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</ol>

<table><tbody><tr><td>(3-Aminopropyl)triethoxysilane (APTES)</td><td>919-30-2</td><td>-</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>1.7 mL microcentrifuge tubes</td><td>-</td><td>LMCT1.7B</td><td>FroggaBio</td></tr><tr><td>12-well tissue culture-treated plates</td><td>-</td><td>83.3921</td><td>Sarstedt</td></tr><tr><td>15 mL centrifuge tubes (for orange chamber)</td><td>-</td><td>CLS430790</td><td>Corning</td></tr><tr><td>2-Hydroxy-4&prime;-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenone (Irgacure)</td><td>106797-53-9</td><td>-</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>2% Bisacrylamide solution</td><td>110-26-9</td><td>-</td><td>Bio-Rad</td></tr><tr><td>3-(3-Dimethylaminopropyl)-1-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC)</td><td>25952-53-8</td><td>-</td><td>Chem Impex International</td></tr><tr><td>4&prime;,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride</td><td>28718-90-3</td><td>-</td><td>Sigma</td></tr><tr><td>4&prime;,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI)</td><td>-</td><td>D1306</td><td>Invitrogen</td></tr><tr><td>40% Acrylamide solution</td><td>01/06/1979</td><td>-</td><td>Bio-Rad</td></tr><tr><td>50% Glutaraldehyde</td><td>111-30-8</td><td>-</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>6 cm tissue culture-treated dishes</td><td>-</td><td>83.3901</td><td>Sarstedt</td></tr><tr><td>A549 cells</td><td>-</td><td>CCL-185</td><td>ATCC</td></tr><tr><td>Acrylic acid N-hydroxysuccinimide ester</td><td>38862-24-7</td><td>-</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit antibody</td><td>-</td><td>A11008</td><td>Invitrogen</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 NHS ester (tris(triethylammonium salt))</td><td>-</td><td>A37572</td><td>Invitrogen</td></tr><tr><td>Ammonium persulfate</td><td>7727-54-0</td><td>-</td><td>Bio-Rad</td></tr><tr><td>Clear impact-resistant polycarbonate film (0.005 in.; spacer)</td><td>-</td><td>85585K72</td><td>McMaster-Carr</td></tr><tr><td>CY 52-276 silicone gel, Components A and B</td><td>2624028</td><td>-</td><td>Dow</td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>-</td><td>11995-065</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Ethanol, anhydrous</td><td>64-17-5</td><td>-</td><td>Greenfield Canada</td></tr><tr><td>Fast SYBR Green Master Mix</td><td>-</td><td>4385612</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>-</td><td>A52567-01</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>-</td><td>356008</td><td>Corning</td></tr><tr><td>Formaldehyde (16%)</td><td>-</td><td>28908</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>7365-45-9</td><td>-</td><td>BioShop</td></tr><tr><td>High-temperature silicone rubber sheet (0.020 in.; gasket)</td><td>-</td><td>86435K452</td><td>McMaster-Carr</td></tr><tr><td>Hydrochloric acid</td><td>7647-01-0</td><td>-</td><td>BioShop</td></tr><tr><td>Large hollow hole punch tool set</td><td>-</td><td>66000</td><td>Mayhew Pro</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>-</td><td>356234</td><td>Corning</td></tr><tr><td>Media storage borosilicate glass bottle, 250 mL</td><td>-</td><td>CLS1395250</td><td>Corning</td></tr><tr><td>Media storage borosilicate glass bottle, 500 mL</td><td>-</td><td>CLS1395500</td><td>Corning</td></tr><tr><td>MicroAmp Fast Optical 96-well reaction plate</td><td>-</td><td>4346906</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Microscope slide coverslips, 18 mm diameter</td><td>-</td><td>72222-01</td><td>Electron Microscopy Sciences</td></tr><tr><td>Microscope slide coverslips, 50 mm diameter</td><td>-</td><td>1.84E+16</td><td>eBay</td></tr><tr><td>PBS (1&times;)</td><td>-</td><td>14190144</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>PBS (10&times;)</td><td>-</td><td>70011044</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Phalloidin</td><td>17466-45-4</td><td>-</td><td>Biotium</td></tr><tr><td>Phospho-FAK (Tyr397) antibody</td><td>-</td><td>85567</td><td>Cell Signaling Technology</td></tr><tr><td>Phospho-MLC (Ser19) antibody</td><td>-</td><td>3671</td><td>Cell Signaling Technology</td></tr><tr><td>Plasma cleaner</td><td>-</td><td>PDC-32G</td><td>Harrick Plasma</td></tr><tr><td>qPCR primers (forward and reverse)</td><td>-</td><td>N/A</td><td>Integrated DNA Technologies</td></tr><tr><td>qScript cDNA Synthesis Kit</td><td>-</td><td>95047</td><td>QuantaBio</td></tr><tr><td>Rain-X</td><td>-</td><td>-</td><td>Rain-X</td></tr><tr><td>Screw-cap tubes, conical base, 15 mL</td><td>-</td><td>62.554.101</td><td>Sarstedt</td></tr><tr><td>Screw-cap tubes, conical base, 50 mL</td><td>-</td><td>62.547.205</td><td>Sarstedt</td></tr><tr><td>Serological pipette, 10 mL</td><td>-</td><td>170356N</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Serological pipette, 25 mL</td><td>-</td><td>170357N</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Serological pipette, 5 mL</td><td>-</td><td>170355N</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Serological pipette, 50 mL</td><td>-</td><td>170358N</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Sodium hydroxide</td><td>1310-73-2</td><td>-</td><td>BioShop</td></tr><tr><td>SYPRO Ruby protein gel stain</td><td>-</td><td>S12000</td><td>Invitrogen</td></tr><tr><td>TEMED</td><td>110-18-9</td><td>-</td><td>Bio-Rad</td></tr><tr><td>TRIzol reagent</td><td>-</td><td>15596026</td><td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>UV chamber</td><td>-</td><td>165-5031</td><td>Bio-Rad</td></tr></tbody></table>

generación de sustratos de matriz extracelular de poliacrilamida y silicona con rigidez definida para aplicaciones en biología celular

Generation of Polyacrylamide and Silicone Extracellular Matrix Substrates with Defined Stiffness for Cell Biology Applications

Generación de sustratos de matriz extracelular de poliacrilamida y silicona con rigidez definida para aplicaciones en biología celular

The extracellular matrix (ECM) is a critical regulator of cell behavior, with ECM stiffness serving as a key mechanical cue that governs cellular ...

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

El efecto de la rigidez del sustrato en la función celular puede ser...

El estudio de los efectos de la matriz de rigidez en la función celular usando como base la acrilamida-hidrogeles

Presentamos un nuevo hidrogel de poliacrilamida, llamado hidroxi-Paam, que permite una unión directa de las proteínas ECM con costo o experiencia mínima. La combinación de hidroxi-Paam hidrogeles con impresión por microcontacto facilita el control independiente de muchas señales del microambiente celular natural para el estudio de mechanostransduction celular.

Preparación de hidroxi-Paam hidrogeles para desacoplar los efectos de mecanotransducción Cues

Nuestro laboratorio ha desarrollado hidrogeles de poliacrilamida de ADN-reticulada, un sistema dinámico de hidrogel, para entender mejor los efectos de la modulación de la rigidez del tejido en función de la célula. Aquí, ofrecemos esquemas, descripciones y protocolos para preparar estos hidrogeles.

Preparación de ADN-poliacrilamida reticulada hidrogeles

Aquí, se describe un método que permite la preparación rápida, eficiente y económica de geles de poliacrilamida en un formato de placa multipocillo. El método no requiere ningún equipo especializado y podría ser fácilmente adoptado por cualquier laboratorio de investigación. Sería particularmente útil en investigaciones centradas en la comprensión de las respuestas celulares dependientes de la rigidez.

Multiwell Rigidez Ensayo para el Estudio de las respuestas de las células Rigidez dependientes simple basado poliacrilamida-

Se presenta un protocolo para preparar polivinilos hidrogeles de ácido itacónico-co-alcohol con rigidez variable, que han sido injertadas con y sin oligopéptidos, para investigar el efecto de la rigidez de los biomateriales en la diferenciación y proliferación de células madre. La rigidez de los hidrogeles fue controlada por el tiempo de reticulación.

Cultura de células madre humanas pluripotentes en polivinilos hidrogeles ácidos itacónico-Co-Alcohol con rigidez variable en condiciones libres de Xeno

Hemos desarrollado un ensayo de base poliacrilamida formato multi-bien para sondear el efecto de la rigidez de la matriz extracelular en la infección bacteriana de las células adherentes. Este análisis es compatible con citometría de flujo, inmunotinción y microscopía de fuerza de tracción, lo que permite mediciones cuantitativas de las interacciones biomecánicas entre las células y su matriz extracelular, las bacterias patógenas.

Un ensayo de base poliacrilamida formato multi-bien para estudiar el efecto de la rigidez de la matriz extracelular en la infección bacteriana de las células adherentes

Se presenta un protocolo para el proceso de fabricación de estructuras de compuestos poliméricos de película delgada que poseen diferentes jóvenes moduli o espesores. Las películas se fabrican para estudios del cultivo celular avanzada o como adhesivos de la piel.

Delgada película compuesto silicio elastómeros para aplicaciones de piel y cultivo celular: fabricación y caracterización

Sustratos con rigidez en la gama de kilopascal son útiles para estudiar la respuesta de las células a rigidez de microambiente fisiológicamente relevante. Con sólo un microscopio de fluorescencia de campo amplio, módulo de Young de geles de silicona blanda puede ser determinado mediante una muesca con un ámbito adecuado.

Medición de la rigidez de sustratos de silicona blanda mecanobiología estudios utilizando un microscopio de fluorescencia de campo amplio

Esta metodología tiene como objetivo ilustrar los mecanismos por los cuales las señales de matriz extracelular tales como rigidez del sustrato, composición de proteínas y morfología celular regulan el fenotipo de células Schwann (SC).

Preparación de microambientes de matriz extracelular sintonizable para evaluar la especificación del fenotipo celular Schwann

BioMEMS y Biología Celular: Perspectivas y Aplicaciones

University of Calgary.  Aunque la rigidez de la matriz extracelular (MEC) es un regulador clave del comportamiento celular, los mecanismos subyacentes de detección y transducción siguen siendo poco claros. Para abordar esto, proporcionamos protocolos para crear sustratos a base de poliacrilamida y silicona con rigidez ajustable para avanzar en nuestra comprensión de la diafonía célula-ECM.

Generación de sustratos de matriz extracelular de poliacrilamida y silicona con rigidez definida para aplicaciones en biología celular

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