burbujas de aire. Inicie la adquisición en tiempo real en el software BrainWave 5 o BW5 y configure los parámetros como el Modo Cockpit y el Modelo de Tejido. Verifique que el ruido de fondo se encuentre dentro del rango óptimo de 9-20 microvoltios.Registre durante al menos 30 segundos. Después de detener la grabación, abra el archivo guardado para su análisis. Para analizar la interfaz de ruido, haga clic en Resultados y seleccione Reproducción.Haga clic en Exportación de medios y, en el menú desplegable de Rastros brutos, seleccione Mapa de actividad para analizar la amplitud pico a pico y la desviación estándar con el fin de determinar el ruido de fondo. A continuación, utilice una pipeta de Pasteur para colocar la sección de tejido en el centro del pocillo individual de la CorePlate bajo un microscopio y elimine el ACSF. Coloque el anclaje encima de la sección para fijarla.Utilice una pipeta Pasteur de 3 mililitros para aplicar y eliminar una sola gota de ACSF y lavar así la sección, repitiendo el procedimiento de 5 a 10 veces. Utilice una mecha de papel enrollada para eliminar el ACSF residual. Aplique gotas de ACSF al centro del pocillo para mejorar el contacto entre la sección y los electrodos y obtener una grabación óptima.Coloque la línea de entrada por encima del corte y la línea de salida alejada de este. Elimine cualquier burbuja del electrodo de tierra antes de continuar con la adquisición y el análisis de datos. El análisis del número total de potenciales de acción en las capas molecular de las células de Purkinje y granular del cortex cerebeloso mostró que los cortes de tejido distónico generaron significativamente menos potenciales de acción, mientras que la EEB del pálido aumentó el número de potenciales de acción a niveles comparables a los de los controles sanos.La prueba H de Kruskal-Wallis confirmó además un aumento estadísticamente significativo en el número de picos en la capa molecular de la corteza cerebelosa para el grupo de DBS distónico en comparación con los grupos distónicos no tratados y distónicos simulados. El grupo de DBS distónico también mostró un aumento en los picos en la capa de células de Purkinje y en la capa de células granulares, alcanzando valores comparables a los del grupo control. Mantener una grabación estable con HD-MEA durante todas las mediciones, con una conexión a tierra adecuada, buen contacto del electrodo y condiciones experimentales de bajo ruido, es fundamental.Este protocolo permite la medición de alta resolución de la actividad de la red cerebelosa y los efectos de su modulación mediante la estimulación cerebral profunda.

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