Name: Producción y purificación recombinante de hidrofobina SC16 a partir de Escherichia coli y monitorización de su autoensamblaje mediante ensayos de fluorescencia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: Aprende a producir y purificar la hidrofobina SC16 de Escherichia coli bajo condiciones nativas no reductoras. Monitorea su autoensamblaje mediante ensayos de fluorescencia con tioflavina T para evaluar la formación de rodlets amiloides.

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<table><tbody><tr><td>2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid (MES)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>145224-94-8</td><td>Componente de tampón para ensayos de autoensamblaje</td></tr><tr><td>Tubo de poliestireno de fondo redondo de 5 mL</td><td>Falcon</td><td>352054</td><td>Usado para ensayos de autoensamblaje de bajo rendimiento</td></tr><tr><td>Microplaca de poliestireno negra de 96 pocillos</td><td>Grenier</td><td>655076</td><td>Usado para mediciones de fluorescencia en lector de microplacas</td></tr><tr><td>Solución de acrilamida/Bis-acrilamida (29:1) (40%)</td><td>BioShop</td><td>ACR004.500</td><td>Usado para preparar geles de SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Ágar</td><td>BioShop</td><td>AGR002.1</td><td>Ágar usado para hacer placas LB resistentes a ampicilina</td></tr><tr><td>Ampicilina</td><td>IBI Scientific</td><td>IB02040</td><td>Antibiótico usado en placas de LB-ágar</td></tr><tr><td>Matraces Fernbach de 2,8 L con deflectores</td><td>Fisher Scientific</td><td>955239</td><td>Usados para el crecimiento de cultivos bacterianos de gran volumen</td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoetanol</td><td>TCI Chemicals</td><td>60-24-2</td><td>Agente reductor usado en la preparación de muestras de SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Columna (columna de gravedad de gravedad de 1,5 cm de diámetro)</td><td>Bio-Rad</td><td>7371522</td><td>Usado para la purificación por afinidad de níquel</td></tr><tr><td>Tubo de diálisis (MWCO de 3500 kDa)</td><td>BioDesign</td><td>D302</td><td>Usado para el intercambio de tampón durante la purificación</td></tr><tr><td>Filtro de emisión</td><td>Edmund Optics</td><td>84080</td><td>Usado para ensayos ThT (494 nm, paso de banda de 20 nm)</td></tr><tr><td>Filtro de excitación</td><td>Edmund Optics</td><td>67012</td><td>Usado para ensayos ThT (438 nm, paso de banda de 24 nm)</td></tr><tr><td>Lector de microplacas de fluorescencia</td><td>Tecan</td><td>Infinite F200 Pro</td><td>Usado para medir la intensidad de fluorescencia de ThT</td></tr><tr><td>Baño de agua con placa caliente</td><td>Lab Fish</td><td>HS5C</td><td>Usado para el montaje del baño de agua con monitoreo de temperatura</td></tr><tr><td>Ácido clorhídrico (HCl)</td><td>Fisher Chemical</td><td>A144-212</td><td>Usado para el ajuste de pH de los tampones</td></tr><tr><td>Imidazol</td><td>TCI Chemicals</td><td>288-32-4</td><td>Usado en la purificación IMAC (tampones de lavado y elución)</td></tr><tr><td>Isopropil &beta;-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>367-93-1</td><td>Induce la expresión de proteínas en E. coli</td></tr><tr><td>Caldo LB (Lennox)</td><td>BioShop</td><td>LBL405.5</td><td>Medio de crecimiento para cultivos bacterianos</td></tr><tr><td>Centrífuga refrigerada de baja velocidad</td><td>Beckman Coulter</td><td>360291</td><td>Usada para pelletizar células antes del almacenamiento</td></tr><tr><td>Perlas de agarosa NTA de níquel</td><td>GoldBio</td><td>H-350-50</td><td>Resina usada para la purificación por afinidad de proteínas marcadas con His</td></tr><tr><td>Plásmido SC16</td><td>BioBasic</td><td>N/A</td><td>Construcción de ADN personalizada que codifica la proteína de fusión H-GB1-SC16</td></tr><tr><td>E. coli competente SHuffle T7 Express</td><td>New England Biolabs</td><td>C3029J</td><td>Cepa hospedadora usada para la expresión de proteínas recombinantes</td></tr><tr><td>Cloruro de sodio (NaCl)</td><td>BioShop</td><td>SOD001.5</td><td>Componente del tampón y regulador de fuerza iónica</td></tr><tr><td>Hidróxido de sodio (NaOH)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS255-1</td><td>Usado para el ajuste de pH de los tampones</td></tr><tr><td>Fosfato de sodio</td><td>BioShop</td><td>SPD579.1</td><td>Componente del tampón para mantener el pH</td></tr><tr><td>Espectrofotómetro</td><td>Pharmacia Biotech</td><td>5096</td><td>Usado para la cuantificación de SC16</td></tr><tr><td>Tioflavina T (ThT)</td><td>Acros Organics</td><td>2390-54-7</td><td>Colorante fluorescente usado para monitorear el autoensamblaje de proteínas</td></tr><tr><td>Proteasa trombina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>04-04-9002</td><td>Usada para la clivación de la proteína de fusión H-GB1-SC16</td></tr><tr><td>Tris(hidroximetil)aminometano (Tris)</td><td>BioShop</td><td>TRS001.5</td><td>Tampón usado en soluciones de purificación y ensayo</td></tr><tr><td>Centrífuga refrigerada de alta velocidad</td><td>Sorvall</td><td>46915</td><td>Usada para aclarar el lisado después de la lisis celular</td></tr><tr><td>Configuración de SDS-PAGE</td><td>Bio-Rad</td><td>1658000EDU</td><td>Usado para preparar y ejecutar geles de SDS-PAGE</td></tr></tbody></table>

producción y purificación recombinante de hidrofobina sc16 a partir de escherichia coli y monitorización de su autoensamblaje mediante ensayos de fluorescencia

Recombinant Production And Purification of Hydrophobin SC16 From Escherichia coli And Monitoring of Its Self-Assembly Using Fluorescence Assays

Producción y purificación recombinante de hidrofobina SC16 a partir de Escherichia coli y monitorización de su autoensamblaje mediante ensayos de fluorescencia

Hydrophobins are small amphipathic proteins that self-assemble at hydrophobic&#8211;hydrophilic interfaces to form stable waterproof coatings over fungal ...

recombinant-production-purification-hydrophobin-sc16-from-escherichia

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

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