Name: Aislamiento y cultivo de células endoteliales microvasculares del cerebro de ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-07-17T12:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 11 s
Description: Aprenda a aislar y cultivar células endoteliales microvasculares cerebrales de ratón neonato. Este protocolo reproducible genera modelos in vitro de la barrera hematoencefálica para estudiar su fisiología y disfunción.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>60 mm culture plates</td><td>Corning</td><td>430166</td><td></td></tr><tr><td>96 Well culture plates</td><td>Corning</td><td>41122107</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>Antibiótico-antimicótico (opcional)</td><td>Gibco</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD31</td><td>Santa Cruz&nbsp;</td><td>sc-46694</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Anti-GFAP</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-0300</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-GLUT1</td><td>Abcam</td><td>ab115730</td><td>1:200</td></tr><tr><td>Anti-Iba1</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-32725</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-mouse IgG Alexa Fluor (594 Dye)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11005</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-rabbit IgG Alexa Fluor&nbsp; (488 Dye)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11008</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Pipetas automáticas y serológicas</td><td>&nbsp;Oxford LP&nbsp;</td><td>&nbsp;OXL.OXL.OSP-5C</td><td></td></tr><tr><td>Medio basal (para solución de colágeno)</td><td>Gibco (DMEM)</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>Collagenasa tipo II</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6885</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>62248</td><td>1 &micro;g/mL</td></tr><tr><td>DMEM (alta glucosa)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Medio Completo EndoGRO-MV</td><td>Merck Millipore</td><td>SCME004</td><td>Medio de crecimiento de células endoteliales</td></tr><tr><td>Tubos Falcon (15 &amp; 50 mL)</td><td>Corning&reg;</td><td>352096 / 352070</td><td></td></tr><tr><td>Suero Fetal Bovino (FBS)</td><td>Gibco (Thermo Fisher)</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de fluorescencia</td><td>Motic</td><td>BA410</td><td></td></tr><tr><td>Guantes, mascarillas, consumibles de laboratorio</td><td>Varios proveedores</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>Heparina (100 U/mL)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3393</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio invertido</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>CKX41</td><td></td></tr><tr><td>Imán de separación magnética</td><td>EasySep&nbsp;</td><td>&nbsp;NC9284020</td><td></td></tr><tr><td>Agitador orbital (37 &deg;C)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>SK-0180-S</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>PBS (1&times;)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga refrigerada</td><td>HITACHI</td><td>CT5RE</td><td></td></tr><tr><td>Escálpel</td><td>Fine Science Tools</td><td>Varios</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras y pinzas finas</td><td>Fine Science Tools</td><td>Varios</td><td></td></tr><tr><td>Membrana de nitrocelulosa estéril</td><td>BIO-RAD</td><td>1620094</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno tipo I</td><td>Corning&nbsp;</td><td>30394</td><td></td></tr></tbody></table>

aislamiento y cultivo de células endoteliales microvasculares del cerebro de ratón

Isolation and Culture of Mouse Brain Microvascular Endothelial Cells

Aislamiento y cultivo de células endoteliales microvasculares del cerebro de ratón

Brain microvascular endothelial cells (BMECs) are the main cellular component of the blood-brain barrier (BBB) and play a key role in regulating molecular ...

Nuestro estudio examina cómo se pueden aislar y cultivar células endoteliales cerebrales para investigar la función neurovascular en condiciones de salud y enfermedad. El protocolo puede utilizarse para estudiar el endotelio cerebral fetal en trastornos neurodesarrolladores y relacionados con el embarazo.Para comenzar, obtenga cinco crías de cinco días posnatales. Después de sacrificar a las crías, recolecte sus cerebros bajo una cabina de seguridad biológica de flujo laminar y colóquelos en un tubo cónico de 50 mililitros que contenga PBS frío y estéril. Pase cuidadosamente cada cerebro sobre una membrana de nitrocelulosa esterilizada para separar las meninges. Transfiera los cerebros a una placa de 100 milímetros que contenga PBS frío. Utilizando un escalpelo estéril, elimine el bulbo raquídeo, el cerebelo, el tálamo y el bulbo olfatorio. Inmediatamente después de recolectar las cortezas cerebrales libres de meninges, transfiéralas a un tubo cónico de 50 mililitros que contenga 5 mililitros de PBS sobre hielo. Con tijeras estériles, disocie mecánicamente el tejido. Usando una pipeta de 1 mililitro, pipetee el tejido hasta obtener una suspensión homogénea sin fragmentos visibles.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Aquí se describe un protocolo para el aislamiento y cultivo de las células endoteliales murinas pulmonar. Este método consiste en la disociación mecánica y enzimática del tejido pulmonar, así como un proceso de purificación de 2 pasos con anti-PECAM-1 y anti-ICAM-2 anticuerpos conjugados a perlas magnéticas, lo que produce una población pura de células endoteliales microvasculares su mayoría de origen.

Aislamiento y cultivo de células endoteliales pulmonares de ratones recién nacidos

Este método se describe cómo aislar e inmortalizar las células endoteliales microvasculares de cerebro de ratón. Se describe un protocolo paso a paso a partir de la homogeneización del tejido cerebral, las fases de digestión, la siembra y la inmortalización de las células. Por lo general, toma alrededor de cinco semanas para obtener una homogénea línea inmortalizada de células endoteliales microvasculares.

Generación de una línea murina Inmortalizado microvascular cerebral célula endotelial como<em&gt; In Vitro</em&gt; Barrera hematoencefálica modelo

Este video presenta el aislamiento de microvasos del cerebro de una rata utilizando una combinación de centrifugación en gradiente de densidad y mehods de digestión enzimática. Los microvasos aislados se pueden cultivar en un matraz de cultivo prerrecubierto con matriz de colágeno y fibronectina para obtener colonias de células endoteliales.

Cultivo de células endoteliales a partir de microvasos cerebrales de rata: un procedimiento para aislar y cultivar células endoteliales a partir de microvasos de cerebro de rata

Este video muestra un método para aislar pericitos cerebrales del cerebro de un ratón. Las células aisladas se cultivan en medios específicos de pericitos para promover la proliferación de pericitos.

Aislamiento y cultivo de pericitos cerebrales de ratón

Este video muestra un método para aislar los tubos endoteliales del parénquima cerebral de ratón. A través de una combinación de digestión enzimática y disociación mecánica, el proceso produce un tubo intacto con células endoteliales.

Preparación de tubos endoteliales cerebrales a partir de arteriolas parenquimatosas de ratón

Las células endoteliales microvasculares cerebrales (BMEC) están interconectadas por proteínas de unión específicas que forman una barrera altamente regulada que separa la sangre y el sistema nervioso central (SNC), la llamada barrera hematoencefálica (BBB). El aislamiento de las células endoteliales microvasculares primarias del cerebro murino, como se discute en este protocolo, permite estudios detallados in vitro de la BHE.

Aislamiento de células primaria murino cerebro endoteliales microvasculares

Las células endoteliales vasculares desempeñan un papel importante en muchos trastornos cardiovasculares importantes. Este artículo describe un método simple para aislar y expandir las células endoteliales de la aorta del ratón sin usar ningún equipo especial. Nuestro protocolo proporciona un medio eficaz para identificar mecanismos en la fisiopatología de las células endoteliales.

Aislamiento y cultivo primario de células endoteliales aórticas de ratón

Describimos un protocolo que permite la purificación del compartimento vascular del cerebro del ratón. Los vasos cerebrales aislados incluyen células endoteliales unidas por uniones estrechas y rodeadas por una lámina basal continua, pericitos, células musculares lisas vasculares, así como membranas astrogliales perivasculares.

La purificación de los buques de cerebro de ratón

El mantenimiento de la cobertura de la barrera hematoencefálica es clave para la homeostasis del sistema nervioso central. Este protocolo describe técnicas in vitro para delinear los procesos fundamentales y patológicos que modulan la cobertura de la barrera hematoencefálica.

Ensayos in vitro para evaluar la formación y la interrupción de los vasos sanguíneos de barrera hematoencefálica

Las células endoteliales microvasculares de los músculos esqueléticos (MMEC) forma la pared interna de los capilares musculares y regulan ambos, intercambio de moléculas de líquidos y migración de las células (inmunes) entre sangre y tejido muscular. Aislamiento de MMEC murino primario, como se describe aquí, permite completa investigaciones in vitro de la "unidad myovascular".

Aislamiento de las células endoteliales microvasculares primaria murinas músculo esquelético

La preparación intensiva de "tubos" endoteliales cerebrales intactos de ratón de las arteriolas del parénquima cerebral se ilustra para estudiar la regulación del flujo sanguíneo cerebral. Además, demostramos las fortalezas experimentales de este modelo de estudio endotelial para imágenes de fluorescencia y medición electrofisiológica de vías clave de señalización celular, incluidos los cambios en el [Ca2+] intracelular y el potencial de membrana.

Aislamiento y análisis funcional del endotelio arteriolar del parénquima cerebral de ratón

Aprenda a aislar y cultivar células endoteliales microvasculares cerebrales de ratón neonato. Este protocolo reproducible genera modelos in vitro de la barrera hematoencefálica para estudiar su fisiología y disfunción.

Aislamiento y cultivo de células endoteliales microvasculares del cerebro de ratón

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