Name: Un método optimizado para aislar el epitelio uretral femenino de ratón para análisis unicelular e inmunofluorescencia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: Aprende un método optimizado para aislar el epitelio uretral femenino de ratón mediante digestión enzimática suave. Esta técnica permite obtener suspensiones unicelulares viables para citometría de flujo, inmunofluorescencia y secuenciación de ARN unicelular.

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<table><tbody><tr><td>#5 fine forceps</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% neutral buffered formalin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>10X HBSS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H4641</td><td></td></tr><tr><td>12-well plate</td><td>Corning</td><td>3513</td><td></td></tr><tr><td>30-micron pre-separation filter&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SML0788</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SCR005</td><td></td></tr><tr><td>Adobe Illustrator</td><td>Adobe</td><td></td><td>Para hacer paneles de figuras</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop</td><td>Adobe</td><td></td><td>Para hacer paneles de figuras</td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>12634010</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotic/antimycotic</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5955</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD326 (EpCAM)</td><td>Invitrogen</td><td>17-5791-82</td><td>1:20 dilution, para citometrÃ­a de flujo</td></tr><tr><td>Anti-CD45</td><td>Tonbo</td><td>35-0451-U100</td><td>1:20 dilution, para citometrÃ­a de flujo</td></tr><tr><td>Anti-CDH1 (Rabbit)</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>3195S</td><td>1:200 dilution</td></tr><tr><td>Anti-F4/80</td><td>Tonbo</td><td>50-4801-U100</td><td>1:20 dilution, para citometrÃ­a de flujo</td></tr><tr><td>Anti-F4/80 (Rat)</td><td>Invitrogen</td><td>14-4801-82</td><td>1:200 dilution</td></tr><tr><td>Anti-Keratin 13 (Rabbit)</td><td>Abcam</td><td>ab92551</td><td>1:200 dilution</td></tr><tr><td>Anti-Keratin 4 (Mouse)</td><td>Abcam</td><td>ab9004</td><td>1:200 dilution</td></tr><tr><td>Anti-Keratin 5 (Chicken)</td><td>Biolegend</td><td>905904</td><td>1:800 dilution</td></tr><tr><td>Anti-Keratin 5 (Rabbit)</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>71536</td><td>1:200 dilution</td></tr><tr><td>Anti-p63 (Mouse)</td><td>Biocare medical</td><td>CM163A</td><td>1:200 dilution</td></tr><tr><td>Axioobserver 7</td><td>Zeiss</td><td>431007-9904-000</td><td></td></tr><tr><td>B27 supplement</td><td>Invitrogen</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumin (BSA), fraction V</td><td>Genetix</td><td>PG-2330</td><td></td></tr><tr><td>CD-1 Mice</td><td>Charles River, USA</td><td>Crl:CD1(ICR)</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex BME</td><td>R&amp;D systems</td><td>3445-005-01</td><td></td></tr><tr><td>DAPI solution&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5942</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Qualigens</td><td>Q15405</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Himedia</td><td>MB058</td><td></td></tr><tr><td>di-Sodium Hydrogen Ortophosphate (Na2HPO4)</td><td>Qualigens</td><td>Q15825</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma Aldrich</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-Chicken IgG (H+L) (AF488)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>703-545-155</td><td>1:500 dilution</td></tr><tr><td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) (AF488)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>715-545-151</td><td>1:500 dilution</td></tr><tr><td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) (AF594)</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>715-585-151</td><td>1:500 dilution</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) (AF594)</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>711-585-152</td><td>1:500 dilution</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) (AF647)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>711-605-152</td><td>1:500 dilution</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rat IgG (H+L) (AF647)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>712-605-153</td><td>1:500 dilution</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rat IgG (H+L) (AF594)</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>712-585-153</td><td>1:500 dilution</td></tr><tr><td>EGF</td><td>PeproTech</td><td>AF-315-09</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Himedia</td><td>GRM938</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Supelco</td><td>1.00983</td><td></td></tr><tr><td>Eukitt mounting media&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>3989</td><td></td></tr><tr><td>FGF10</td><td>PeproTech</td><td>450-61</td><td></td></tr><tr><td>Filter cap sorting tubes</td><td>&nbsp;Falcon/Corning</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Ghost Dye&trade; Violet 450</td><td>Tonbo biosciences</td><td>13-0863-T100</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Invitrogen</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol anhydrous</td><td>Merck</td><td>DA1P692899</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Polysciences</td><td>24243</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Horse serum</td><td>Gibco</td><td>26050088</td><td></td></tr><tr><td>Kaluza Analysis</td><td>Beckman Coulter</td><td>Kaluza Analysis 2.4</td><td>Análisis de datos de citometrÃ­a de flujo</td></tr><tr><td>Magnesium chloride (MgCl2)</td><td>Qualigens</td><td>Q15535</td><td></td></tr><tr><td>Mouse TruStain FcX (anti-mouse CD16/32 )</td><td>Biolegend</td><td>101320</td><td></td></tr><tr><td>N-acetyl cysteine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>Nicotinamide&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>Noggin&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>AF-250-38</td><td></td></tr><tr><td>n-Propyl gallate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3130</td><td></td></tr><tr><td>Paraffin wax&nbsp;</td><td>Qualigens</td><td>Q19215</td><td></td></tr><tr><td>Potassium chloride (KCl)</td><td>Qualigens</td><td>Q13305</td><td></td></tr><tr><td>Potassium dihydrogen orthophosphate (KH2PO4)</td><td>Qualigens</td><td>19465</td><td></td></tr><tr><td>Primocin</td><td>Invivogen</td><td>ant-pm-05</td><td></td></tr><tr><td>RBC Lysis Buffer (10X)</td><td>Tonbo biosciences</td><td>TNB-4300-L100</td><td></td></tr><tr><td>Retinoic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R2625</td><td></td></tr><tr><td>Rocki&nbsp; (Y-27632)</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>13624S</td><td></td></tr><tr><td>R-spondin 1</td><td>PeproTech</td><td>315-32</td><td></td></tr><tr><td>Sodium azide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr>

un método optimizado para aislar el epitelio uretral femenino de ratón para análisis unicelular e inmunofluorescencia

An Optimized Method To Isolate Female Mouse Urethral Epithelium For Single-Cell And Immunofluorescence Analysis

Un método optimizado para aislar el epitelio uretral femenino de ratón para análisis unicelular e inmunofluorescencia

The urethra, lined by epithelial cells, serves as the conduit for urine outflow from the body. The epithelial lining of the urethra comprises distinct ...

an-optimized-method-to-isolate-female-mouse-urethral-epithelium-for

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este video se muestran los métodos para inducir transuretral infecciones del tracto urinario ratón y cuantificar la extensión de las infecciones resultantes.

Inducción transuretral de infección del tracto urinario ratón

Aquí se describe un rendimiento de alta...

Un alto rendimiento In situ Método de hibridación para caracterizar los patrones de expresión de ARNm en el ratón Fetal del tracto urogenital inferior

Un modo eficaz de aislar los linfocitos de ratón tracto genital se describe. Este método tiene la ventaja de digestión enzimática y separación por gradiente de Percoll para permitir el aislamiento eficiente. Esta técnica es también adaptable a para su uso en otras...

Aislamiento de linfocitos de ratón del tracto genital Mucosa

Fuente: Yang, E., et al. Aislamiento de comunidades bacterianas intracelulares individuales generadas a partir de un modelo murino de infección urinaria para análisis de células individuales posteriores. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demuestra el aislamiento manual de células epiteliales individuales que contienen comunidades bacterianas intracelulares de la vejiga de ratón infectada mediante micropipeteo oral, permitiendo el análisis posterior de poblaciones viables de E. coli asociadas al...

Aislamiento de células epiteliales de la vejiga del ratón que contienen comunidades bacterianas intracelulares

En este video, describimos el procedimiento para la disección del sistema urogenital o UGS de un modelo de ratón macho. Este UGS se disecciona ex vivo para aislar la glándula prostática y estudiar su papel en el desarrollo del cáncer de próstata.

Extracción de próstata del sistema urogenital de ratón: una técnica para separar la glándula prostática de otros órganos del sistema urinario y genital en ratones machos

El modelo establecido de cateterización transuretral de ratones permite el estudio de patologías de vejiga, incluyendo infección del tracto urinario, pero puede realizarse solamente en las hembras. Un nuevo modelo de hombre instilación transuretral, presentado aquí, permitirá que la investigación en un área marcada por fuertes diferencias clínicas y epidemiológicas entre los sexos.

Infección del tracto urinario en un modelo Animal pequeño: cateterización transuretral de ratones machos y hembras

Este protocolo describe un método sencillo de aislar a las células epiteliales individuales, vejiga infectada de un modelo murino de infección del tracto urinario.

Aislamiento de las comunidades bacterianas intracelulares solo generados a partir de un modelo murino de infección del tracto urinario para posteriores análisis unicelular

Este protocolo describe la microdisección asistida por transilluminación de segmentos de tubulos seminiferosos de ratón adultos que representan etapas específicas del ciclo epitelial seminferoso, y los tipos celulares en el mismo, y la inmunodetención posterior de preparaciones de calabaza y segmentos de tubérculos intactos.

Disección asistida por transilluminación de etapas específicas del ciclo epitelial seminiferoso del ratón para análisis de inmunodetención aguas abajo

Se presenta un método para la microdisección del oviducto de ratón que permite la recolección de los segmentos individuales mientras se mantiene la integridad del ARN. Además, se describe el procedimiento de disociación de células oviductales no enzimáticas. Los métodos son apropiados para el posterior análisis de genes y proteínas de los segmentos oviductales funcionalmente diferentes y las células oviductales disociadas.

Microdisección y disociación del oviducto murino: identificación de segmentos individuales y aislamiento unicelular

Este protocolo describe metodologías para establecer organoides epiteliales endometriales de ratón para la expresión génica y análisis histológicos.

Establecimiento de organoides endometriales 3D a partir del útero del ratón

Este protocolo describe un método de un día para el aislamiento de células epiteliales de trompas de Falopio humanas. Las células epiteliales aisladas se pueden sembrar en cultivo bidimensional (2D) o disociarse en suspensiones unicelulares y utilizarse en experimentos posteriores, incluida la citometría de flujo y la secuenciación de ARN unicelular.

Un método eficiente para extraer epitelios de trompas de Falopio humanas para análisis de células individuales

Aprende un método optimizado para aislar el epitelio uretral femenino de ratón mediante digestión enzimática suave. Esta técnica permite obtener suspensiones unicelulares viables para citometría de flujo, inmunofluorescencia y secuenciación de ARN unicelular.

Un método optimizado para aislar el epitelio uretral femenino de ratón para análisis unicelular e inmunofluorescencia

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